הזרקה תוך חזה: משלוח תרכובות ללב דג הזברה הבוגר

1. הכנת הדג להזרקה תוך חזה

1. תפסו דג זברה בוגר (Danio rerio) עם רשת והעבירו אותו לתמיסת ההרדמה.
2. לאחר 1-2 דקות, כאשר הדג מפסיק לשחות ותנועת האופרקולום מופחתת, געו בדג עם כף פלסטיק כדי לוודא שהוא אינו מגיב למגע כלשהו.
3. מעבירים במהירות ובזהירות את הדג עם הכפית לחריץ של הספוג הרטוב, עם צד הגחון כלפי מעלה. ראש הדג צריך להצביע הרחק מהיד הדומיננטית של המפעיל.

2. מיקרו-הזרקה לקרום הלב

1. תחת הסטריאומיקרוסקופ, בזהירות לבחון את התנועה של הלב הפועם מתחת לעור של הדג. קבעו חזותית את נקודת ההזרקה מעל הלב הפועם ובאמצע המשולש המוגדר על-ידי לוחות הסחוס הגחוני (איור 1D). הכניסו את קצה הנימים בזווית של 30-45° ביחס לציר הגוף (איור 1E). חדרו בעדינות לעור עם קצה המיקרו-נימים לתוך קרום הלב (איור 1C). נקודת כניסה אופטימלית קרובה יותר לבטן מאשר לראש.
   הערה: אין להכניס את הנימים עמוק מדי לתוך הגוף ואת הלב, כמו זה יגרום לפגיעה באיבר. במקרה של ניקוב לב, המחט בדרך כלל מתמלאת בדם. אם זה קורה, להסיר את הנימים ולהוציא את הדג מן הניסוי.
2. ברגע שהמחט נמצאת בתוך קרום הלב, השלם את ההזרקה על ידי לחיצה על הדוושה של מכשיר המיקרו-מזרק.
   הערה: היזהר לא להזריק אוויר לתוך חלל בית החזה.
3. לאחר ההזרקה, בעדינות למשוך את הנימים מן בית החזה ומיד להעביר את הדג לתוך מיכל עם מי המערכת להתאוששות.
4. יש לעקוב אחר הדג עד להחלמה מוחלטת מההרדמה.
5. לאסוף את הלב בנקודת הזמן הרצויה ולהכין אותו לניתוח נוסף.
   הערה: במקרה שהדג אינו מחדש את תנועת האופרקולום תוך 30 שניות, החיו את הדג מחדש על ידי סחיטת מים לתוך הזימים עם פיפטה מפלסטיק.

איור 1: הזרקה תוך-חזה (IT) בדגי זברה בוגרים. (A) תצלום של נימי מיקרו-הזרקה משוכים עם חוט להט (בקוטר 6 אינץ', 1.0 מ"מ) וערכים של תוכנית מושך המחטים שבה נעשה שימוש. (B) תצלום של נימי מיקרו-הזרקה משוכים עם חוט להט (בקוטר 6 אינץ', 1.0 מ"מ) מלא ב-2.5 מיקרוליטר תמיסה המכילה 10% פנול אדום. הקצה המושך של המחט הוא באורך מקסימלי של 7 מ"מ. (ג) ייצוג סכמטי של הליך הזרקת ה- IT. (ד) צילומים של הליך הזרקת ה-IT. נתון זה שונה מ- Bise et al. המספרים בלוחות C ו-D מתאימים לאותם שלבים של ההליך: (1) דגים ממוקמים בצד הגחון כלפי מעלה על ספוג לח. אתר הניקוב (נקודה אדומה במשולש) ממוקם במרכז החזה ליד הזימים. (2) חדירת המחט לקרום הלב. נקודה אדומה מציינת את אתר הניקוב. (3) ההזרקה מנוטרת על ידי התבוננות בהתפשטות התמיסה האדומה בחלל קרום הלב. (ה) תוכנית הזרקת IT. הזווית בין נימי ההזרקה לציר הגוף צריכה להיות בין 30° ל 45° כדי למנוע ניקוב לב. (F) צילומים של בית החזה של דגים בשעה אחת לאחר הזרקת הנפחים שצוינו. חיצים לבנים מכוונים אל הרקמה האדמדמה, מה שעשוי להצביע על דימום פנימי