הזרקת תאי גידול עקבתיים: טכניקה להעברת תאים סרטניים להקמת מודל עכבר אורתוטופי לסרטן המעי הגס

- הזרקת גידול אורתוטופית Intracecal מספקת תאי גידול התואמים את היסטוטיפ הרקמה הצקלית ישירות לתוך הצקום של החיה המקבלת. כדי להתחיל, להכין עכבר מורדם לניתוח. חותכים את דופן הבטן שלו כדי להוציא את הצקום. לגרד את הקיר cecal כדי להפחית כל תנועה פריסטלטית במעיים. יישרו מזרק המכיל תא סרטן המעי הגס או תרחיף CRC במקביל מעל הצקום.

לאחר מכן, למתוח את cecum כדי להסיר את כל הקפלים. משכו בעדינות את הצקום מעל הצינורית כך שהקצה יחורר רק את קרום המעי החיצוני הדק, השקוף, או הסרוסה. לאחר מכן, הזריקו את תרחיף התא הסרטני לחלל שבין הסרוסה לשכבת השרירים הפנימית. ודא מסירה מלאה של מתלה התא ומשוך את הצינורית. להחזיר את הצקום לחלל הבטן ולתפור את החתך הניתוחי. אפשר לעכבר להתאושש.

בתוך ימים מרגע ההזרקה מתפתח גידול אורתוטופי במקום ההזרקה או שולח גרורות לרקמות או איברים מרוחקים. בפרוטוקול הבא נדגים טכניקת הזרקה של תאי סרטן המעי הגס כדי לפתח מודל עכבר CRC אורתוטופי.

- התחילו על ידי שימוש במלקחיים א-טראומטיים כדי לעצב בזהירות את הצקום של עכבר מדוכא חיסון בן שישה עד שמונה שבועות, והניחו את הקצה העיוור של הצקום על הבטן כך שהכיס יצביע בצורה גולגולתית. עבור הזרקה intracecal, להרכיב מזרק סטנדרטי 1 מיליליטר מצויד צינורית 30 מד וטען עם תאי הגידול על משאבת microinjection כי הוא מורכב על micromanipulator. לאחר מכן, השתמש במלקחיים א-טראומטיים כדי לתפוס בזהירות את קצה הצקום, והשתמש במלקחיים שנייה רטובה במי מלח חמים כדי להחליק בעדינות את הצקום במשיכות כלפי מטה.

כעת, העבירו את בעל החיים תחת מיקרוסקופ כירורגי דו-עיני, וכאשר הצינורית מקבילה ישירות לצקום ומעליו, השתמשו בשני מלקחיים א-טראומטיים כדי למתוח בזהירות את הרקמה בשני הקצוות של הקצה החיצוני של הצקום. משכו באיטיות את הצקום מעל הצינורית, תוך הקפדה שלא לנקב את כל דופן המעי או את הסרוסה, מעבר לנקודת החדירה הראשונית, והניחו את הצינורית מעל כלי הדם ומתחת לקרום השקוף הדק בתוך דופן המעי. כאשר הצינורית במקומה, השתמש במתג רגל כדי להזריק 20 מיקרוליטר של תאים במשך תקופה של 20 שניות בין רירית הסרוסה השקופה הדקה מעל כלי הדם התוך-מורליים לבין השרירים.

לאחר הזרקת כל התאים, הסירו בזהירות את הצינורית והניחו מקלון יבש מתחת לצקום. כדי למנוע הפצה מלאכותית של הצפק, יש לשטוף את כל התאים שדלפו בשטיפת מים מזוקקת יסודית ולהחזיר בעדינות את הצקום לחלל הבטן. סגור את דופן הבטן עם 6-0 תפרי ריצה הנספגים במהירות ואת העור עם קליפסים לפצעים כירורגיים. לאחר מכן, הניחו את העכבר על משטח חימום בטמפרטורה של 38 מעלות צלזיוס עם ניטור עד לשכיבה מלאה.