Instillation intratrachéale des cellules souches chez les rats néonatals à terme

Décrit est un protocole pour effectuer la transplantation intratrachéale des cellules stromales mésenchymales (MSCs) par injection intratrachéale dans les rats néonatals terme. Cette technique est une option cliniquement viable pour l’administration de cellules souches et de médicaments dans les poumons néonatals de rat pour évaluer leur efficacité.

L’instillation intratrachéale est une biotechnique clinique pour la livraison de cellules souches et de médicaments dans un poumon néonatal afin d’évaluer l’efficacité de Chilman. Cette technique peut être de bonne foi pour une utilisation avec une variété d’application primaire chez un rat néonatal et est une mesure relativement facile et rentable pour le traitement des maladies pulmonaires. Le cinquième jour postnatal, retenir les chiots rat Sprague-Dawley anesthésiés, sur un support d’intubation à angle de 60 degrés.

Et apposer du ruban adhésif d’étiquetage de laboratoire sur les quatre membres de chaque chiot pour les fixer en place. Appliquez du ruban adhésif sous chaque nez pour fixer les têtes. Et localiser le premier cou pour la trachéotomie de perforation.

Utilisez un tampon de préparation à 75 % d’alcool pour désinfecter la zone d’incision. Et faire une incision verticale de 3 centimètres au-dessus de la trachée pour éviter d’endommager les artères carotides. Utilisez des pinces coniques incurvées sans crochet pour dissocier les couches de graisse et de muscle pour localiser la trachée.

Lorsque la trachée peut être observée, utilisez la pince à épiler pour saisir la trachée et utilisez une seringue de 100 microlitres équipée d’une aiguille de calibre 30 pour injecter une fois dix de la cinquième luciferase luciferase GFP étiquetée cellules stromal mésenchymales dans 30 microlitres de solution saline dans la trachée, pendant la phase inspiratoire. Lorsque toutes les cellules ont été injectées, fermer l’incision avec 160 points de soie lissant le nœud aussi étroitement que possible. Et couper les extrémités de la suture aussi court que possible.

Ensuite, laissez le chiot se remettre de l’anesthésie, dans un endroit chaud avec surveillance jusqu’à ce qu’il soit chaud, rose, et capable de mouvement spontané avant de retourner l’animal dans sa cage. Pour suivre les cellules stromales humaines transplantées 15 minutes après que les rats se sont remis de la chirurgie, injectez intraperitoneally les chiots ré-anesthésiés avec 125 milligrammes par kilogramme de sel de potassium luciferien dans PBS. 10 minutes après l’injection, utilisez un système d’imagerie pour les petits animaux pour acquérir des images séquentielles à intervalles de 5 à 15 secondes avec un binning moyen, un arrêt de 1 f et un champ de vision de 26 centimètres.

Utilisez ensuite le logiciel d’imagerie pour quantifier l’activité de luminescence des poumons en fonction des régions d’intérêt automatiques. Un niveau élevé d’expression de GFP est observé dans luciferase firefly étiqueté cellules souches mésenchymales humaines. Les cellules souches mésenchymales peuvent être encore caractérisées par leur expression de marqueur de surface cellulaire et leur capacité à se différencier en ostéocytes, chondrocytes et adipocytes.

La formation image de luminescence des cellules mésenchymales humaines transplantées dans VIVO, indique une absence de signalisation luminescente dans les régions pulmonaires des rats traités avec la solution saline normale. Chez les rats traités avec des cellules souches mésenchymales, la luminescence est observée dans la trachée et les régions pulmonaires centrales de ces animaux. En effet, dans cette analyse représentative, la quantification de l’intensité de luminescence a indiqué que les rats traités avec les cellules souches mésenchymales ont exhibé une augmentation approximativement 13 fois de l’activité de luminescence comparée aux rats traités avec la solution saline normale.

Lorsque vous essayez cette procédure, il est important de disséquer et d’isoler la trachée sans limiter les artères environnantes. Cette technique permet d’étudier les effets de l’administration intratracheal des cellules et des drogues de la maladie néonatale de Palmer utilisant des rayons avec le mode du patient humain.