In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy In Vivo

Cette nouvelle technique d’imagerie mésoscopique en temps réel des traces de CSF florescentes à travers le crâne intact de souris vivantes peut être utilisée pour évaluer le transport glymphatique. Le principal avantage est que cette technique permet des mesures dynamiques des traceurs intracistraux in vivo à une fraction du coût d’autres modalités d’imagerie. Les procédures requises pour placer la plaque de tête sur la canule magna cisterna sont simples et peu invasives, mais nécessitent une pratique à effectuer correctement.

La démonstration visuelle des étapes critiques de cette méthode est nécessaire pour maximiser la qualité de l’image et permettre des comparaisons reproductibles entre différentes souris et groupes expérimentaux. Après avoir confirmé un manque de réponse à pincement des pieds humide le cou et la tête avec de l’eau stérile et raser la fourrure humidifié. Essuyez la peau exposée à l’aide d’un écouvillon d’alcool pour enlever les poils résiduels et placez la souris dans un cadre stéréotaxique au-dessus d’un tampon à température contrôlée.

Appliquer de l’onguent sur les yeux des animaux et nettoyer la peau exposée à l’l’l’œil chlorhexidine. Après 2 minutes, retirer la chlorhexidine à l’alcool et appliquer une solution d’iodone. Lorsque l’iodone a séché injecter analgésie sous-cutanée dans le haut du crâne et le cou.

À partir de la partie du cou qui couvre la croûte occipitale, faire une coupe médiane dans la peau qui recouvre continue rostrally vers la ligne intraorbitale. Étendre l’incision latéralement à la frontière où le muscle temporal s’insère dans le crâne et enlever toute la peau de l’incision fusitforme pour exposer les os frontaux et pariétals. Irriguer le crâne avec salin stérile, et utiliser des cotons-tiges pour nettoyer la surface jusqu’à ce qu’il soit exempt de débris et de cheveux.

Après l’insertion de la cisterna magna cannula appliquer un mélange de ciment dentaire et de colle cyanoacrylate sur le côté ventral de la plaque de tête autour de la frontière. Placez la plaque de tête sur le crâne de sorte que la bordure antérieure de la plaque s’aligne avec la pointe postérieure de l’os nasal et la bordure postérieure s’aligne avec l’aspect antérieur de l’os interpariétal en s’assurant que la suture sagittale est centrée et droite par rapport à la fenêtre. Il est important de s’assurer que la plaque de tête est fixée et qu’elle n’obstrue pas le champ de vision de la cannulation magna cisterna.

Utilisez quelques gouttes d’accélérateur de colle pour fixer la position de la plaque de tête et combler les lacunes restantes avec le mélange de ciment. Collez la cisterna magna cannula à la plaque de tête et utilisez la plaque de tête pour placer la souris dans le porte-tête en position fixe. Placez soigneusement la souris et la pompe d’infusion attachées à la canule sur un chariot pour le transport vers le macroscope et placez le porte-tête sur la scène du macroscope.

Assurez-vous que la ligne de la pompe à seringues à la canule magna cisterna n’est pas tendue et qu’elle n’a pas de plis. Observez la fréquence respiratoire et la coloration rose des muqueuses pour confirmer une bonne oxygénation. Allumez la caméra macroscope et la diode électroluminescente et démarrez le mode live.

Ajustez le grossissement du champ d’imagerie de sorte que la suture nasofrontale en haut du champ et la suture lambdoid au fond puissent clairement être visualisées. Une fois en place, tapez le porte-tête au stade macroscope et concentrez le macroscope sur le crâne exposé jusqu’à ce que le plan focal soit situé sur les côtés latéraux des os pariétals postérieures aux sutures coronaires. Pour l’infusion de traceur CSF, réglez la pompe d’infusion au taux et au volume appropriés et réglez la longueur d’onde d’excitation et le temps d’exposition appropriés pour le traceur pour chaque canal.

Vérifiez ensuite que la fonction de déclenchement du macroscope est correcte avant d’initier simultanément l’infusion du traceur et l’imagerie. Pendant l’imagerie, les sutures naso frontales, sagittales, coronal et lambdoid peuvent être facilement identifiées. Une fois que le traceur de CSF a été infusé dans la magna de cisterna la fluorescence de traceur est d’abord observée dans de grandes piscines de CSF sous-arachnoïdien à la citerne olfactofrontal et à la citerne quadrigeminal près de la cavité pinéale et par la suite entourant les artères cérébrales moyennes.

Les traceurs de CSF entrent alors dans leur cerveau le long des espaces peri vasculaires des branches corticales de peal de l’artère cérébrale moyenne. L’imagerie de transport de CSF après des dommages traumatiques de cerveau indique traceur d’abord à la citerne olfactofrontal mais l’afflux glymphatic le long des espaces périivasculaires corticals est complètement aboli sur le côté de la blessure. L’analyse quantitative des images in vivo démontre que la zone d’afflux ipsilateral est diminuée de près d’un tiers par rapport à l’hémisphère contralatéral.

Pour éviter les artefacts de mouvement et les changements dans le plan focal n’oubliez pas de fixer correctement la plaque de tête et le porte-plaqueau et de vérifier le niveau d’anesthésie de l’animal. Après l’expérience, les résultats de l’imagerie in vivo peuvent être validés en quantifiant la pénétration du traceur à l’aide de la technique réelle Cette technique permet l’étude du système glymphatique d’une manière physiologique et mini-invasive et peut aider à répondre aux questions futures sur l’hydrodynamique CSF dans la santé et la maladie.