מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

ישנם חולים 14,578 ברשימת ההמתנה עבור השתלת כבד, כ 7,000 השתלות מתבצעות לכל השנה^1,2. בתגובה פירוש הדבר תורם משמעותית, הרחיבו הקריטריונים עבור התורמים כבד; אלה מכונים לעתים קרובות שולי איברים או קריטריונים המורחבת תורמים, צפויים לבצע פחות טוב לאחר ההשתלה מאשר allografts הקריטריונים הסטנדרטיים, עם שיעור גבוה יותר של תפקוד שתל ראשי ושתל עיכוב הפונקציה^{3, 4,5,6}. כתוצאה מכך, NEVLP כבר הציג כשיטה להעריך ולשנות איברים פונקציה^6,7. יש מעוצב דגם עכברוש של NEVLP ואנו בשימוש מודל זה כדי להדגים אחד שלה יישומים פוטנציאליים חשובים – בדיקה של מולקולה הרומן תוספות כדי perfusate הכבד.

NEVLP יוערכו מאתר (עכברים) והן מודלים חזירי, כמו גם איברי אדם שהושלך^6,8,9. התוצאות של הניסויים האנושי הראשון של NEVLP היו גם לאחרונה פורסם¹⁰. למרות מכונת בהיפותרמיה זלוף הפך בבירור התקן לשימור הכליה, הטמפרטורה במכונת הכבד אשר זלוף צריכה להתרחש הוא עדיין שנוי במחלוקת. NEVLP יתרונות רבים המוצע לעומת בהיפותרמיה זלוף subnormothermic. אלה כוללים פגיעה השימור מופחתים, שיקום תפקוד האיברים נורמלי בתנאים הפיזיולוגיות, היכולת להעריך את ביצועי איברים, ולא כפלטפורמה איברים תיקון, שיפוץ של השינוי^{7,11, 12,13,14,15,16,17}.

מספר רב של מחקרים הושלמו באמצעות מודלים NEVLP חזירי. למרות מודלים אלה הם זולים יחסית, כאשר דגמי שקילת שימוש שנמחקו איברי אדם או ניסויים קליניים בבני, הם מאוד יקר בהשוואה שלנו דגם NEVLP בעלי חיים קטנים. מרכיב משמעותי של לכל ניסוי העלות היא perfusate. אנחנו יכולים להשלים זלוף 4 שעות עם 300 מ של perfusate במחיר נמוך יחסית. בנוסף, העלות של חיות קטנות כולל חולדות הוא נמוך מאוד לעומת העלות של חזירים.

לעומת דגמים אחרים של NEVLP בחולדה, המודל המוצג כאן הוא פשוט יחסית ליישום ובעל מגוון רחב של יישומים. המעגל זלוף ניתן לראות באיור1. Perfusate מתחיל במאגר perfusate (1), אשר הוא מיכל מים המעטפת. Perfusate הוא שלף מתוך המאגר על ידי משאבה רולר (2), דחף לתוך windkessel (3), ולאחר מכן את oxygenator (4). Oxygenator מוגדרת עבור גז countercurrent perfusate זרימה לספק חילוף הגזים המרבי. Perfusate ואז מההכנסות כדי חימום סליל (5) בתוך התא זלוף כדי להבטיח זאת היא בטמפרטורה הפיזיולוגיות, מלכודת בועות (6) כדי למנוע זלוף של בועות אוויר שם הם איברים מראש (7) ו עוגב שלאחר (8) מדגם יציאות, אשר מאפשרים את perfusate. לטעום. Perfusate ואז נכנס דרך הצינורית וריד שער הכבד. הצינורית וריד שער הכבד מחובר צג לחץ תרשימים הערכים על התוכנה אוסף נתונים. לאחר מכן, perfusate היציאות הכבד דרך הצינורית IVC, זורם לתוך הרחוב אקולייזר לחץ (9). לבסוף, perfusate משך מהגוש לחץ בחזרה דרך המשאבה רולר, רוקן לתוך המאגר. מודל זה כולל זלוף רציפה כדי וריד שער הכבד, משאיר בחוץ זרימה פועמת עורק הכבד, דיאליזה בשימוש גם דגמים אחרים, שכל אחד מהם דורש מעגל נוסף ונפרד, אך בעבר הוכחו לא להיות נדרש^9,13.

על מנת לחקור התוספת של מולקולה טיפוליים חדשניים כדי perfusate, בחרנו את האנזים קטלאז. קטלאז הוא נבלות ROS אנדוגני, המהווה חלק של מנגנון ההגנה הפנימית תאים כדי. לרכך את ההשפעות של רוס¹⁸. הביטוי קטלאז הוא גדל איסכמיה הכבד פגיעה reperfusion פציעה¹⁹. תוספת ניסיוני של קטלאז הוכח כדי להקטין איסכמיה-פגיעה reperfusion, עיניים, המוח, ואת ריאות^{20,21,22,23,24}. Pegylation הוכח למטרה קטלאז אנדותל, סיוע קטלאז ספיגת לתוך תאי אנדותל²⁵. פג-חתול מנוהל מערכתית עם יעילות מוגבלת בהפחתת פגיעה כבדית איסכמיה-פגיעה reperfusion; עם זאת, שיערנו כי הוספת שפג-החתול מעגל זלוף מטלטלים יוביל ל שיפור תוצאות^26,27,28. כאן, אנו מוסיפים פג-חתול perfusate הבסיס שלנו להדגים את יכולתו לצמצם פגיעה בכבד שימור.

כל ההליכים בוצעו בהתאם לקווים המנחים של טיפול בעלי חיים מוסדיים, המועצה הלאומית למחקר של מדריך עבור טיפול אנושי ו שימוש של מעבדה בעלי חיים (IACUC), עבר אישור על-ידי ועדת IACUC אוניברסיטת מדינת אוהיו.

1. הגדרת הראשונית

1. להכין את הפתרון זלוף על-ידי שילוב הבאות: 86 מ של 25% אלבומין, 184 מ של המדיה של וויליאמס, 30 מ של פניצילין/סטרפטומיצין (10 U/mL פניצילין ו- 0.01 מ"ג/מ"ל סטרפטומיצין), אינסולין (50 U/L), הפרין (0.01 U/mL),-גלוטמין (0.292 g/L), ו הידרוקורטיזון (0.010 g/L) את הנפח הכולל של 300 מ. כדי להפוך את הבסיס perfusate פג-חתול קבוצה, הוסף 625 U/mL של פג-חתול.
   1. מאגר הפתרון perfusate באמצעות טריס (hydroxymethyl) aminomethane (תאם) ל pH 7.4. השתמש מכונת גזים בדם כדי לאשר את רמת החומציות של perfusate.
2. להגדיר את המעגל (איור 1).
   1. להפעיל את האמבטיה במים חמים יותר ולהגדיר אותו 37 מעלות צלזיוס. לאפשר לתא איברים להתחמם.
   2. שופכים את perfusate מעורב, במאגר לתוך המאגר ולהתחיל מחזור הדם.
      הערה: perfusate שהוזכר בשלב זה הוכן בשלב 1.1.1.
   3. הפעל את הגז oxygenating (95% חמצן ו-5% פחמן דו-חמצני) לדלפק זרימה דרך oxygenator בתוך השורה.
   4. להפעיל את התוכנה אוסף נתונים ולחץ על "התחל" כדי להקליט את משך זמן הניסוי.
3. כיוונון מיקרוסקופ כירורגי מחדר ניתוח (איור 2).
   1. הפעל את כל הציוד כולל לוח התחממות כדור הארץ, electrocautery, ואת הרדמה סימנים חיוניים (לב קצב וחמצן רוויה) פיקוח על ציוד.
      הערה: ההגדרות מיקרוסקופ ישתנו בהתבסס על המיקרוסקופ בשימוש ולא ניתן לכוונן נוחות המשתמש.
   2. למלא את המזרק הרדמה 10 מ ל 10 מ של איזופלוריין נוזלי האינהלציה (משקל מולקולרי 184.5 g/mol) ולמקם יחידת הרדמה.
   3. עמדה מזרק 0.5 מ"ל של הפארין (50 U), מכשירי הניתוח, 4-0 ו- 7-0 משי תפר ספוגיות כותנה סטרילי, 4 ס"מ על 4 ס"מ ארוגים גזה ספוגים כראוי (איור 2).
4. הכינו את תא איזופלוריין.

2. אינדוקציה של הרדמה

1. ללבוש את הבאים ציוד מגן אישי (עיקרון השוויון הפוליטי): מסכה רפואית, כפפות כירורגי, שמלת חד פעמיות.
2. שוקלים את החולדה.
   הערה: אנו משתמשים ספראג-Dawley חולדות בין 250 – 350 גר'.
3. הפעל את מדחס חמצן ואיזופלוריין. הנח את העכבר, לאחר נשקל, אל החדר איזופלוריין ולאבטח את המכסה. לגרום הרדמה באמצעות איזופלוריין 6% הנכללת 2 ל'/דקה של חמצן.
   הערה: המינון המדויק איזופלוריין בשימוש יהיה תלוי במערכת הרדמה ספציפי בשימוש.
4. השתמש קוצץ אלקטרונית קליפ שיער בטן החיה.
5. החלף את החיה בבית הבליעה איזופלוריין.
6. הפעל את יחידת הרדמה ממוקם בחדר הניתוח.
7. הסר את החולדה תא איזופלוריין כאשר הרדמה מלאה מושרה. לאשר את עומק ההרדמה באמצעות צביטה הבוהן.

3. נוהל רכש

1. להכין שהקפל פורטל 16 גרם (איור 3).
   1. מתחילים עם angiocatheter 16 גרם. לחתוך קטע 7 מ מ של אבובים. לקבוע את נקודת האמצע של מקטע 7 מ מ על ידי מדידת 3.5 מ מ. Incise אל נקודת האמצע ולהסיר את החלק הקדמי של הצנרת.
   2. השתמש עוצר דימום לרסק חלק שטוח עכשיו זה. להשתמש במשחה כדי להמיס את הקצה השני של angiocatheter כדי ליצור שפה. אין למקם את הטיפ ישירות על הלהבה או זה תוצת.
2. הכינו את הצינורית צינור המרה.
   1. קח angiocath 27 G, לחתוך את הנמל הזרקת להשאיר רק את הקטטר. להתחבר זה קטע 10 ס מ של הצנרת cannular 27 G.
3. מקם את העכברוש עם האף שלה בקונוס האף בהרדמה, שלה ארבע הגפיים. מרותק למיטה. לפקח על סימני החיים על ידי הצמדת שהצג הגפיים האחוריות השמאלי. לבצע צביטה הבוהן כדי לאשר עומק ההרדמה המתאימה. המשך הרדמה איזופלוריין 4% (לבעלי שמכבידים > 250 גרם).
4. תרסיס הבטן של החיה עם אלכוהול איזופרופיל 70%. אפשר להתייבש. המקום סטרילי תלוי מעל בעל החיים.
5. עושים קו האמצע חתך של מצאתי לשימוש לחיקו חדות מספריים והרחבת דרך העור (איור 4). הזן של הצפק ובעדינות תחתכי את השריר. לטפל כדי למנוע נזק לשלפוחית השתן של ההיבט נחות של החתך הזה ולכבד בהיבט מעולה של החתך.
6. להרחיב את החתך רוחבית על ימין ועל שמאל כדי ליצור צלב ברמה של הגבול נחות של הכבד.
7. להפוך את ההרדמה עד 2% (לבעלי שקילה > 250 גרם).
8. . משכי הסרעפת באמצעות מלחציים נגד יתושים מעוקל הצלעות באמצעות צלעות רטרקטורים (איור 5).
9. לחתוך את falciform, הסרעפת, והרצועות gastrohepatic עם מספריים חדות.
10. אתר את העניבה-off הווריד הסרעפת 7-0 בתפר כמו קרוב ומקורו ככל האפשר למנוע דליפה.
11. המעיים העכברוש באמצעות המוליך עצה של כותנה בטעימת סטרילי, עוטף את המעי גזה לחלח עם תמיסת מלח 0.9%. הקפידו לא למתוח את להערכת של המעי הדק.
12. לנתח מעל הכלילי התחתון (IVC) כדי להסיר את עודפי רקמת. לנתח מאחורי IVC פשוט נעלה ההסתעפות ולהעביר לולאה של 4-0 בתפר משי לשימוש מאוחר יותר (איור 6).
13. . משכי את הכליה הימנית כדי לספק חשיפה וריד הכליה. . משכי את האונה הימנית של הכבד עליונית עם גזה... . תקשור וריד הכליה 7-0 בתפר משי קרוב IVC ככל האפשר, לצרוב על פני זה דיסטלי השולטת (איור 7).
14. בזהירות שווייץ וריד הטחול, תקשור אותו בעזרת שני תפרים משי 7-0, חצו אותה בין שתי התפרים.
15. תקשור, מאתרים ומפסיקים ורידים נוספים באמצעות תפרים משי 7-0 עבור אורך נוסף על וריד שער הכבד, במידת הצורך.
    הערה: ישנם לפעמים ענפים קטנים של infrahepatic IVC בין וריד הכליה נכון את הכבד נחות.
16. לנתח סביב העורק gastroduodenal, לקשור את העורק gastroduodenal 7-0 בתפר משי, מאתרים ומפסיקים את העורק gastroduodenal.
17. לנתח סביב עורק הכבד ולאחר מכן מקם עניבה תפר משי 7-0 סביבו (איור 8).
18. שווייץ המרה.
    1. בדוק את האורך של המרה. . תקשור צינור המרה בקצה הדיסטלי באמצעות 7-0 בתפר משי. במקום הלולאה של 7-0 בתפר משי סביב המרה הציר הקרוב ככל האפשר.
    2. לחתוך חור זה מחצית מהקוטר התעלה עם מספריים קטנות, למקם צנתר 27 G המרה הציר הקרוב. לקשור את הצנתר במקום באמצעות בתפר העניבה סנדל הרומי (איור 9).
19. להזריק 0.5 מ של הפארין (50 U) לתוך הווריד הפין או IVC של החיה באמצעות מחט 27 גרם.
    הערה: מזרק אינסולין 27 G גם ניתן להשתמש במקום זאת.
20. מלחציים, תקשור IVC באמצעות הקודם שמוקם תפר משי 4-0.
21. . תקשור עורק הכבד באמצעות הקודם שמוקם תפר משי 7-0
22. . להסיר וריד שער הכבד באמצעות סרטון המיקרוכירורגית מלקחיים נקרר את וריד שער הכבד באמצעות angiocatheter של 22 גרם. מיושרות וריד שער הכבד עם 60 מ ל תמיסת קר 0.9% עם הפרין 1 מ"ל (100 U) עד הכבד blanches (איור 10).
    הערה: אם הכבד לא בלנש מיד זה אפשר לעסות עם צמר גפן סטרילי עצה applicators.
23. לחשוף את suprahepatic IVC, חצו אותו בתור גבוה בחזה ככל האפשר.
24. בצע hepatectomy כדלקמן. . לחתוך את הסרעפת חתך את עורק הכבד, לחתוך את IVC, לחתוך וריד שער הכבד, לחתוך כל הרצועות נוספים, להוציא את הכבד. מקם את הכבד קרח קר 0.9% תמיסת מלח (איור 11).
25. מקום מגבון וסקולרית 16 גרם וריד שער הכבד (איור 12). מקם את הכבד על המעגל זלוף הכבד normothermic ex-vivo .

4. זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

הערה: perfusate המשמש כאן הוכן פרוטוקול שלב 1.1.1.

1. מקם את הצינורית וריד שער הכבד לווריד פורטל בעצור (איור 13).
2. במהלך מיקום בצינורית וריד שער הכבד, לשמור על זרימה של perfusate דרך המעגל ב 2 מ ל/דקה כדי להתחיל. תסתכלו על המסך עבור התוך וריד שער לחץ; זה עשוי להצביע על הספינה יש להפוך occluded, מיקום מחדש של צנתרים הדרוש.
3. תפר ב הצינורית IVC זרימה החזרה של perfusate השימוש בתפר משי 7-0.
4. לאחר שני קנולות במקום, מתחילים להופיע את הזרימה ב- 1 מ ל/דקה עד לחץ פיזיולוגיים בטווח של 10-16 cmH₂O.
5. לקחת דגימה 1 מ"ל מן קדם ויציאות פוסט--0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו 240 דקות של זלוף. לחלק את הדגימה 1 מ"ל בשתי הדגימות 0.5 mL.
   הערה: 0.5 מ ל זה ישמש בשלב פרוטוקול 4.5.1, ו- 0.5 מ ל ישמש בשלב פרוטוקול 4.5.2.
   1. הצמד להקפיא 0.5 מ של דגימה זו צינורות קריוגני בחנקן נוזלי.
   2. להפעיל ניתוח גזים בדם באמצעות 0.5 mL הנותרים של perfusate.
   3. לאחר הפעלת הבדיקה גז דם בכל נקודה בזמן (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו- 240 דקות) לבחון את דרגות החומציות ואת החיץ את perfusate לפי הצורך כדי לחזור pH 7.4.
6. בתום 4 שעות של זלוף, נתק את הכבד של המעגל זלוף. לחלק הכבד 0.5 ג'י מקטעים. הצמד הקפאת רקמת הכבד צינורות קריוגני בחנקן נוזלי.

5. ניסוי שלאחר ניתוח

1. לקבוע אלנין aminotransferase (ALT) ברמה perfusate-0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו 240 דקות באמצעות ערכת מסחרי assay ערכי צבע מוחלטים.
   1. בקצרה, דגירה של perfusate עם ריאגנטים לערבב התגובה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 60 דק מדד הצפיפות האופטית ערכים-570 nm באמצעות קורא microplate.
2. Homogenize 0.5 גרם של רקמת הכבד עם 100 µL פירוק מאגר ולנתח את הרקמה lysate אדנוזין טריפוספט (ATP), גלוטתיון (GSH) של malondialdehyde (מד א).
   1. בקצרה, למדוד את רמות ATP הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית. לערבב את הדגימה עם המאגר התגובה, דגירה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות מדד הצפיפות האופטית-570 nm באמצעות קורא microplate.
   2. למדוד את רמות GSH הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית. מערבבים את דגימות רקמה עם קוקטייל וזמינותו. למדוד את ערכי צפיפות אופטית-405-414 nm.
   3. למדוד את רמות מד"א של הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית. לערבב את הדגימות עם יפורסם ומחממים עד 95 מעלות צלזיוס במשך 60 דק צנטריפוגה מגיבים, להעביר את תגובת שיקוע צלחת 96-ובכן. למדוד את הצפיפות האופטית-532 ננומטר.
3. Homogenize 0.5 גרם של רקמת הכבד עם 100 µL פירוק מאגר ולנתח את הרקמה lysate לפעילות היחסי של קספאז-3/7 באמצעות ערכת וזמינותו המסחרית.
   1. לערבב את הרקמה lysate עם המאגר assay ריאגנט קספאז-3-7, דגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
   2. למדוד את רמת קרינה פלואורסצנטית כל טוב באמצעות קורא microplate.
4. לקבוע את הרמה של מוות תאים הדגימות רקמת הכבד באמצעות ערכת זיהוי מוות מסחרי ב באתרו .
   1. מראש לטיפול של 0.5 g רקמות חלקים עם Proteinase U/mL 10 K 10 דקות, ואז דגירה עם תערובת התגובה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות לבצע ניתוח באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

גודל דגימה של חולדות שלוש לכל קבוצה היה בשימוש. ALT נמדדה ב 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו 240 דקות של זלוף. השתמשנו הסטודנט t-בדיקות כדי להשוות בין תוצאות בין הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת פג-חתול קבוצות בכל נקודה בזמן. השוואת את הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת קבוצות פג-חתול, יש פחות באופן משמעותי (p < 0.05) ALT perfusate בסיס בתוספת פג-חתול הקבוצה ב 150, 180, 210 ו 240 דקות (איור 14 א').

רקמת הכבד היה רכש על מנת לנתח את רקמת נזק מן הן הבסיס perfusate perfusate בסיס בתוספת קבוצות פג-חתול. השתמשנו הסטודנט t-בדיקות כדי להשוות בין תוצאות בין הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת קבוצות פג-חתול. רקמות ATP נשמר את הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד perfusate הבסיס (איור 14 ב, p < 0.05). רקמות מד א הייצור היה גבוה באופן משמעותי בקבוצה perfusate בסיס מאשר הבסיס perfusate בתוספת את פג-חתול בקבוצה (איור 14C, p < 0.05). GSH הכולל נשמר את הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד perfusate הבסיס (איור 14D, p < 0.05).

כדי לנתח אפופטוזיס, רקמת הכבד קספאז 3/7 פעילות היה להשוות בין הקבוצות. קרינה פלואורסצנטית נמדדה כל היטב. השתמשנו הסטודנט t-בדיקות כדי להשוות בין תוצאות בין הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת קבוצות פג-חתול. פעילות קספאז 3/7 ירדו באופן משמעותי הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד perfusate הבסיס (איור 15A, p < 0.05). מסוף deoxynucleotidyl טרנספראז (TdT) dUTP מכתים תיוג ניק-End (TUNEL) נעשה שימוש כדי להשוות אפופטוזיס בין הקבוצות. האחוז של מוות תאים היה פחות באופן משמעותי הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד בסיס perfusate (איור 15 ב p < 0.05).

איור 1: מעגל זלוף. מרכיבי המעגל מסומנות. Perfusate מתחיל במאגר perfusate (1), אשר הוא מיכל מים המעטפת. Perfusate הוא שלף מתוך המאגר על ידי משאבה רולר (2), דחף לתוך windkessel (3), ולאחר מכן את oxygenator (4). Oxygenator מוגדרת עבור גז countercurrent perfusate זרימה לספק חילוף הגזים המרבי. Perfusate מכן ממשיך את סליל חימום (5) בתוך החדר זלוף כדי לוודא שהוא עומד בבית הטמפרטורה הפיזיולוגיות, מלכודת בועות (6) כדי למנוע זלוף של בועות אוויר. ישנם איברים מראש (7) ו עוגב שלאחר (8) מדגם יציאות, אשר מאפשרים את perfusate מתחננות שיטעמו. Perfusate ואז נכנס דרך הצינורית וריד שער הכבד. הצינורית וריד שער הכבד מחובר לצג לחץ, המסדירה את האקולייזר לחץ (9). לבסוף, perfusate משך מהגוש לחץ בחזרה דרך המשאבה רולר, רוקן לתוך המאגר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2: חדר הניתוח ולהגדרה כלי כירורגי. מיקרוסקופ כירורגי (1) צריך ניתן לכוונן את הגובה המתאים ואת ההגדלה עבור המשתמש. איזופלוריין ניתן לטעון מראש לתוך מכונת ההרדמה (2). האף של החיה ממוקם קונוס האף (3). מכשירי ניתוח צריך להיות פרוש שבהם הם עשויים להיות בעלי גישה קלה (4). לאחר electrocautery (5) בקרבת מקום הוא מועיל. התפרים (6) צריך להיות חתוכות מראש כך ניתן להשיג חלקים במהירות בעת הצורך, במיוחד צריך להיות זמין (7). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3: הכנת שהקפל וריד שער 16 גרם- מתחילים עם angiocatheter 16 גרם. לחתוך קטע 7 מ מ של אבובים. לקבוע את נקודת האמצע של מקטע 7 מ מ על ידי מדידת 3.5 מ מ. Incise כאן ולהסיר את החלק הקדמי של הצנרת. השתמש עוצר דימום לרסק חלק שטוח עכשיו זה. השתמש מצית כדי לצרוב את הקצה השני של angiocatheter כדי ליצור ערכת lip. אין למקם את הטיפ ישירות על הלהבה או זה תוצת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 4: קו האמצע החתך. עושים קו האמצע חתך של מצאתי (1) ל עצם בושת (2) באמצעות חדות מספריים והרחבת דרך העור והשרירים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 5: לקבל התנצלות הולמת. . משכי הסרעפת (1) באמצעות מלחציים נגד יתושים מעוקל (2) והצלע על-ידי הצבת רטרקטורים צלעות (3, 4). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 6: ניתוח הכלילי (IVC). להעיף את הכבד עד וחושפים הכליה הימנית (1) ואת וריד שער הכבד (2). לנתח בסביבה IVC (3) ולמקם לולאה של 7-0 בתפר לשימוש עתידי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 7: מצדו של וריד הכליה נכון. . משכי את הכליה הימנית (1) לספק חשיפה לוריד הכליה. . תקשור הווריד יותרת הכליה, קיצור דרך זה. גזה בטעימת (2) יכול לשמש כדי להגן על הכבד במהלך זה תמרון. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 8: עורק הכבד. לנתח סביב ולמקם עניבה סביב עורק הכבד (1) ליד שבו הוא עובר תחת וריד שער הכבד (2). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 9: תעלות המרה. Cannulate המרה (1) שימוש את angiocatheter 27 G (2) מחובר הצנרת 27 G (3). זה יעזור כדי לאסוף המרה במהלך זלוף. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 10: סומק הכבד. לשטוף את הכבד (1) עם 60 cc תמיסת קר 0.9% עם 100 U (1 מ"ל) הפארין באמצעות angiocatheter של 16 גרם (2). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 11: לאחר hepatectomy. לבצע hepatectomy ולמקם את הכבד בתוך תמיסת מלח קר. לטפל לא כדי לסלק את הצינורית צינור המרה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 12: וריד שער הכבד אוזקים. אתר וריד שער הכבד. להשתמש במלחצת גדול (1) לעכב את הווריד עוזב מספר מילימטר-lip של וריד מעל המלחציים. השתמש המיקרוכירורגית מלקחיים (2, 3) כדי למקם מגבון וסקולרית 16 גרם (4) וריד שער הכבד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 13: וריד שער הכבד ומכונת תעלות IVC מעולה. נקרר את וריד שער הכבד (1) ומכונת IVC סופריור (2). יש לנקוט זהירות רבה לא לנתק את הצינורית צינור המרה (3). בנוסף, הקפידו לא לעוות את IVC מעולה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 14: ניתוח של רקמת נזק הבסיס perfusate perfusate בלבד, הבסיס, וגם קבוצות פג-חתול (N = 3/קבוצה). קווי שגיאה לייצג סטיית תקן. (א) אלנין aminotransferase (ALT) רמות. השוואת רמות ALT בין הבסיס perfusate ו perfusate בסיס בתוספת קבוצה pegylated-קטלאז (פג-חתול), קיימת באופן משמעותי פחות ALT perfusate בסיס בתוספת פג-חתול הקבוצה ב 150, 180, 210 ו 240 דקות (p < 0.05). רמות אדנוזין טריפוספט (B). רקמות אדנוזין טריפוספט (ATP) נשמר את הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד perfusate בסיס (p <0.05). רמות Malondialdehyde (C). רקמת ייצור malondialdehyde (מד א) היה גבוה באופן משמעותי בקבוצה perfusate בסיס מאשר הבסיס perfusate בתוספת את פג-חתול בקבוצה (p < 0.05). רמות גלוטתיון (D). סך גלוטתיון (GSH) נשמר את הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד perfusate הבסיס (p < 0.05). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 15: ניתוח של אפופטוזיס הבסיס perfusate perfusate בלבד, הבסיס, וגם קבוצות פג-חתול (N = 3/קבוצה). קווי שגיאה לייצג סטיית תקן. (א) קספאז-3/7 Activity.Caspase 3/7 פעילות ירדו באופן משמעותי הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת הקבוצה לבד perfusate הבסיס (p < 0.05). (B) מסוף deoxynucleotidyl טרנספראז (TdT) dUTP תיוג ניק-End (TUNEL) מכתים. התמונות צולמו באמצעות של 4x מיקרוסקופ פלואורסצנטי. האחוז של מוות תאים היה פחות באופן משמעותי הבסיס perfusate בתוספת פג-חתול קבוצה לעומת בסיס perfusate (p < 0.05). ירוק: מוות תאים. כחול: גרעיני. גודל ברים = 1,000 מיקרומטר. TUNEL חיובי התאים היו לכמת על ידי ספירת תאים משדות מיקרוסקופיים אקראי 4. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

כל המחברים מדווחים שיש להם אין גילויים הרלוונטיים.