Surveillance en temps réel de la respiration mitochondriale dans les cellules T primaires humaines différenciées par cytokines

Le métabolisme mitochondrial est un régulateur essentiel de la durabilité et de la mémoire des lymphocytes T. La mesure de la respiration mitochondriale donne donc un aperçu important des propriétés des lymphocytes T. La machine Seahorse peut mesurer divers éléments de la respiration mitochondriale, en temps réel, dans des lymphocytes T primaires humains vivants, sans avoir besoin d’un marquage.

Cette méthode est très appropriée pour surveiller la capacité physique des lymphocytes T et le potentiel de mémoire, qui sont des prédicteurs importants du succès de l’immunothérapie du cancer. Pour commencer, lavez les billes CD3/CD28 en transférant 12,5 microlitres de perles par million de cellules dans un tube de microcentrifugation et en ajoutant 12,5 microlitres de PBS par 12,5 microlitres de perles dans le tube. Ensuite, placez le tube de microcentrifugation sur un aimant approprié pendant une minute, jetez le tampon et remettez en suspension les billes dans le volume d’origine du milieu cellulaire T.