Name: Synthèse de nanoparticules d’or modifiées Aptamer-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine pour l’administration ciblée de médicaments (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-23T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Découvrez la synthèse de nanoparticules d'or modifiées AS1411-g-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine pour une administration ciblée aux cellules cancéreuses. Cette méthode réduit la toxicité et améliore l'efficacité thérapeutique.

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Cette recherche a été financée par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (31700840); le projet de recherche scientifique clé de la province du Henan (18B430013, 18A150049). Cette recherche a été soutenue par le Nanhu Scholars Program for Young Scholars de XYNU. Les auteurs tiennent à remercier Zebo Qu, étudiant en licence au College of Life Sciences de XYNU, pour ses travaux utiles. Les auteurs tiennent à remercier le Centre d’analyse et de test de XYNU pour l’utilisation de leur équipement.

ATTENTION : Assurez-vous de consulter toutes les fiches signalétiques (FS) pertinentes avant d’utiliser tous les produits chimiques. Plusieurs des produits chimiques utilisés pour la préparation des copolymères et des nanoparticules sont extrêmement toxiques. Les nanoparticules présentent également des dangers potentiels. Assurez-vous d’utiliser toutes les pratiques de sécurité appropriées et l’équipement de protection individuelle, y compris les gants, le sarrau de laboratoire, les capuches, les pantalons pleine longueur et les chaussures à bout fermé.
1. Synthèse du polyéthylène glycol double-carboxyle (CT-PEG)33
<ol><li>Ajouter 1,46 g (14,6 mmol) d’anhydride succinique (SA) et 209 mg (1,71 mmol) de 4-diméthylaminopyridine (DMAP) dans une fiole de fond ronde de 100 mL.</li>
	<li>Ajouter 15 mL de tétrahydrofurane anhydre (THF) dans la fiole utilisée à l’étape 1.1 et installer un bouchon en verre. Maintenir le ballon à 0 °C pendant 30 min.</li>
	<li>Ajouter 4,28 g (4,28 mmol) de polyéthylène glycol (PEG) et 1,8 mL (12,8 mmol) de triéthylamine (TEA) dans une nouvelle fiole.</li>
	<li>Ajouter 15 mL de THF anhydre dans la fiole utilisée à l’étape 1.3 et installer un bouchon en verre. Transer lentement la solution dans le ballon utilisé à l’étape 1.2, à l’aide d’une seringue sous atmosphère d’azote.</li>
	<li>Agiter la solution à 0 °C pendant 2 h, puis poursuivre la réaction à température ambiante (TA) pendant une nuit.</li>
	<li>À l’aide d’un évaporateur rotatif (40 °C, 0,1 MPa), concentrer la solution de réaction et éliminer le solvant THF.</li>
	<li>A TA, dissoudre la solution réactionive de l’étape 1.6 dans 15 mL de 1,325 g/mL de dichlorométhane (DCM), puis ajouter 15 mL d’éther diéthylique froid(Et2O)pour obtenir le produit de précipitation (diacide de polyéthylène glycol). Retirez le solvant à l’intermédiaire du papier filtre. Remarque : L’étape de précipitation peut être répétée 3x.</li>
	<li>Sécher les précipités sous vide à TA pendant 48 h.</li>
</ol>2. Synthèse du copolymère PEI-g-PEG
<ol><li>Ajouter 305,47 mg de CT-PEG de l’étape 1.8 et 5 mL de diméthylsulfoxyde (DMSO) dans une fiole et agiter à TA pour que le CT-PEG soit complètement dissous dans le DMSO.</li>
	<li>Dissoudre 49,46 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (EDC) dans 5 mL de DMSO, puis ajouter la solution dans le ballon utilisé à l’étape 2.1 et agiter pendant 30 min à TA.</li>
	<li>Dissoudre 29,69 mg de N-hydroxysuccinimide (NHS) dans 5 mL de DMSO et ajouter la solution dans la fiole utilisée à l’étape 2.1. Continuer à remuer à RT pendant 3 h.</li>
	<li>Dissoudre 28,6 μL de polyéthylèneimine (PEI) dans 10 mL de DMSO et ajouter la solution goutte à goutte dans la fiole utilisée à l’étape 2.1. Remuer pendant 3 jours au moins.</li>
	<li>Transférer la solution réagie de l’étape 2.4 dans un sac de dialyse (coupure de poids moléculaire de 1 000 [MWCO]). Placer le sac de dialyse dans un bécher de 1 L avec 500 mL d’eau ultrapure comme dialysat. Changer l’eau ultrapure toutes les 12 h pendant 3 jours.</li>
	<li>Transattribuer la solution à l’étape 2.5 dans un autre sac de dialyse (10 000 MWCO). Placer le sac de dialyse dans un bécher de 1 L avec 500 mL d’eau ultrapure comme dialysat. Changer l’eau ultrapure toutes les 12 h pendant 3 jours.</li>
	<li>Concentrer la solution de l’étape 2.6 à l’aide d’un évaporateur rotatif (40 °C, 0,1 MPa) et sécher l’échantillon pour obtenir la poudre PEI-g-PEG.</li>
</ol>3. Synthèse de PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Dissoudre 5 mg de PEI-g-PEG préparé (étape 2.7) dans 5 mL d’eau ultrapure dans une nouvelle fiole et l’adapter à un bouchon en verre.</li>
	<li>Ajouter 100 mL de solution HAuCl4 de 0,3 mM dans la fiole et agiter la solution pendant 3 h à TA. Remarque : la couleur de la solution doit changer immédiatement de jaune à orange.</li>
	<li>Ajouter 1 mL de solution de NaBH 4 à1 mg/mL dans le ballon et agiter la solution pendant 3 h à TA. REMARQUE: La solution de réaction devrait instantanément devenir bordeaux.</li>
	<li>Dialyser le produit réactionnel à l’aide d’un sac de dialyse (1 000 MWCO) pendant 3 jours comme décrit à l’étape 2.5 pour obtenir la solution PEI-g-PEG@AuNPs.</li>
</ol>4. Synthèse de DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Ajouter 1 mL de solution DOX à 2,2 mg/mL et 20 mL de solution PEI-g-PEG@AuNPs dans une nouvelle fiole et l’adapter à un bouchon en verre.</li>
	<li>Dissoudre 0,727 mg d’EDC dans 1 mL d’eau ultrapure et ajouter la solution EDC à la fiole utilisée à l’étape 4.1.</li>
	<li>Dissoudre 0,437 mg de NHS dans 1 mL d’eau ultrapure. Ajouter la solution nhs dans le ballon et agiter à TA pendant 1 h.</li>
	<li>Dialyser le produit réactionnel à l’aide d’un sac de dialyse (1 000 MWCO) pendant 3 jours comme décrit à l’étape 2.5 pour obtenir la solution DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs.</li>
</ol>5. Synthèse de AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Ajouter 20 mL de solution DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs et 4OD d’AS1411 (DO = densité optique; 1OD ≈ 33 μg) à une nouvelle fiole.</li>
	<li>Dissoudre 28,76 mg d’EDC dans 1 mL d’eau ultrapure et ajouter la solution EDC à la fiole utilisée à l’étape 5.1.</li>
	<li>Dissoudre 17,27 mg de NHS dans 1 mL d’eau ultrapure. Ajouter la solution nhs à la fiole utilisée à l’étape 5.1 et agiter la réaction pendant 1 h à TA.</li>
	<li>Dialysez le produit de réaction à l’aide d’un sac de dialyse (1 000 MWCO) pendant 3 jours comme décrit à l’étape 2.5 pour obtenir as1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs.</li>
</ol>6. Caractérisation de l’échantillon
<ol><li>Dissoudre le polymère CT-PEG (étape 1.8) et le copolymère PEI-g-PEG (étape 2.7) dans le chloroforme-d dans des tubes de résonance magnétique nucléaire (RMN), respectivement. Analyser les échantillons à l’aide d’un spectromètre RMN 600 MHz équipé d’un aimant supraconducteur de 14,09 T et d’une sonde haute résolution à gradient Z à large bande de 5,0 mm 600 MHz pour confirmer la structure chimique34.</li>
	<li>Disperser les AUNPs, dox et AS1411, et préparer pei-g-PEG@AuNPs (étape 3.4), DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (étape 4.4) et AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs (étape 5.4), respectivement dans de l’eau ultrapure. Ensuite, transférez vers des cuvettes et enregistrez les spectres ultraviolets visibles (UV-vis) à l’aide d’un spectrophotomètre UV-vis.</li>
	<li>Fixez un adhésif double face (~ 2 mm x 2 mm) à la feuille d’aluminium et trempez la solution d’échantillon (PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs et AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs) sur l’ensemble du ruban uniformément. Analyser les échantillons à l’aide d’un analyseur de spectroscopie photoélectronique à rayons X.</li>
	<li>Disperser les solutions PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs et AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs, respectivement, dans de l’eau ultrapure. Ensuite, transférer aux cuvettes et évaluer la distribution de la taille à l’aide de la diffusion dynamique de la lumière.</li>
	<li>Disperser les solutions PEI-g-PEG@AuNPs, DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs et AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs dans de l’eau ultrapure (une goutte d’échantillon par 5 mL d’eau ultrapure pour chaque échantillon). Sonicate pendant 2 h. Trempez la grille de cuivre dans des solutions d’échantillons et séchez sous une lampe infrarouge. Caractériser la morphologie à l’aide d’un microscope électronique à transmission.</li>
	<li>Injecter 1 mg d’AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs dans une cassette de dialyse MWCO de 20 kDa, puis placer dans 80 mL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avec 5 % d’albumine sérique bovine (BSA). Remuer à 37 °C.</li>
	<li>Aux points de temps prédéterminés, recueillir des aliquotes de 100 μL et les remplacer par du PBS frais. Utilisez un spectrophotomètre UV-vis pour mesurer l’intensité de fluorescence DOX des aliquotes.</li>
</ol>7. Dosage CCK-8 des nanoparticules AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs
<ol><li>Cultiver des cellules A549 dans le milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM) complété par 10 % de sérum fœtal bovin, 100 U/mL de pénicilline et 100 μg/mL de streptomycine sous une atmosphère humidifiée de 95 % d’air et de 5 % deCO2 à 37 °C. Remplacez le milieu de culture tous les 2 jours. Utiliser des cellules au passage 5 pour les essais de prolifération cellulaire et de cytotoxicité afin d’évaluer quantitativement la cytotoxicité des nanoparticules as1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs préparées.</li>
	<li>Ajouter 100 μL de solution de nanoparticules dans chaque puits contenant 1 mL de milieu cellulaire. Après la culture pendant 24 h et 48 h, retirez immédiatement le milieu de culture des plaques de culture cellulaire, puis ajoutez immédiatement 300 μL de milieux de culture frais et 30 μL de solutions de kit de comptage cellulaire kit-8 (CCK-8) à chaque puits. Incuber pendant 4 h dans un incubateur deCO2 à 37 °C.</li>
	<li>Transférer 200 μL de solutions de réaction de l’étape 7.2 dans une plaque de 96 puits. Lire la densité optique (DO) de chaque puits à 570 nm avec un lecteur de microplaque.</li>
	<li>Observer la morphologie des cellules à 24 h et 48 h au microscope.</li>
</ol>

<ol><li>Abad, J. M., Bravo, I., Pariente, F., Lorenzo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-tasking+base+ligand%3A+a+new+concept+of+AuNPs+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Multi-tasking base ligand: a new concept of AuNPs synthesis.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 408 (9), 2329-2338 (2016).</li>
<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2019%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2019.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 69 (1), 7-34 (2019).</li>
<li>Jang, B., Kwon, H., Katila, P., Lee, S. J., Lee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+delivery+of+biological+therapeutics+for+multimodal+and+synergistic+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Dual delivery of biological therapeutics for multimodal and synergistic cancer therapies.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 98, 113-133 (2016).</li>
<li>Gansler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixty+years+of+CA%3A+a+cancer+journal+for+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22CA-A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Sixty years of CA: a cancer journal for clinicians.</a> CA-A Cancer Journal for Clinicians. 60 (6), 345-350 (2010).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanism+for+Selective+Cytotoxicity+towards+Cancer+Cells+of+Diselenide-Containing+Paclitaxel+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanism for Selective Cytotoxicity towards Cancer Cells of Diselenide-Containing Paclitaxel Nanoparticles.</a> International Journal of Biological Sciences. 15 (8), 1755-1770 (2019).</li>
<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+ratiometric+loading+of+PTX+and+DOX+based+on+redox-sensitive+mixed+micelles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surfaces+B%3A+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Precise ratiometric loading of PTX and DOX based on redox-sensitive mixed micelles for cancer therapy.</a> Colloids Surfaces B: Biointerfaces. 155, 51-60 (2017).</li>
<li>Blum, R. H., Carter, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adriamycin.+A+new+anticancer+drug+with+significant+clinical+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Adriamycin. A new anticancer drug with significant clinical activity.</a> Annals of Internal Medicine. 80 (2), 249-259 (1974).</li>
<li>de Lima, R. D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-level+laser+therapy+alleviates+the+deleterious+effect+of+doxorubicin+on+rat+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Photochemistry+Photobiology+B%22%5BJournal%5D)">Low-level laser therapy alleviates the deleterious effect of doxorubicin on rat adipose tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Journal of Photochemistry Photobiology B. 196, 111512(2019).</li>
<li>Markowska, A., Kaysiewicz, J., Markowska, J., Huczynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxycycline%2C+salinomycin%2C+monensin+and+ivermectin+repositioned+as+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Bioorganic+%26+Medicinal+Chemistry+Letters%22%5BJournal%5D)">Doxycycline, salinomycin, monensin and ivermectin repositioned as cancer drugs.</a> Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 29 (13), 1549-1554 (2019).</li>
<li>Songbo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+injury+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+Letters%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress injury in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Toxicology Letters. 307, 41-48 (2019).</li>
<li>Ewer, M. S., Ewer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiotoxicity+of+anticancer+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiotoxicity of anticancer treatments.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (9), 547-558 (2015).</li>
<li>Gabizon, A., Shmeeda, H., Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+of+pegylated+liposomal+Doxorubicin%3A+review+of+animal+and+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics of pegylated liposomal Doxorubicin: review of animal and human studies.</a> Clinical Pharmacokinetics. 42 (5), 419-436 (2003).</li>
<li>Xu, X., Ho, W., Zhang, X., Bertrand, N., Farokhzad, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicine%3A+from+targeted+delivery+to+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicine: from targeted delivery to combination therapy.</a> Trends in Molecular Medicine. 21 (4), 223-232 (2015).</li>
<li>Feng, S., Nie, L., Zou, P., Suo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+drug+and+polymer+molecular+weight+on+drug+release+from+PLGA-mPEG+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Polymer+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of drug and polymer molecular weight on drug release from PLGA-mPEG microspheres.</a> Journal of Applied Polymer Science. 132 (6), 41431(2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Temperature-sensitive+Hydrogel+with+VEGF+Loaded+Microspheres+for+Vascularization+and+Bone+Regeneration+of+Femoral+Head+Necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+Letters%22%5BJournal%5D)">Injectable Temperature-sensitive Hydrogel with VEGF Loaded Microspheres for Vascularization and Bone Regeneration of Femoral Head Necrosis.</a> Materials Letters. 229, 138-141 (2018).</li>
<li>Abadeer, N. S., Murphy, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Cancer+Thermal+Therapy+Using+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Cancer Thermal Therapy Using Gold Nanoparticles.</a> The Journal of Physical Chemistry C. 120 (9), 4691-4716 (2016).</li>
<li>Riley, R. S., Day, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticle-mediated+photothermal+therapy%3A+applications+and+opportunities+for+multimodal+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Nanomedicine+and+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticle-mediated photothermal therapy: applications and opportunities for multimodal cancer treatment.</a> WIREs Nanomedicine and Nanobiotechnology. 9 (4), 1449(2017).</li>
<li>Fratoddi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Hydrophilic+Gold+Nanoparticles+as+Carrier+for+Anticancer+Copper%28I%29+Complexes%3A+Loading+and+Release+Studies+for+Biomedical+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomaterials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly Hydrophilic Gold Nanoparticles as Carrier for Anticancer Copper(I) Complexes: Loading and Release Studies for Biomedical Applications.</a> Nanomaterials (Basel). 9 (5), 772(2019).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-loaded+gold+plasmonic+nanoparticles+for+treatment+of+multidrug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Drug-loaded gold plasmonic nanoparticles for treatment of multidrug resistance in cancer.</a> Biomaterials. 35 (7), 2272-2282 (2014).</li>
<li>Dreaden, E. C., Alkilany, A. M., Huang, X., Murphy, C. J., El-Sayed, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+golden+age%3A+gold+nanoparticles+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">The golden age: gold nanoparticles for biomedicine.</a> Chemical Society Reviews. 41 (7), 2740-2779 (2012).</li>
<li>Wei, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+drug+nanomicelles+formed+by+self-assembling+amphiphilic+dendrimer+to+combat+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Anticancer drug nanomicelles formed by self-assembling amphiphilic dendrimer to combat cancer drug resistance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (10), 2978-2983 (2015).</li>
<li>Galluzzi, L., Buque, A., Kepp, O., Zitvogel, L., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+Effects+of+Conventional+Chemotherapy+and+Targeted+Anticancer+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Immunological Effects of Conventional Chemotherapy and Targeted Anticancer Agents.</a> Cancer Cell. 28 (6), 690-714 (2015).</li>
<li>Muddineti, O. S., Ghosh, B., Biswas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+trends+in+using+polymer+coated+gold+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Current trends in using polymer coated gold nanoparticles for cancer therapy.</a> International Journal of Pharmaceutics. 484 (1-2), 252-267 (2015).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methyl+Orange+removal+by+a+novel+PEI-AuNPs-hemin+nanocomposite%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Methyl Orange removal by a novel PEI-AuNPs-hemin nanocomposite.</a> Journal of Environmental Sciences. 53, 278-283 (2017).</li>
<li>Gu, F. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+nanoparticles+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">Targeted nanoparticles for cancer therapy.</a> Nano Today. 2 (3), 14-21 (2007).</li>
<li>Srinivasarao, M., Galliford, C. V., Low, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+the+design+of+ligand-targeted+cancer+therapeutics+and+imaging+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Principles in the design of ligand-targeted cancer therapeutics and imaging agents.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 14 (3), 203-219 (2015).</li>
<li>Liu, Z., Shi, Y., Chen, Z., Duan, L., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+towards+the+use+of+aptamers+in+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Science+Bulletin+%28Chinese+Version%29%22%5BJournal%5D)">Current progress towards the use of aptamers in targeted cancer therapy.</a> Chinese Science Bulletin (Chinese Version). 59 (14), 1267(2014).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Vandghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+LNA-loaded+nanoparticles+of+star-shaped+glucose-core+PCL-PEG+copolymer+for+enhanced+inhibition+of+oncomiR-214+and+nucleolin-mediated+therapy+of+cisplatin-resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Antisense LNA-loaded nanoparticles of star-shaped glucose-core PCL-PEG copolymer for enhanced inhibition of oncomiR-214 and nucleolin-mediated therapy of cisplatin-resistant ovarian cancer cells.</a> International Journal of Pharmaceutics. 573, 118729(2020).</li>
<li>Andghanooni, S., Eskandani, M., Barar, J., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AS1411+aptamer-decorated+cisplatin-loaded+poly%28lactic-co-glycolic+acid%29+nanoparticles+for+targeted+therapy+of+miR-21-inhibited+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">AS1411 aptamer-decorated cisplatin-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles for targeted therapy of miR-21-inhibited ovarian cancer cells.</a> Nanomedicine. 13 (21), 2729-2758 (2018).</li>
<li>Palmieri, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+anti-nucleolin+recombinant+immunoagent+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Human anti-nucleolin recombinant immunoagent for cancer therapy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (30), 9418-9423 (2015).</li>
<li>Pichiorri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+NCL+targeting+affects+breast+cancer+aggressiveness+through+miRNA+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo NCL targeting affects breast cancer aggressiveness through miRNA regulation.</a> Journal of Experimental Medicine. 210 (5), 951-968 (2013).</li>
<li>Hou, S., McCauley, L. K., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+erosion+properties+of+PEG-containing+polyanhydrides%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Bioscience%22%5BJournal%5D)">Synthesis and erosion properties of PEG-containing polyanhydrides.</a> Macromolecular Bioscience. 7 (5), 620-628 (2007).</li>
<li>Nie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+Vaginal+Hydrogels+as+a+Multi-Drug+Carrier+for+Contraception%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injectable Vaginal Hydrogels as a Multi-Drug Carrier for Contraception.</a> Applied Sciences. 9 (8), 1638(2019).</li>
<li>Zou, P., Suo, J., Nie, L., Feng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-responsive+biodegradable+star-shaped+block+copolymers+for+vaginal+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Temperature-responsive biodegradable star-shaped block copolymers for vaginal gels.</a> Journal of Materials Chemistry. 22 (13), 6316-6326 (2012).</li>
<li>Etrych, T., Šubr, V., Laga, R., Říhová, B., Ulbrich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+conjugates+of+doxorubicin+bound+through+an+amide+and+hydrazone+bond%3A+Impact+of+the+carrier+structure+onto+synergistic+action+in+the+treatment+of+solid+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Polymer conjugates of doxorubicin bound through an amide and hydrazone bond: Impact of the carrier structure onto synergistic action in the treatment of solid tumours.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 58, 1-12 (2014).</li>
<li>Safari, F., Tamaddon, A. M., Zarghami, N., Abolmali, S., Akbarzadeh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyelectrolyte+complexes+of+hTERT+siRNA+and+polyethyleneimine%3A+Effect+of+degree+of+PEG+grafting+on+biological+and+cellular+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+Cells%2C+Nanomedicine%2C+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Polyelectrolyte complexes of hTERT siRNA and polyethyleneimine: Effect of degree of PEG grafting on biological and cellular activity.</a> Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 44 (6), 1561-1568 (2016).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le spectre RMN 1H (Figure 2) confirme la synthèse réussie du copolymère CT-PEG et du copolymère PEI-g-PEG. Les poids moléculaires du PEG et de l’Île-du-Prince-Édouard étaient de 1 000 et 1 200, respectivement. De plus, le système catalytique EDC/NHS a été utilisé pour synthétiser le copolymère PEI-g-PEG via des réactions d’amide. Il convient de noter que si les poids moléculaires du PEG et de l’Î.-P.-É. changent pour synthétiser le copolymère PEI-g-PEG, le temps de réaction et le ...

Étant le principal problème de santé publique dans le monde, le cancer est largement caractérisé comme ayant un faible taux de guérison, un taux de récidive élevé et un taux de mortalité élevé1,2. Les méthodes anticancéreuse conventionnelles actuelles comprennent la chirurgie, la chimiothérapie et la radiothérapie3,parmi lesquelles la chimiothérapie est le traitement principal pour les patients atteints de cancer dans la clinique4. Les médicaments anticancéreux utilisés cliniquement comprennent principalement le paclitaxel (PTX)5 et la doxorubicine (DOX)6,7. DOX, un médicament antinéoplasique, a été largement appliqué en chimiothérapie clinique, en raison des avantages de la cytotoxicité du cancer et de l’inhibition de la prolifération des cellules cancéreuses8,9. Cependant, DOX provoque une cardiotoxicité10,11,et la courte demi-vie de DOX restreint son application dans la clinique12. Par conséquent, des porteurs de médicaments dégradables sont nécessaires pour charger dox et libérer subequently d’une manière contrôlée à une zone ciblée.
Les nanoparticules ont été largement utilisées dans les systèmes d’administration de médicaments ciblés et présentent plusieurs avantages dans le traitement du cancer (c.-à-d. rapport surface/volume important, petite taille, capacité d’encapsuler divers médicaments et chimie de surface accordable, etc.) 13,14,15. En particulier, les nanoparticules d’or (AuNPs) ont été largement utilisées dans des applications biologiques et biomédicales, telles que le traitement photothermique du cancer16,17. Les propriétés uniques des AuNPs, telles que la synthèse facile et la fonctionnalisation générale de surface, ont d’excellentes perspectives dans le domaine clinique du traitement du cancer18. En outre, les AuNPs ont été utilisés pour identifier les stratégies d’administration de médicaments, diagnostiquer les tumeurs et surmonter la résistance dans de nombreuses études19,20.
Néanmoins, les AuNPs doivent être davantage adaptés pour surmonter la résistance aux médicaments via une libération locale élevée aux lésions tumorales par perméation et rétention améliorées (EPR), telles que les propriétés de ciblage et d’accessibilité. Les polymères fonctionnalisés AuNPs ont présenté des avantages uniques, tels que l’amélioration de la solubilité dans l’eau des médicaments anticancéreux hydrophobes et le temps de circulation prolongé21,22. Divers polymères biocompatibles ont été utilisés pour les revêtements AuNP, tels que le polyéthylène glycol (PEG), la polyéthylèneimine (PEI), l’acide hyaluronique, l’héparine et la gomme xanthane. Ensuite, la stabilité, ainsi que la charge utile, des AuNPs est améliorée bien23. Plus précisément, PEI est un polymère hautement ramifié qui est composé de nombreuses unités répétitrices d’amines primaires, secondaires et tertiaires24. L’Île-du-Prince-Édouard a une excellente solubilité, une faible viscosité et un haut degré de fonctionnalité, ce qui convient au revêtement sur les AuNPs.
D’autre part, les médicaments anticancéreux doivent être livrés directement aux cellules cancéreuses avec une efficacité de chargement améliorée et une toxicité plus faible pour le traitement des tumeurs métastatiques primaires et avancées25. Les ligands ciblés ont un grand potentiel pour les systèmes d’administration ciblés de médicaments anticancéreux26. Sa sélectivité pour la liaison à la molécule cible confère une spécificité de ciblage des médicaments anticancéreux et augmente l’enrichissement des médicaments dans les tissusmalades 27. Plus de ligands comprennent des anticorps, des polypeptides et de petites molécules. Par rapport à d’autres ligands, les aptamères d’acides nucléiques peuvent être synthétisés in vitro et sont faciles à modifier. AS1411 est un oligonucléotide phosphodiétre de 26 pb non modifié qui forme une structure G-tétramère dimérique stable pour se lier spécifiquement à un récepteur protéique nucléaire cible surexprimé sur les cellules cancéreuses28,29,30. L’AS1411 inhibe la prolifération de nombreuses cellules cancéreuses mais n’affecte pas la croissance des cellules saines31,32. En conséquence, AS1411 a été utilisé pour fabriquer un système d’administration de médicaments ciblé idéal.
Dans cette étude, un copolymère PEI-g-PEG est synthétisé via une réaction d’amide, puis des nanoparticules d’or recouvertes de copolymere PEI-g-PEG (PEI-g-PEG@AuNPs) sont fabriquées. En outre, DOX et AS1411 sont liés séquentiellement à la pei-g-PEG@AuNPs préparée, comme indiqué dans Figure 1. Ce protocole détaillé vise à aider les chercheurs à éviter bon nombre des pièges courants associés à la fabrication de nouveaux pei-g-PEG@AuNPs chargés de DOX et d’AS1411.

<table><tbody><tr><td>4-Diméthylaminopyridine</td><td>Macklin</td><td>D807273</td><td></td></tr><tr><td>A549 cellule</td><td></td><td>ATCC CCL-185TM</td><td></td></tr><tr><td>AS1411</td><td>BBI Life Sciences Corporation</td><td></td><td>5'-d (TTTGGTGGTGGTGGGTGTGTGTGTGG) FL-AS1411 (marqué au fluorophore AS1411)</td></tr><tr><td>Tétrahydrofurane anhydre (THF)</td><td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de comptage cellulaire-8 ( CCK-8)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>96992-500TESTS-F</td><td></td></tr><tr><td>Dichlorométhane</td><td>Médecine traditionnelle chinoise</td><td>80047318</td><td></td></tr><tr><td>Éther diéthylique (Et2O)</td><td>SinoPharm Chemical Reagent Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Macklin</td><td>D806645</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de doxorubicine</td><td>Rhawn</td><td>R017518</td><td></td></tr><tr><td>Ether absolu</td><td>Médecine traditionnelle chinoise</td><td>80059618</td><td></td></tr><tr><td>Microscope électronique à transmission par émission de champ</td><td>FEI Company</td><td>Tecnai G2 F 20</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure d’or(III) trihydraté</td><td>Rhawn</td><td>R016035</td><td></td></tr><tr><td>Laser Particle-size Instrument</td><td>Malvern Instruments Ltd</td><td>ZetasizerNanoZS/ Masterszer3000E</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques</td><td>Dispositifs moléculaires</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de N-(3-Diméthylaminopropyl)-N'-éthylcarbodiimide</td><td>Macklin</td><td>N808856</td><td></td></tr><tr><td>N-Hydroxysuccinimide</td><td>Macklin</td><td>H6231</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel RMN</td><td>Delta 5.2.1</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spectromètre à résonance magnétique nucléaire</td><td>JEOL</td><td>JNM-ECZ600R/S3</td><td></td></tr><tr><td>Origin 8.5</td><td>OriginLab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>V900929-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>Poly(éthylène glycol)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81188</td><td>BioUltra, moyenne Mn ~ 1000</td></tr><tr><td>Solution de poly (éthylèneimine)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>482595</td><td>moyenne Mn ~ 1200, 50 % en poids dans H2O</td></tr><tr><td>Borohydrure de sodium, poudre</td><td>Acros</td><td>C18930</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>85886-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Anhydride succinique</td><td>Médecine traditionnelle chinoise</td><td>30171826</td><td></td></tr><tr><td>Tétrahydrofurane</td><td>Médecine traditionnelle chinoise</td><td>40058161</td><td></td></tr><tr><td>Triéthylamine</td><td>Médecine traditionnelle chinoise</td><td>80134318</td><td></td></tr><tr><td>Spectromètre UV/VIS/NIR</td><td>Lambda950</td> Spectromètre photoélectronique à rayons X <td>Lambda950</td><td></td></tr><tr><td>Thermo</td><td>&ensp ; Fisher&ensp ; </td><td>K-ALPHA 0,5 EV</td><td></td> scientifique</tr></tbody></table>

synthèse de nanoparticules d’or modifiées aptamer-pei-g-peg chargées de doxorubicine pour l’administration ciblée de médicaments

Synthesis of Aptamer-PEI-g-PEG Modified Gold Nanoparticles Loaded with Doxorubicin for Targeted Drug Delivery

En raison de la résistance aux médicaments et de la toxicité dans les cellules saines, l’utilisation de la doxorubicine (DOX) a été limitée dans le traitement clinique du cancer. Ce protocole décrit la conception de poly(éthylénimine) greffée avec des nanoparticules d’or fonctionnalisées de polyéthylène glycol (PEI-g-PEG) avec des aptamères chargés (AS1411) et du DOX par des réactions d’amide. AS1411 est spécifiquement lié avec des récepteurs nucléoline ciblés sur les cellules cancéreuses afin que DOX cible les cellules cancéreuses au lieu des cellules saines. Tout d’abord, le PEG est carboxylé, puis greffé à l’Î.-P.-É. ramifié pour obtenir un copolymère PEI-g-PEG, ce qui est confirmé par une analyse RMN de 1H. Ensuite, les nanoparticules d’or revêtues de copolymère PEI-g-PEG (PEI-g-PEG@AuNPs) sont synthétisées, et DOX et AS1411 sont liés de manière covalente aux AuNPs progressivement via des réactions d’amide. Le diamètre de l’AS1411-g-DOX-g-PEI-g-PEG@AuNPs préparé est d’environ 39,9 nm, avec un potentiel zêta de -29,3 mV, ce qui indique que les nanoparticules sont stables dans l’eau et le milieu cellulaire. Les tests de cytotoxicité cellulaire montrent que les AuNPs chargés de DOX nouvellement conçus sont capables de tuer les cellules cancéreuses (A549). Cette synthèse démontre la disposition délicate des copolymères PEI-g-PEG, des aptamères et des DOX sur les AuNPs qui sont obtenus par des réactions séquentielles d’amide. Ces Aptamères-PEI-g-PEG fonctionnalisés AuNPs fournissent une plate-forme prometteuse pour l’administration ciblée de médicaments dans le traitement du cancer.

1 La spectroscopie RMN H a été utilisée pour confirmer la synthèse réussie du polymère CT-PEG et des copolymères PEI-g-PEG (Figure 2). La figure 2a montre que le signal du proton de méthylène à δ = 3,61 ppm et le signal du proton carboxyle à δ = 2,57 ppm confirment la synthèse réussie des polymères CT-PEG. La figure 2b montre que le signal de proton de méthylène du PEG à δ = 2,6 ppm et le signal...

Dans ce protocole, les nanoparticules d’or modifiées AS1411-g-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine sont synthétisées via des réactions d’amide en trois étapes. Ensuite, la doxorubicine est chargée et administrée pour cibler les cellules cancéreuses pour le traitement du cancer.

Synthèse de nanoparticules d’or modifiées Aptamer-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine pour l’administration ciblée de médicaments

Due to drug resistance and toxicity in healthy cells, use of doxorubicin (DOX) has been limited in clinical cancer therapy. This protocol describes the ...

En raison de la résistance aux médicaments et de la toxicité, l’utilisation de la doxorubicine est limitée en clinique. Ce protocole fournit un support dégradable pour maintenir la libération de cet agent thérapeutique. L’avantage de cette méthode est que le support synthétisé peut être utilisé pour administrer le médicament directement aux cellules cancéreuses, induisant la mort cellulaire dans les cellules cancéreuses uniquement.Pour la synthèse CT-PEG, ajoutez d’abord 1,46 gramme d’anhydride succinique et 209 milligrammes de 4-diméthylaminopyridine dans une fiole à fond rond de 100 millilitres. Ensuite, ajoutez 15 millilitres de tétrahydrofurane anhydre dans le ballon et insérez un bouchon en verre dans le ballon, avant d’incuber la réaction pendant 30 minutes à zéro degré Celsius. Pendant l’incubation, ajoutez 4,208 grammes de PEG, 1,8 millilitre de triéthylamine et 15 millilitres de tétrahydrofurane anhydre dans un nouveau ballon et fermez le ballon à l’aide d’un bouchon en verre.À la fin de l’incubation, à l’aide d’une seringue sous atmosphère d’azote, transférez lentement la deuxième solution dans le premier flacon. Remuez la nouvelle solution pendant deux heures à zéro degré Celsius, avant de poursuivre la réaction à température ambiante pendant la nuit. Le lendemain matin, utilisez un évaporateur rotatif à 40 degrés Celsius et 0,1 mégapascal pour concentrer la solution réactionnelle et éliminer le solvant tétrahydrofurane.Au bout d’une heure, dissoudre la solution réactionnelle dans 15 millilitres de 1,325 gramme par millilitre de dichlorométhane à température ambiante, avant d’ajouter 15 millilitres d’éther diéthylique froid pour obtenir le produit de précipitation du diacide PEG. Retirez ensuite le solvant à l’aide d’un papier filtre et séchez le précipité sous vide pendant 48 heures à température ambiante. Pour la synthèse du copolymère PEI-g-PEG, ajoutez 305,47 milligrammes de précipité CT-PEG et cinq millilitres de DMSO dans un nouveau flacon et agitez la réaction à température ambiante jusqu’à ce que le CT-PEG soit complètement dissous.Ensuite, dissolvez 49,46 milligrammes d’EDC dans cinq millilitres de DMSO et ajoutez la solution dans le flacon. Remuez la réaction pendant 30 minutes à température ambiante, avant de dissoudre 29,69 milligrammes de N-hydroxysuccinimide et cinq millilitres de DMSO et d’ajouter la solution obtenue dans le ballon. Continuez à remuer la réaction pendant trois heures à température ambiante.Vers la fin de l’incubation, dissoudre 28,6 microlitres de PEI dans 10 millilitres de DMSO et ajouter la solution goutte à goutte dans la fiole. Agitez la réaction à température ambiante pendant au moins trois jours. À la fin de l’incubation, transférez la solution récinée dans un sac de dialyse avec une coupure de 1000 poids moléculaire et placez le sac dans un bécher d’un litre contenant 500 millilitres d’eau ultra pure comme dialysat.À la fin de la dialyse, transférez la solution dans un sac de dialyse avec une coupure de 10 000 poids moléculaire et placez le sac dans un bécher d’un litre avec 500 millilitres d’eau ultra-pure comme dialysat. À la fin de la deuxième dialyse, utilisez un évaporateur rotatif à 40 degrés Celsius et 0,1 mégapascal pour concentrer la solution et lyophiliser l’échantillon pour obtenir la poudre PEI-g-PEG. Pour l’enrobage de nanoparticules d’or avec le produit PEI-g-PEG, dissolvez cinq milligrammes de PEI-g-PEG préparé dans cinq millilitres d’eau ultra-pure dans un nouveau ballon et équipez le ballon d’un bouchon en verre.Ajoutez 100 millilitres de solution de chlorure aurique de 0,3 millimolaire dans le ballon et remuez la solution pendant trois heures à température ambiante. Les couleurs doivent passer immédiatement du jaune clair au jaune foncé. À la fin de l’incubation, ajoutez un millilitre d’un milligramme par millilitre de solution de borohydrure de sodium dans le ballon.La couleur doit passer immédiatement du jaune foncé au jaune doré et remuer la solution pendant trois heures supplémentaires à température ambiante. Ensuite, dialysez le produit de réaction avec un sac de dialyse de coupure de 1000 poids moléculaire pendant trois jours, comme il a été démontré pour obtenir la solution de nanoparticules d’or enrobée de PEI-g-PEG. Pour la greffe de doxorubicine sur les nanoparticules d’or revêtues de PEI-g-PEG.Ajoutez un millilitre de solution de doxorubicine de 2,2 milligrammes par millilitre et 20 millilitres de solution de nanoparticules d’or enrobée de PEI-g-PEG dans un nouveau flacon et ajustez le flacon avec un bouchon en verre. Ensuite, dissolvez 0,727 milligramme d’EDC dans un millilitre d’eau ultra pure et ajoutez la solution EDC dans le flacon. Dissoudre 0,437 milligramme de N-Hydroxysuccinimide dans un millilitre d’eau ultra-pure et ajouter la solution de N-Hydroxysuccinimide dans le flacon pour une incubation d’une heure en agitant à température ambiante.À la fin de l’incubation, dialyser le produit de réaction dans un sac de dialyse de coupure de 1000 poids moléculaire pendant trois jours, comme il a été démontré pour obtenir la solution de nanoparticules d’or enrobée de doxorubicine g-PEI-g-PEG. Pour le greffage de l’aptamère AS1411 sur le DOX-g-PEI-g-PEG. Ajoutez 20 millilitres de la solution de nanoparticules d’or enrobée de doxorubicine DOX-g-PEI-g-PEG à une concentration d’environ quatre densités optiques d’AS1411.Dissoudre 28,76 milligrammes d’EDC dans un millilitre d’eau ultra pure et ajouter la solution EDC dans le ballon. Dissoudre 17,27 milligrammes de N-Hydroxysuccinimide dans un millilitre d’eau ultra pure et ajouter la solution de N-Hydroxysuccinimide dans le flacon pour une incubation d’une heure en agitant à température ambiante. Ensuite, dialysez le produit de réaction dans un sac de dialyse de coupure de 1000 poids moléculaire pendant trois jours, comme il a été démontré pour obtenir des nanoparticules d’or enrobées d’AS1411-g-Doxorubicin-g-PEI-g-PEG.La spectroscopie RMN des protons peut être utilisée pour confirmer la synthèse réussie des polymères CT-PEG et PIE-g-PEG. La spectroscopie ultraviolette peut être réalisée pour déterminer la fonctionnalisation réussie et le chargement progressif du copolymère préparé sur des nanoparticules d’or. La spectroscopie photoélectronique à rayons X peut être utilisée pour étudier la liaison chimique du copolymère sur des nanoparticules d’or.Une diffusion dynamique de la lumière peut être effectuée pour déterminer la distribution granulométrique des nanoparticules préparées. Dans cette analyse, la microscopie électronique à transmission a révélé des nanoparticules non groupées avec une morphologie uniforme. L’analyse de la viabilité cellulaire a révélé une diminution du nombre de cellules A549 au fil du temps et en réponse à l’augmentation des concentrations de nanoparticules.Par rapport au groupe de la doxorubicine libre, le nombre de cellules a toutefois augmenté, ce qui indique une toxicité réduite. De plus, l’analyse du profil de libération de doxorubicine révèle que la libération prolongée de doxorubicine à partir de nanoparticules fonctionnalisées a provoqué une diminution des cellules A549. La préparation du copolymère PEI-g-PEG et les étapes de greffage AS1411 sont importantes pour le succès de la mise en œuvre de la procédure.Le même support de médicament peut être obtenu en greffant l’AS1411 avant de greffer les médicaments, mais l’efficacité de charge du médicament sera diminuée.

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Synthèse de nanoparticules d’or modifiées Aptamer-PEI-g-PEG chargées de doxorubicine pour l’administration ciblée de médicaments (Vidéo) | JoVE Journal

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