התרבות הראשית של הנוירונים מבודדים מתוך עכבר ממוח עובריים

במשך כמה עשורים, קווי התא שימשו באופן נרחב ככלי תפוקה גבוהה במחקרים פרה-קליניים ומחקר ביולוגי. עלות-תועלת, צמיחה מהירה, והפחתה של השימוש בעלי חיים חיים הם כמה יתרונות של שימוש בתאים אלה. עם זאת, שינויים גנטיים ופנוטיטינוים מצטברים לאחר מספר פסקאות בתוך מבחנה¹. מקריות של קווי תאים וdissimilarity גנטיים מתאים ראשוניים יכולים להוביל לניסויים בחוסר הזדהות ולמסקנות כוזבות^2,3,4,5. לכן, למרות קווי דמיון מסוימים כדי הבדיל תאים כגון נוירונים (למשל, נוירוטרנסמיטורים, ערוצי יון, קולטנים, וחלבונים אחרים בתאי העצב), קווי התאים עצביים לא יכול לשכפל את הפנוטיפ מלא של נוירונים. שימוש בנוירונים מבוגרים הוא אופציה אחרת; עם זאת, תאים אלה אינם מחלקים postmitotic תאים שקשה להפיץ בתרבות. יתר על כן, כניסה מחדש לתוך מחזור התא עשוי לזרז אפופטוזיס⁶.

תרבות תא תלת מימדי (3D), תרביות פרוסה אורגנותמית, ותרבויות אורגנואיד פותחו כדי לספק סביבה שבה תאים יכולים לסדר לתוך טופס 3D המחקה את vivo הגדרה. כך, תקשורת תא אל התא, הגירה, פלישה של תאים סרטניים לתוך הרקמות הסובבות, ו אנגיוגנזה ניתן ללמוד⁷. עם זאת, עלויות נוספות של שימוש מטריצה סלולרית נוספת (ECM) חלבונים או הידרוג'לים סינתטיים כמצע, קושי הדמיה, ותאימות עם מכשירי סינון תפוקה גבוהה הם חסרונות ניכרים של תא 3D culturing. חיסרון משמעותי בתרבות הפרוסה של רקמת הרקמה הוא השימוש במספר רב של בעלי חיים ובהשפעות השליליות של הפיום, המוביל לנגישות של מטרות וגורמי גדילה לאקסונים, וכתוצאה מכך מוות עצבי⁸.

לכן, גישה חלופית, אשר מונעת את הבעיות עם קווי התאים, הקושי של הגידול תאים בוגרים, ומורכבות של רקמות, הוא התבגרות מתורבת של תאים ראשוניים לא בוגרים. התאים הראשוניים נגזרים ישירות מרקמת אדם או בעל חיים ומונתק בשיטות אנזימטיות ו/או מכניות⁹. העקרונות המרכזיים של בידוד, זריעה ותחזוקה במדיום התרבותי דומים ללא קשר למקור הרקמה. עם זאת, הגורמים ההזנה הדרושים כדי לקדם התפשטות והתבגרות הם מאוד מסוימים התא⁶.

לדעת את ' הלידה ' של כל סוג תא המוח הוא תנאי מוקדם לעיצוב ניסוי התרבות העיקרית. באופן כללי, התאים Purkinje (מחשבים אישיים) ואת הנוירונים של גרעיני המוח (CN), נולדים לפני התאים הקטנים, כולל interneurons (למשל, סל, תאים stellate) ותאי הגרניט. בעכברים, מחשבים מופיעים בין היום העובריים (E) 10 – E13, ואילו נוירונים CN ב כ E9 – E12¹⁰.

. מאוחר יותר נולדים המון נוירונים לדוגמה, בעכברים, אוכלוסיית המשנה של Golgi של האינטרנוירונים נוצרות מ-VZ ב (~ E14-E18) ושאר התאים הביננוירונים (תא סל ותאי stellate) הממוקמים בשכבה המולקולרית מגיחים מחלוקת תאים מחולל בחומר הלבן בין תחילת פוסט לנטאל (P) 0 – P7¹¹. תאי הגרניט מופקים מאזור נבטי חיצוני (EGZ), אזור נבטי משני שנגזר מהשפתיים הrostral מעובית ועובר דרך החטיבה הסופנית לאחר הלידה. אך לפני שהסמנים שלהם נובעים השפה מעובית מ E13 – E16, התאים כבר הועברו rostrally לאורך משטח הפיה כדי ליצור שכבה דקה של תאים על המשטח החלק הפנימי של אנאג המוח. תאי מקרוגליאל ללא עצבי כגון אסטרוציטים ו oligodendrocytes הפוך, אשר מקורם של נוירואפיתל המוח, נולדים ב e 13.5-P0 וP0-P7 בהתאמה^{11,12,13,14 ,בן 15} Microglia נגזרות של חלמון-שק מיאלואיד פרימיטיבי התאים בין E8 – E10 ולאחר הפלישה למערכת העצבים המרכזית ניתן לזהות במוח העכבר על ידי E9¹⁶.

השיטה המוצגת במאמר זה מבוססת על האחד שפותח במקור על ידי furuya et al. ו tabata et al.^17,18, אשר היה ממוטב עבור culturing העיקרי של תאים purkinje נגזר של חולדה עכברוש וויסטאר. יש לנו עכשיו להתאים את השיטה הזאת ושינה בקפידה אותו ללמוד את הצמיחה של העכבר מוח הנוירונים¹⁹. בניגוד לפרוטוקול החדש שלנו, מדיום לחיתוך קר הוא מאגר הכביסה העיקרי המשמש במהלך הניתוח ושלבי הדיסוציאציה לפני הוספת מדיום זריעה בפרוטוקול של פאראיה¹⁷. מאגר זה חסר את התזונה, גורמי גדילה, והורמונים (כל בינוני משתנה הנשר מדולקו: תערובת מזינים F-12 [Dמאמ/F12]) כי יש צורך לתמוך צמיחת תאים והישרדות במהלך השלבים הנ ל. בנוסף, בהתבסס על הניסיון הנרחב שלנו עם תרבויות המוח הראשי murine, השתמשנו 500 μl של התרבות הבינונית בכל טוב (במקום 1 mL) והגדילה את הריכוז tri-iothyronine כדי 0.5 ng/mL, אשר משפר את הצמיחה של תאים עצביים, ב במיוחד אלה עם תא מיוחד Purkinje, ומקדם את הצמיחה של ענפים דנדריטים בתרבות. השיטה העיקרית מובלט במאמר זה ניתן להחיל באופן כללי על מכרסמים קטנים אחרים (למשל, סנאים ואוגרים) במהלך פיתוח עובריים ניתן להשתמש כדי ללמוד נוירוגנזה המוח ובידול בשלבים העובריים השונים, אשר שונים בין המינים.

כל הליכי בעלי החיים בוצעו בהתאם לתקנות מוסדיים והמדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים ניסיוניים מהמועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים ואושרה על ידי הרשויות המקומיות (הטיפול בבעלי חיים בקמפוס בנטלי וועדה "). כל המאמצים נעשו כדי למזער את המספר והסבל של בעלי חיים ששימשו. עומק מתאים של הרדמה אושרה על ידי התבוננות כי לא היה שינוי בקצב הנשימה הקשורים מניפולציה וקמצוץ הבוהן או רפלקס המצמוץ.

1. הכנה

הערה: לתזמן את האספקה של עכברים בהריון מתוזמן, בהתבסס על תוכנית המחקר, לאחר ההתעברות E12 – E18. בחירת העיתוי תלויה במאפייני התאים הרצויים (ראו להלן). הכינו את תעודות הכיסוי והלוחות לפחות יומיים לפני הניסוי. פולי-אל-אורבך משמש כחומר ציפוי כדי לשפר את החיבור המצורף לתא לפתקי הכיסוי.

1. המעיל מחליק יומיים לפני בידוד התא.
   1. מניחים את העטיפה העגולה גולשת בצלחת של 24 שעות, תחת תנאים סטריליים בארון בטיחות ביולוגי. השאר פער בין כל שובר כיסוי כדי למנוע כל זיהום.
   2. הוסף 90 μL של שכבות פולי אל-האורלך (אש ף, 500 μg/mL) למרכז של כל תגית כיסוי. סגרו את הכיפה ובעדינות הניחו את הצלחת בחממה של 37 ° c/5%₂ עבור יומיים.
      הערה: נפח גדול יותר עלול לשפוך את פתקי הכיסוי במהלך הדגירה. מכסה הכיסוי אינו צריך להיות מכוסה לחלוטין עם אש ף לאחר הנחת המסירה. במהלך הדגירה של הלילה, אש ף מפיצה באופן שווה את הקצה של תעודות הכיסוי.
2. יום אחד לפני בידוד התא, להכין את התרבות בינונית I (DMEM/F-12 המכילים ריקבון מ100 μM, נתרן סלנייט 30 ננומטר, L-גלוטמין 3.9 mM, gentamicin 3.5 μg/mL, tri-iodothyronine (T3) 0.5 ng/mL, ו N3 תוספי מזון [הפרוגסטרון 4 μM, אינסולין 20 μg העברת 20 מ"ג/mL]) ו זריעה בינונית (תרבות בינונית אני [ללא N3 ו-T3] המכיל 10% סרום העובר העוברי [FBS]) ולאחסן אותם ב 4 ° c. הכנת טריפסין פתרון עבודה (0.25%) ב-Dמאמ/F12 ולשמור אותו ב 4 ° c.
   הערה: הקומפוזיציות הבינוניות מסופקות בטבלה 1.
3. ביום של בידוד התא, המקום בינוני התרבות אני וזריעת בינוני בחממה ב 37 ° c.
   הערה: לפני הפעלת הבידוד המוח ה, ודא שכל הכלים ומשטחי העבודה הם עקרים.
4. שטוף כיסוי מכסה.
   1. . קח את הצלחת ה -24 היטב מתוך החממה
   2. שטוף את תעודות הכיסוי ב -24 הצלחות בצלחת 3x עם מים מזוקקים כפולים (DDW) בתוך ארון בטיחות בתנאים סטריליים. בכל פעם אפשר לכסות את הכיסוי ב-DDW במשך 5 דקות לפני תחילת השאיפה.
   3. השאירו את תעודות הכיסוי בארונית ביו-בטיחות לפחות 2 שעות כדי להתייבש לחלוטין.

2. אוסף המוח השני

1. הכינו 3 10 ס מ מאכלים מפלסטיק סטרילי ממולאים בקרח קר 1x פוספט באגירה (PBS), 3 מנות פטרי מלא קרח קר 1x האנק מאוזנת תמיסת מלח (HBSS), ובערך 5 מנות פטרי מלאים בינונית לחיתוך קרח קר (1x HBSS מכיל gentamicin 10 μg/mL). . תשאיר אותם בקרח
2. הE18 CD1 העכבר ההרה בהריון עם 40% isofלאנה. לבצע פריקה צוואר הרחם על העכבר. לחטא את הבטן עם 70% הפתרון אתנול.
3. השתמש בזוג מספריים כדי להפוך את העור חתך מתוך סימטרי הערווה לתהליך xiphoid. ואז להחזיק את העור עם מלקחיים ולפתוח את חלל הבטן.
4. בלו קרניים הרחם עם מלקחיים ולשטוף אותם 3x בקרח קר 1x PBS על הקרח.
   הערה: השלבים הבאים צריכים להתבצע על קרח כדי למזער את קצב חילוף החומרים ולמנוע נזק לרקמות ולתאים.

3. מבתר את המוח ההוא

1. לאחר שלב הכביסה האחרון, באמצעות זוג מלקחיים עדינים להפריד את העוברים מן הרחם ב-1x HBSS ולהעביר אותם למדיום לנתיחה קר קרח. במדיום הניתוח, ערוף את. ראשו של העוברים במספריים מניחים את הרקמה במדיום חיתוך נקי.
   הערה: שימוש בstereomicroscope לניתוח מיקרו הוא אופציונלי.
2. להחזיק את הגולגולת עם מלקחיים עדינים לחתוך דרך חילונית עם זוג מספריים קטנים מן ההיבט הצדדי של הגולגולת בקו מגנום foramen לתוך מטוס אקוסטי חיצוני הגבול הנחות של חלל מסלולית.
   הערה: לקיחת צעד זה חושף את חלל הגולגולת ברמה של בסיס הגולגולת והופך את זה קל יותר להסיר את המוח.
3. באמצעות זוג מלקחיים עדינים, להסיר את בסיס הגולגולת ולקלף את הגולגולת הרחק מהמוח.
4. הוציאו בזהירות את קרום המוח על החלק השני, החל מהמשטח הרוחבי של הדוד והpons האמצעיים.
5. חותכים את שני העצמות האלה ומפרידים בין המוח החלק המוח לשאר הראש (איור 1).
6. מיד למקם את המוח שנאסף ב 15 מ ל סטרילי שפופרת חרוטי ממולא 14 מ ל של Dמאמ/F12 על הקרח.
7. צנטריפוגה את הצינור ב 1,000 x g, 4 ° צ' עבור 1 דקות, 3x. בכל פעם מסירים בעדינות את הסופרנטנט עם הפיפטה ומשלחים את הגלולה בג הטרי, הקפוא/F12.
   הערה: כדי להימנע מאיבוד הדגימות, השתמש היניקה מעט ככל האפשר.

4. דיסוציאציה המוח

1. הוסף 2 מ ל של טרום מחומם (37 ° c) טריפסין אל הגלולה משלב 3.7 ובעדינות pipet עבור ערבוב הולם.
2. הניחו את הצינור באמבט מים בגודל 37 ° c במשך 12 דקות.
3. לאחר הדגירה, להביא את הצינור לקבינט בטיחות ולהוסיף 10 מ ל של Dמאמ/F12 כדי להשבית את טריפסין.
4. צנטריפוגה את התערובת ב 1,200 x g עבור 5 דקות. למחוק את הסופרנטאנט ולהשעות מחדש את הגלולה ב-dmem טרי/F12. חזור על 3x.
5. להרטיב העברת פלסטיק סטרילי pipet עם Dמאמ/F12.
6. לאחר כביסה ואת צנטריפוגה הסופי, להוסיף 3.5 mL של פתרון העבודה DNase (1 מ ל של הפתרון המלאי DNase I [0.05% DNase + 12 מ"מ MgSO₄ + 1X hbss] ב 500 ΜL של fbs חום ו 2 מ"ל של d,/F12) לתוך הגלולה באותה צינורית.
7. Triturate את הרקמה עם העוגה לפחות 30x עד התערובת משיגה צבע חלבי הומוגנית.

5. אוסף תאים

1. הוסף 10 מ ל של הקרח קר DMEM/F12 לתערובת.
2. צנטריפוגה את המדגם ב 1,200 x g, 4 ° צ' עבור 5 דקות.
3. הסר בזהירות את הסופרנטאנט. מבלי להפריע לגלולה
4. הסר את מדיום הזריעה מהאינקובטור.
5. הוסף 500 μL של מדיום שחומם מראש לגלולה ולערבב אותו היטב באמצעות pipet להשעות מחדש את התאים.
6. לספור את התאים באמצעות הומוציטומטר.
7. דלל את ההשעיה של התא עם בינוני הזריעה לצפיפות של 5 x 10⁵ תאים/mL.
8. תחת ארון בטיחות ביולוגי, להוסיף 90 μL של תערובת מדולל לכל באר במרכז שובר הכיסוי.
   הערה: אל תטען את החלקיקים שלא הושהה ב-DNase.
9. מניחים את הצלחת בחממה ב 37 ° c עבור 3 עד 4 h.
10. לאחר דגירה, להוסיף 500 μL של מדיום התרבות מראש אני כל טוב למקם את הצלחת בחזרה לתוך החממה (37 ° c).

6. טיפול בתאים המשוחזרים

1. לאחר 7 ימים, להחליף את המדיום הישן עם תרבות טרייה בינונית השנייה (התרבות בינונית אני בתוספת עם ציטוסין הערביות הדו [Ara-C, 4 μM] ו-100 μg/mL סרום הפרה אלבומין [BSA]; ראה טבלה 1).
   הערה: שלב זה קריטי כדי להימנע מגדילה של תאים שאינם עצביים.
2. מפקחים על המדיום התרבותי פעם ביום. אם השינויים pH (מצוין על ידי שינוי מסומן בצבע, בדרך כלל הצהף), להסיר מחצית (כמעט 250 μL) של המדיום הישן מכל הבארות ולהוסיף 300 μL של מדיום התרבות prewarmed אני לכל אחד מהם כדי למנוע אובדן מזון.
   הערה: פנול אדום בתווך התרבות הוא אינדיקטור טוב ל-pH של המדיום והפעילות של התאים. נסה למזער את זמן החשיפה של התאים למצב של החממה. זה מונע כל לחץ שעלול. להשפיע על הכדאיות שלהם

7. מאגר וקיבוע תאים

הערה: בהתאם לתכנון הניסיוני, ניתן לאסוף את התאים בכל יום, בכל נקודת זמן.

1. להכין צלחת נפרדת 24 היטב עם הארגון המספרי המתאים ולהוסיף 100 μL של 4% פאראפורמלדהיד (בתחתית) לכל טוב.
2. כדי לקצור את התאים בימים הרצויים (בהתאם לפרוטוקול הניסיוני), הסירו בעדינות את תעודות הכיסוי מבארות הלוחיות של התרבות המקורית והניחו אותם בבארות המתאימות של הלוחית המלאה.
3. הוסיפו את כיסוי הכיוון לבארות כדי לטבול לחלוטין את פתקי הכיסוי.
   הערה: כדי להימנע מניתוק תאים משובר הכיסוי, אל תוסיף את הכיוון הכולייתי ישירות על שובר הכיסוי.
4. שמרו על לוחית הרישוי ב -4 ° c במשך 30-120 דקות.
5. לאחר הדגירה, לשחזר את הצלחת לטמפרטורת החדר.
6. לשטוף בעדינות את המכסה גולשת 3x עבור 5 דקות עם 1x PBS.
7. . המשך לתהליך החיסוני
   הערה: במחקר זה, מיקרוסקופ פלואורסצנטית מצויד במצלמה שימש כדי ללכוד את התמונות והתאספו לתוך ונטאז באמצעות עריכת תמונה יישום תוכנה.

בהתבסס על תאריכי ההולדת השונים של סוגי המשנה העצביים בחלק המוח, תרבויות מ E12-E18 העוברים העכבר הניבו סוגים שונים של תאים. הקרנה גדולה נוירונים, כגון נוירונים CN (E9-E12) ומחשבים אישיים (E10-E13), התפתחה מוקדם במהלך התפתחות המוח. בעכברים, התאים הגרתיים ובתאי גולג'י התעוררו בין ~ E13 – E18 ועברו חלוקת מסופים לשבוע הפוסט-לידה 4.

החלפת המדיום הישן אני עם תרבות טרייה בינונית II בימים של מבחנה (DIV) 7 בסופו של דבר למנוע התפשטות התאים גליה. האינטרנוירונים של השכבה המולקולרית, כגון תאים סל ו stellate, להבדיל לאחר הלידה. לכן, רוב התאים במדיום התרבות ב E18 היו צפויים להיות שילוב של מחשבים אישיים, תאים מגרניט, CN, וכמה תאים Golgi. Calbindin 1 (CALB1), סמן מסוים של מחשבים אישיים, שימש למעקב אחר שינויים מורפולוגיים במהלך 21 יום קורס. ב-DIV 0, נמצאו גופי התא של המחשבים (לדוגמה, 10 עד 11 מתוך דגירה), אך הגדילה של neurite עדיין לא החלה (איור 2A). על ידי DIV 3, הארכה סיבי הראה התקדמות, בעוד תהליכים דנדריטים רק התחיל. מצב זה נותר כמעט ללא שינוי עד לשבוע השני במבחנה (WIV) (איור 2B-D). ב-DIV 10, כמה ענפים דלילים ודנדריטים הראשי עם הקוצים החלו לצמוח (איור 2E). בליבלוב הדנדטים הראשוניים החדשים התרחשו ברציפות לאחר DIV 14. לפיכך, לאחר DIV 14, מספר הדנדריטים המשניים והשלישוני גדל והתפתח סניפים רחבים ב-DIV 21 (איור 2F,G).

חשוב לדעת שהתזמון של שינויים מורפולוגיים במבחנה לא יכול לעקוב אחר אותה תבנית כמו בvivo. בעקבות התוצאות הללו, בניסוי אחר, המוח הE12 ביותר מבין השאר, מE13, E14, וE15 היו מתורבתים במשך 3 שבועות. המחשבים המתורערים מ-E12 ו-E13 לא פיתחו את כל הצמיחה הדנדריטית ב-DIV 18 למעט הרחבות סיבי (איור 3a,B). עם זאת, לאחר אותה תקופה של זמן, המוח המנתק הפרידיזציה בתרבויות מ E14 ו E15 הראה הצמיחה הדנדריטי ו arborization (איור 3C,D). זו וריאציה קצב הצמיחה בין תאים עצביים בתוך מבחנה שופך אור על שינוי גדול שקרה בסביבה הטבעית שלהם בין השלב המוקדם והמאוחר של התפתחות המוח, אשר צריך להיות מיושם בתוך מבחנה עבור אופטימיזציה בינונית.

יחד עם מחשבים אישיים, ישנם סוגים אחרים של תאים עצביים במוח הראשי המתפתחים במהלך בתרבויות המוח העיקרי מנתק כי ניתן להבחין באמצעות סמנים נוירוonal ספציפיים. לCALB1 החיסונית כפולה של מחייב סידן חלבון אלבומין, parvalbumin (PVALB), הראה כי CALB1 ביטוי היה מוגבל באופן בלעדי למחשבים בתרבויות המוח הראשי, בעוד PVALB ביטא CALB1+ נוירונים ( i.e., מחשבים) ו PVALB+/Calb1– נוירונים, שהם שכבה מולקולרית interneurons (סל/Stellate תאים) (איור 4a–C). יחידת המשנה האלפא (Nav1.6) של ערוץ הנתרן הסגור במתח (scn) הוא סמן עבור תאים מבוססי ומחשבים אישיים בחלק המוח20. תיוג כפול עם anti-SCN ו-anti-CALB1 מראה את הלוקליזציה של גופים תא הגרריר ומחשבים בינונית תרבותית ב-DIV 21 (איור 4D–F). עבור סוגים אחרים של תאים המוח מתרבויות המוח העיקרי הנתק, אנא ראה Marzban ו הוקס19.

איור 1: ההיבט הגבי של מוח העכבר מתאר את המוח הE18. הקרום מסומן בריבועים צהובים. מיקומו של המוח ההוא מחולק על ידי הקו הצהוב, אשר מוגבל rostrally על ידי המוח האמצע והוא מלווה על ידי לשד מוונגאטה (המוקף בקווים מקווקווים חומים). הורסטיות המוח הזעיר וחצי הכדור מוצגים על-ידי קווים מקווקווים חומים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2: פיתוח תאים Purkinje (מחשבים אישיים) נגזר מהמוח הE18 של העכבר בתרבות הראשית במשך ימים בתחום החוץ (DIV) 0 – 21. (א) מחשבsomata (ראשי חץ) סומנו על ידי immunofluorescence באמצעות אנטי-calbindin 1 (CALB1) ב-DIV 0 (אחרי 10 שעות). (ב) הסיומת הסיבי הראשונה (החץ) והגדילה הדנדריטית המוקדמת (ראש חץ) מופיעות ב-DIV 3. מוצלח והתפתחות דנדריטי של המחשבים ממשיכים ב-DIV 5 (C) ו-div 7 (D). הענפים הדנדריטים האישיים של המחשבים ברורים באופן ברור ב-DIV 10 (E) ו-DIV 14 (F) (חץ ראשי) ועצי דנדריטי מורכבים מסומנים ב-DIV 21 (ראש חץ) (ז). סרגל שורות: A = 100 יקרומטר (חל על פאנלים B, C, D, E ו-F); G = 50 μm. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: פיתוח תאים Purkinje (מחשבים אישיים) נגזר מתוך המוח הראשי של מE12, E13, E14, ו E15 לאחר 18 ימים בתרבות הראשית (DIV 18). האקסונים הם ההרחבות היחידות (חץ) מ somata PC בתרבות הראשית של E12 ו E13 הפריבלה הראשוניים לאחר 18 ימים מחוץ למוח (DIV 18) (A,B). המחשב ' דנדריטים מגדילה והרחבה להתפתח על ידי DIV 18 (ראש חץ) רק מ E14 (ג) ו E15 (ד) התרבויות הראשיות המוח. סרגל קנה מידה= 20 יקרומטר (חל על לוחות A-D). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

איור 4: מimmunofluorescence תיוג של מחשבים אישיים, האינטרנוירונים בתאי (סל ו stellate תאים), ואת התאים הגרסטי מE18 עכבר המוח העיקרי בתרבות DIV 21. (א-ג) תיוג כפול עם anti-CALB1 (ירוק) ו anti-PVALB (אדום) מראה מחשבים אישיים ו interneurons כמה (חץ) במגע עם arbors המחשב הדנדריטי. (ד-נ) ערוצי נתרן מגודרת מתח (SCNs) בגופים PC עם דנדריטים הפירט וגופים קטנים של תא הגרניט (ראש חץ) מסומנים עם anti-SCNS (אדום) ו כפול התווית עם anti-CALB1 (ירוק). קיצורים: התאים של Purkinje = מחשבים אישיים; CALB1 = קלבינדין 1; PVALB = parvalbumin; SCN = מגודרת מתח ערוץ נתרן. סרגל קנה מידה= 100 יקרומטר (חל על A-F). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

טבלה 1: קומפוזיציות מדיה.

. למחברים אין מה לגלות