הזרקת תאי סרטן תוך רחמיים: טכניקה להעברת תאים סרטניים להקמת מודל עכבר סרטן שחלות תוך פריטוניאלי

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. הזרקה תוך רחמית של תאי סרטן שחלות אנושיים בעכברים עירומים אתימיים

הערה: ההליך הבא דורש סיוע מאדם שני. בנוסף, מכיוון שמדובר בניתוח הישרדות, השתמש בכלי ניתוח סטריליים. הליך ניתוח הישרדות זה אמור להימשך כ -10 עד 15 דקות.

1. מרדימים את העכבר באמצעות 2% isoflurane. עכברים עירומים אתמיים בני 7 עד 8 שבועות משמשים בדרך כלל.
2. ודא כי בעל החיים מורדם לחלוטין על ידי צביטת כרית כף הרגל באמצעות אצבעות או מלקחיים. בעל החיים צריך להיות לחלוטין לא מגיב לכאב לפני תחילת הניתוח.
3. הניחו את העכבר המורדם כשצדו הצדדי הימני כלפי מעלה, על פד גזה סטרילי כשראשו הרחק מהחוקר.
4. יש למרוח משחה על העיניים עם מוליך צמר גפן למניעת יובש בזמן הרדמה.
5. מכניסים מיד את הראש למערכת חרוטי אף המחוברת לוופורייזר איזופלורן (איור 1A). זה מספק את ההרדמה לאורך כל ההליך הכירורגי.
6. יש לחטא את הצד השמאלי (או הימני) של הבטן באמצעות רפידות אלכוהול (איור 1B) ולאחר מכן יוד, ולאחר מכן להניח וילון כירורגי סטרילי מעל אתר הניתוח.
7. בעזרת מספריים כירורגיים סטריליים ומלקחיים מבצעים חתך עור בקוטר 1-2 ס"מ ברביע השמאלי התחתון של העכבר (איור 1C).
8. להרים את השריר ולעשות חתך להגיע הצפק.
9. לנתח את השריר האלכסוני כדי לחשוף את חלל הבטן.
10. איתור וזיהוי קרן הרחם השמאלית (איור 1D).
11. בעזרת המוסטט סטרילי מהדקים את הצד הקדמי והאחורי של הקרן (איור 1E). הניחו את המהדק הקדמי ממש מתחת לחצוצרה ואת המהדק האחורי ממש מעל צוואר הרחם.
12. בקש מהאדם השני להזריק את השעיית התא. הניחו את המחט המכילה תאים בזווית של 45° בניצב לקרן (איור 1F). לאט מאוד להזריק 50 μl של השעיית תאים לתוך לומן של קרן הרחם.
13. הסר את המחט ושחרר את המהדק הקדמי.
14. שחררו את המהדק האחורי והחליפו את קרן הרחם בחלל הבטן.
15. סוגרים את הצפק באמצעות תפר סינתטי נספג וסוגרים את העור באמצעות דבק רקמות.
16. הוציאו את העכבר מחרוט האף והחזירו אותו לכלוב. במידת הצורך, החליפו את המצעים כדי להבטיח כלוב נקי לאחר הניתוח. יש לוודא שכל בעלי החיים ערים ופעילים לפני היציאה ללא השגחה.
17. לספק איבופרופן ב 0.11 מ"ג / מ"ל של מי שתייה במשך 48 השעות הראשונות לאחר הניתוח. לאחר מכן, החלף במי שתייה רגילים.
    הערה: אם משתמשים בעכברים עירומים אתימיים, וסוגרים את העור באמצעות דבק רקמות במקום תפרים, אין צורך להפריד את העכברים לאחר הניתוח. עכברי SCID הם אגרסיביים יותר וייתכן שיהיה צורך להפריד ביניהם.
18. עקוב מקרוב אחר אתר החתך לזיהום אפשרי עקב פצע פתוח.

איור 1: הזרקה תוך-רחמית של תאי סרטן השחלות. (א) ההרדמה ניתנת ברציפות באמצעות חרוט באף; (B-E) העור חתך כדי לאתר ולהדק את קרן הרחם; (F) תאים סרטניים מוזרקים באיטיות לתוך לומן הרחם.