השתלה מונחית אולטרסאונד: טכניקה להשתלת תאי אדנוקרצינומה של צינור הלבלב בעכבר בוגר

- אולטרסאונד מספק תמונות ברזולוציה גבוהה המסייעות להשתיל תאים סרטניים באתר רקמה ספציפי עם דלקת מינימלית במהלך הזרקת תאי גידול. בראש ובראשונה, אנו משתמשים במודלים אורתוטופיים כדי להשתיל תאי גידול באיבר רלוונטי ממקור גידולי. האיבר מחקה את המיקרו-סביבה המקורית של הגידול ומאפשר גרורות.

התחל על ידי השעיית תאי הגידול ב- PBS קר כדי לשמור על pH ולהניח את הצינור על קרח. לאחר מכן, הניחו את העכבר המרדים על במת האולטרסאונד ואבטחו את הגפיים בעזרת סרט מעבדה. החל את הכמות הנדרשת של ג'ל אולטרסאונד על הבטן המגולחת והתאם את מיקום בדיקת האולטרסאונד עד שהלבלב נראה בבירור. לטעון את המזרק עם השעיית תאי הגידול בזהירות להזריק את התאים לתוך הלבלב.

בתמונת האולטרסאונד מופיעה בועה נוזלית, המאשרת השתלה מוצלחת. המתן 5 שניות כדי למנוע זרימה חוזרת של תאים והסר בעדינות את המחט. יש להחזיר את בעל החיים לכלוב נקי ולפקח עליו עד שיתאושש מההרדמה. תוך מספר שבועות מההזרקה, התאים הסרטניים המוזרקים בלבלב מתחלקים במהירות ויוצרים גידול. בפרוטוקול הבא נבצע השתלה מונחית אולטרסאונד של תאי אדנוקרצינומה צינורית לבלב שמקורם במורין בלבלב של המודל האורתוטופי.

- לפני תחילת ההליך, להשעות מחדש את קו תאי אדנוקרצינומה צינורית הלבלב של עניין בנפח מתאים של PBS קר סטרילי על קרח. הניחו את הכלובים על פלטת חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ונקו ביסודיות את ארון הבטיחות הביולוגי, תא האינדוקציה ובמת האולטרסאונד בעזרת חומר חיטוי מתאים. הגדר את פונקציית החימום של שלב האולטרסאונד ל -37 מעלות צלזיוס ולאחר השראת הרדמה, החל משחה על עיני החיה הראשונה.

הניחו את העכבר בשכיבה גבית על במת האולטרסאונד והדקו בעדינות את הגפיים העליונות והתחתונות לבמה בעזרת הקלטת. השתמשו באפליקטור סטרילי עם קצה כותנה כדי למרוח שכבה נדיבה של קרם אפילציה על הרביע השמאלי העליון של הבטן מעל אזור הטחול עד לקו האמצע. לאחר 1 דקה, להשתמש פד גזה יבש כדי להסיר בעדינות את השיער לפני הסרת קרם depilatory עודף עם גזה רטובה מלוחים. לאחר מכן, הניחו את העכבר באחד הכלובים הנקיים החדשים על המחמם.

להשתלת תאי גידול מונחי אולטרסאונד, התאימו את פלטפורמת האולטרסאונד כך שהמשטח יהיה מקביל לרצפה ועמדו לצד שמאל של החיה כשראש העכבר פונה ימינה. התאם את מיקום המתמר כך שתתקבל תמונת בטן רוחבית וחבר את גפי העכבר לפלטפורמה באמצעות סרט הדבקה. הורידו בעדינות את המתמר כדי ליצור מגע עם בטן העכבר והתאימו את המתמר עד שהלבלב נראה בבירור. אתר את הכליה והטחול השמאליים כדי לספק התמצאות מדויקת בחלל הבטן.

כאשר אתר ההזרקה אותר, טען מזרק אינסולין בגודל 29 אינץ 'וחצי אינץ 'עם 25 מיקרוליטר של תרחיף תאי הגידול ונגב את קצה המחט עם כרית הכנה סטרילית לאלכוהול. השתמש במלקחיים קהים כדי לתפוס את עור העכבר ואת דופן הצפק כדי להגביר את המתח באתר ההזרקה. החזקת המזרק בזווית של כ 25 עד 45 מעלות למשטח פלטפורמת האולטרסאונד, מקדמת לאט את המחט דרך העור ודופן הצפק. ודא שהמחט ניקבה דרך דופן הצפק לפני השימוש בהדמיה של אולטרסאונד כדי להנחות את המחט ישירות לתוך הלבלב.

כאשר המחט נמצאת במקום, להזריק לאט את תאי הגידול. היווצרות בולוס נוזלי בתוך הלבלב תהיה ניכרת בלבלב מוזרק כראוי על ידי אולטרסאונד. לאחר הזרקת מלוא נפח המתלה, ובולוס נוזל ניתן לראות על ידי אולטרסאונד, להחזיק את המזרק ללא תזוזה במשך מספר שניות לפני לאט למשוך את המחט מבטן העכבר, נזהר לא להפריע לתאים המוזרקים. לאחר מכן, הכניסו את העכבר לכלוב חדש ונקי על המחמם עם ניטור עד להחלמה מלאה.

- מיקום נכון של המחט בלבלב, כולל עומק המחט וזוויתה, הוא שלב קריטי בפרוטוקול זה. הדמיה של בולוס הנוזל מסייעת לאשר הזרקת גידול מוצלחת. שליטה בעומק ההזרקה היא ההיבט הקשה ביותר. עצתי היא לתרגל עם זריקות טריפאן-בלו ולאשר בולוס נוזלים הן על ידי אולטרסאונד והן על ידי נקרופסיה.