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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
A Hydrogen-Deuterium Exchange Mass Spectrometry (HDX-MS) Platform for Investigating Peptide Biosynthetic Enzymes

Une plate-forme de spectrométrie de masse d’échange hydrogène-deutérium (HDX-MS) pour étudier les enzymes biosynthétiques peptidiques

Full Text
8,753 Views
11:32 min
May 4, 2020

DOI: 10.3791/61053-v

Yeganeh Habibi1, Christopher J. Thibodeaux1

1Department of Chemistry,McGill University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Les synthetases de lanthipeptide catalysent les réactions en plusieurs étapes pendant la biosynthèse des produits naturels peptidiques. Ici, nous décrivons un flux de travail continu, ascendant, de spectrométrie de masse d’échange hydrogène-deutérium (HDX-MS) qui peut être employé pour étudier la dynamique conformationnelle des synthetases de lanthipeptide, aussi bien que d’autres enzymes semblables impliquées dans la biosynthèse de produit naturel de peptide.

Ce protocole peut fournir des informations spécialement résolues sur la dynamique conformationnelle des protéines. Ce qui peut aider à identifier les régions fonctionnellement importantes dans les protéines d’intérêt. Cette technique sonde la dynamique conformationnelle des protéines dans des conditions proches de leur origine.

Sans qu’il soit nécessaire de marquer les protéines à l’aide d’une quantité nanomolaire de matériau pour chaque réaction. Commencez par préparer des échantillons de référence non deutérés pour la protéine d’intérêt en trois exemplaires, dans des tubes de 500 microlitres. Trempez les échantillons avec le volume approprié de tampon de trempe par tube pour obtenir une lecture de pH-mètre de 2,5.

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Biochimie Numéro 159 Spectrométrie de masse d’échange hydrogène-deutérium biochimie enzymologie biosynthèse produits naturels peptides

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