Un modèle de xénogreffe organoïde dérivé d’un patient atteint d’un cancer hépatocellulaire pour étudier l’impact de la régénération hépatique sur la croissance tumorale

La récidive tumorale est un problème très important de la résection de l’accouchement. Dans cette étude, nous essayons de mieux comprendre la croissance tumorale dans un environnement régénératif. Il a été démontré que les organoïdes tumoraux récapitulent histologiquement et génétiquement la tumeur du patient, bien que les modèles in vivo soient rares et manquent de stabilité.

Nous avons réussi à greffer l’organoïde dérivé du patient dans le foie de la souris. Nous l’avons montré à l’aide de deux exemples de cas. Les colorations immunohistochimiques montrent que les organoïdes et la xénogreffe ressemblent à la tumeur d’origine du patient.

Le développement d’organoïdes à partir de la tumeur d’origine ressemble à un modèle plus précis de la tumeur du patient par rapport à d’autres possibilités telles que les cultures cellulaires 2D. L’intégration de ce modèle dans l’environnement complexe de la régénération hépatique aidera à mieux comprendre les interactions existantes entre les cellules tumorales et l’environnement régénératif. Nous espérons que nous acquérons des connaissances dans notre domaine concernant la compréhension de la récurrence du CHC de la résection hépatique.

C’est pourquoi, avec ce modèle, nous voulons créer la base de futurs projets de recherche. Pour commencer, à l’aide d’un scalpel et d’une pince, coupez le tissu cancéreux du foie récolté en petits fragments d’un à deux millimètres carrés. Transférez les morceaux de tissu dans un tube de 15 millilitres contenant cinq millilitres de tampon de dissociation.

Placez le tube sur un dispositif de rotation à 37 degrés Celsius. Après l’incubation, passez le mélange de cellules dans une passoire de cellules de 100 micromètres placée sur un tube de 50 millilitres. Utilisez le piston d’une seringue de cinq millilitres pour écraser les fragments de tissu à travers le filtre.

Ajoutez maintenant cinq millilitres de DMEM avancé complété sur le filtre pour le laver. Transférez le filtrat dans un tube conique de 15 millilitres. Après avoir aspiré le surnageant, remettre la pastille en suspension dans cinq millilitres de tampon de lyse des globules rouges.

Centrifugez à nouveau la suspension pendant cinq minutes à 300 g. Ensuite, mettez le granulé en suspension dans un millilitre de PBS avant de compter. Avant le placage cellulaire, retirez le surnageant de la suspension de la cellule de centrifugation.

Remettez en suspension avec environ un millilitre de matrice de membrane basale dans le tube et placez-le sur de la glace. Pipetez 20 microlitres de suspension cellulaire dans les puits d’une plaque préchauffée à six puits pour créer des gouttes. Après avoir attendu deux à trois minutes, placez la plaque en position inversée dans une armoire à flux pendant cinq minutes.

Transférez ensuite la plaque dans un incubateur pour qu’elle se solidifie. Enfin, ajoutez deux millilitres de milieu de culture organoïde dans chaque puits. La lignée d’organoïdes dérivée du patient présentait les caractéristiques morphologiques de la tumeur d’origine du patient.

Pour commencer, placez une souris anesthésiée en position couchée avec les membres collés vers le bas. À l’aide d’une pince et de ciseaux microchirurgicaux, faites une incision sur le site chirurgical appauvri le long de l’alba linéaire du bas-ventre au cartilage xiphoïde. Insérez les écarteurs dans l’incision, en ajustant la direction de la traction pour obtenir une exposition optimale de la partie supérieure de l’abdomen.

Placez une serviette propre et imbibée de solution saline juste à côté du site d’incision. Maintenant, extériorisez l’intestin grêle et le caïcum sur la serviette humide. Exposez le lobe supérieur droit jusqu’à ce qu’une injection soit possible.

Aspirez le mélange d’organoïdes dans une seringue Hamilton marquée de rinçage. Injectez régulièrement la suspension dans la souris jusqu’à la marque sans bouger l’aiguille. Appliquez une pression avec un coton-tige sur le site d’injection.

Vérifiez ensuite l’abdomen pour toute rupture de lobe ou reflux. Rincez l’abdomen avec 0,5 millilitre de solution saline stérile. Placez une suture courante avec une suture résorbable pour fermer l’abdomen.

La tumeur développée chez la souris ressemblait à la fois aux organoïdes dérivés du patient ainsi qu’à la tumeur d’origine du patient. Pour commencer une résection hépatique mineure, effectuez une laparotomie sur une souris anesthésiée en position couchée. Avec des cotons-tiges humides, poussez le lobe médial vers le crâne pour créer plus d’espace dans le champ chirurgical.

Retournez le lobe latéral gauche du foie vers le crâne pour exposer le lobe caudé et le ligament. Coupez complètement le ligament. Insérez ensuite une ligature sous le lobe latéral du foie.

Maintenant, retournez le lobe latéral gauche du foie vers la caudale et guidez l’extrémité libre gauche de la ligature autour de l’extrémité gauche du lobe latéral gauche du foie. Guidez l’extrémité libre droite autour de l’autre pointe. Utilisez un coton-tige pour appliquer une traction sur le lobe, en vous assurant que la ligature est positionnée au centre.

Faites ensuite un double demi-nœud. Fixez ce nœud avec un autre demi-nœud noué dans l’autre sens sans le serrer complètement. Lorsque la ligature est correctement positionnée, tenez l’extrémité libre crânienne de la ligature avec une pince à pointe émoussée et tirez l’extrémité caudale avec une autre paire de pinces.

Fixez le nœud avec un deuxième nœud fait dans la direction opposée. Coupez près de la ligature sans la couper pour réséquer le foie. Après la résection mineure du lobe hépatique latéral gauche, transect du ligament falciforme.

Retournez le lobe crânien, puis insérez une ligature en dessous et retournez-le caudalement. Maintenant, enroulez les ens libres de la ligature autour de la labiale. Une fois la ligature correctement placée, faites lentement un double demi-nœud.

Serrez complètement un deuxième demi-nœud dans la direction opposée, puis ajoutez un troisième demi-nœud dans la direction opposée. Réséquez le lobe, puis rincez l’abdomen avec une solution saline stérile. Remettez les intestins à leur place anatomique.

Pour fermer l’abdomen, utilisez des pinces pour saisir la peau et le péritoine. Placez un point de suture avec une suture résorbable à l’extrémité supérieure de la ligne d’incision. Effectuez un deuxième point de suture de l’autre côté de l’incision en sortant du côté de la peau.

Faites le nœud fermement en laissant l’extrémité libre sans l’aiguille courte. Laissez l’extrémité de l’aiguille de la maille longue. Terminez la suture par un nœud à l’extrémité inférieure de l’incision.

Nettoyez l’abdomen de tout sang restant. La contribution relative des lobes hépatiques est comparable entre les différentes souris d’une même souche. Le poids moyen du lobe inférieur droit a augmenté à 0,82 % du poids corporel total après une résection mineure.

Une résection majeure a entraîné une augmentation de 0,99 % du poids corporel total. Une résection majeure du lobe supérieur droit a entraîné une augmentation prononcée de son poids par rapport au lobe inférieur droit.