April 29th, 2007
מאמר זה מדגים את לנתיחה ו הדגירה של הרשתית ארנב החלקיקים בתיווך העברת גנים של פלסמידים או קידוד ה-GFP מגוון רחב של סמנים subcellular לתאי הגנגליון ברשתית.
היי, שמי הוא, והיום אראה לכם את שיטות הדגירה של רשתית ארנב בוגר ואת הגן שלאחר מכן. נהדר. שוטף כמה שלטים. אני חושב שזה גם מייבש את הרשתית.
כן, זה נכון. זה נכון, זה נכון. כן. אז אתה מתכוון שכל המים מהתא יוציאו אותם מהתא כך שהם יתייבשו.
כן, אני חושב, כן. אז רקמות, זה בסדר. אה, זה בסדר.
זה בסדר. אז עכשיו הכנופיה מוכרת בצד הקדמי. זה, בואו נציג את עצמנו תחילה.
כן, אני טיאנה. אני אמארי. כבר נפגשתם. כן.
אז מה אני יכול לעשות עם השיטה הזו? ובכן, אתה יכול לתרבת סמינרים מקוונים למבוגרים. ומכיוון שאתה יכול גם להטמיע אותו ולבטא למשל GFP, זה מאוד שימושי לראות את המורפולוגיה של תאי מגל בצורה ברורה מאוד.
אז אתה יכול לעשות אנטומיה על התאים האלה או גם אתה יכול לתייג תאים עם DS אדום או עם GFP כדי למצוא אותם להקלטה מאוחרת יותר, הקלטת מגבר למשל. אפשר גם לבטא, למשל, חלבוני סמן סינפטי כמו PSD 95 GFP, וגם חלבונים אחרים שאולי יעניין אותך לחקור ברשתית, כמו תעלות יונים. זה יכול לשמש גם לביטוי RNA מעכב.כן.
אז מה המגבלות של ה-na, ובכן, אני חושב שכנראה החשוב ביותר הוא הזמן. אינך יכול לשמור על הרשתית יותר משישה ימים. הייתי אומר שאנחנו כבר לא סומכים על הרשתית אחרי שישה ימים.
הסיבה לכך היא שמדובר בהתפשטות ממוזגת כנראה, כן. ועכשיו אם אתה רק רוצה לבטא GFP, שמגיע אחרי 24 או 48 שעות, זו לא בעיה בכלל. אבל במקרים מסוימים, למשל, אם אתה רוצה לבטא RNA מעכב, כעת השפעות אלה עשויות לקחת ארבעה ימים או אפילו יותר להתפתח.
ואתה צריך לשמור על צירי הזמן האלה בפריים. פנימה, פנימה, פנימה. אתה חייב, כדי לוודא שאתה תראה את ההשפעה שלך תוך יום, בזמן שהוא קצר משישה ימים מכיוון שאתה לא יכול לשמור אותו באופן אמין יותר זמן.
אז זה יכול להיות אפשרי או לא אפשרי עם הניסוי שאתה מתכנן לעשות. אבל זו בהחלט המגבלה הגדולה ביותר. זה לטווח בינוני, נניח.
אז חלקם, חלק מה-RN ai עובדים תוך ארבעה ימים, אבל האחרים עובדים יותר. ימין. אולי זה לוקח חמישה או שישה ימים או יותר. במקרה כזה, זה לא מתאים לסוג כזה של מאי שגוי.
כן, אולי לא יהיה אפשרי. עלי לומר אולי שבזמן שאנו משתמשים בו לדגירה, זה עד שישה ימים. איננו רואים סימנים לארגון מחדש של הרשתית.
באמת הרשתית אכן נראית נורמלית מבחינה מורפולוגית. בסדר. אז מורפולוגיה של שישה ימים זה טוב, אבל קצת נשיאה ויזואלית, זה נראה לא אמין. מבחינה פיזיולוגית.כן. וגם אתה מתחיל לראות נפיחות של מאורה, משהו כזה.
אז לא, מה שהתכוונתי כשהרשתית נראית נורמלית הוא שמבנה השכבה של הרשתית עדיין שלם. ובאופן עקרוני, חלק מהתאים עדיין מגיבים לחיים. יכול להיות שגם קולטני האור מתים או מתנוונים לאחר שישה ימים.
אז זה עשוי להסביר מדוע איננו יכולים לתעד יותר באופן אמין את תגובות החיים. אבל בגדול, בעיקר הרשתית נראית נורמלית. בסדר. כל נקודה אחרת או, בסדר. בסדר.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מאמר זה מדגים את ניתוח וגידול רשתית ארנב והעברת גנים באמצעות חלקיקים של פלסמידים המקודדים GFP או מגוון סמנים תת-תאיים לתאי גנגליון רשתית.
Organotypic culture of adult rabbit retina provides a physiologically relevant system for studying retinal ganglion cell function and morphology. This approach supports target validation in neuroscience drug discovery by enabling live-cell imaging and genetic manipulation without specialized equipment. The system’s compatibility with electrophysiology and subcellular labeling enhances mechanistic de-risking for ocular therapeutic candidates.
The method fits within early discovery workflows where target engagement and subcellular trafficking are assessed prior to lead optimization, particularly for intravitreal or gene therapy modalities.