Microinjection עוברים א aegypti לקבל יתושים טראנסגנטי
July 4th, 2007
בסרטון הזה, Nijole Jasinskiene ממחישה את המתודולוגיה מועסק כדי ליצור מהונדס Aedes aegypti היתושים, אשר הם וקטורים עבור קדחת דנגה. טכניקות נכונה עבור הכנת מחטים microinjection, dessicating עוברים, וביצוע microinjection הם הפגינו.
אני כן. אני עובד במעבדה של אנטון ג'יימס. היום אני הולך להראות לכם כיצד לבצע מיקרו-הזרקה לעוברים במצרים של ADI במטרה להשיג יתושים טרנסגניים.
כדי לקבל את העוברים לזריקות מיקרו, אנחנו צריכים להאכיל את הנקבה בדם. הנקבות אמורות להיות מוזנות ביום חמישי. אם אתה רוצה לעשות מיקרו-הזרקה מיום שני עד שישי, זה גם נתעב.
אני לוקח את הכותנה ומכניס ושופך את המים. כותנה אמורה להיות רטובה ולקחת עיגול לבן של שלושה מ"מ, לשים את החלק העליון ולדחוף כלפי מטה. ואני צריך לשפוך את המים, לנקות את הגג, המפית ולסגור עם כותנה.
זה מוכן כרגע אני הולך לאסוף שש 10 נקבות ואני מעביר נקבות לנסיגה לזמן קצר ואני הולך להכניס אותן לתנאים חשוכים ולהכניס אותן לתא, שיש בו צלאם של 27 מעלות למשך שעה ו-15 דקות. אני מייצר מחטים להזרקת מיקרו באמצעות מחטי זכוכית ואנחנו משתמשים בתאגיד מכשירי מעבורת הקוטב ובדגם P 87. אני מכניס מחט זכוכית לתוך הטבעת ומתקן משני הצדדים.
סגור את המכסה ודחף את מחט המשיכה אדומה. עכשיו אני הולך להראות לך איך לעשות את זה כקישור של המחטים. המחטים לאחר המשיכה סגורות ועלינו לפתוח מחדש את המחטים.
ישנן שתי דרכים לעשות זאת. דרך אחת היא להיות קישור ודרך אחרת פשוט לגעת בעובר לפני הזריקות. אוקיי, זו דרכו של לין.
יש לי את המחט ואני מתקן את המחט הזו כאן. הנה מעל הטיפ שאיננו יכולים להשתמש בו להזרקת מיקרו. הטיפ הזה להזרקת מיקרו, אנחנו צריכים שיהיה לנו קצה פתוח.
זה הגלגל. אני מנסה לגעת במשטח הגלגל עם המחט וקצות המחט צריכות לגעת במשטח הגלגל. כאשר הקצה נוגע במשטח, אתה צריך לשים את הגלגל.
כאן תוכלו לראות שהמחט מוכנה להזרקה זעירה. קצה המחט הוא להיות ואתה יכול לראות שהקצה מבריק. המשמעות היא שהמחט פתוחה ומוכנה להזרקת מיקרו.
זכרו, רק את קצה הצינור צריך להישבר. אם אתה עושה חור גדול, המחט לא טובה. החור צריך להיות קטן מאוד.
עברה שעה ורבע והעוברים אמורים להיות מוכנים לזריקות מיקרו שאני לוקח מהחדר. קח לך זמן ותוכל לראות עוברים, מנה שחורה על הנייר וכרגע אני מעביר נקבות לכלוב. פשוט תנו להם לעוף פנימה.
עכשיו אני הולך להראות לכם את הכלים שבהם אני הולך להשתמש ליישור עוברים. זה מכריח אותי לקחת X נייר מהטבע. הכוחות האלה אני משתמש כדי לעשות קו של עובר.
הקיסר, אנחנו צריכים לחתוך סרט מקל כפול וזה כוח שאני משתמש בו כדי להוציא ביצים לאחר זריקות מיקרו. זהו פתק הכיסוי. לתלוש הכריכה הזה.
אני מצמיד סרט דבק כפול כדי לאסוף עוברים מנייר הוואטמן. עכשיו אני הולך ליישר את העוברים. בראשון אני לוקח נייר X מהתקופה הזאת.
אתה צריך לזכור שהנייר כל הזמן צריך להיות רטוב. אני הולך לרפד עוברים מאפור לאפור כהה. זהו שלב טוב לזריקות.
אל תיקח עוברים לבנים ושחורים, כל העוברים צריכים להיות באותו כיוון. יש לנו שני קטבים, אונטריו ופוסטר שאנחנו הולכים להזריק ב-Posterial.End. הצד של אונטריו קצת רחב מאחור.
זוהי תעודת כיסוי. אני הולך להכין תעודת כיסוי מוכנה לאסוף עוברים. לשם כך אני זקוק לסרט מקל כפול המחובר לכיסוי.
החלקה, חיתוך, גילים והחלקת הכיסוי מוכנים. כרגע אני צריך לייבש נייר X טוב מאוד כי אם העוברים רטובים, הם אף פעם לא נדבקים לסרט. לשם כך אני משתמש ב- MV ללא יבש.כרגע אני לוקח תלוש כיסוי וסרט סטייק כפול ולוחץ מעט מאוד על העוברים.
ויש לי עוברים על העטיפה. ועכשיו זה שלב הקיצוץ. שלב זה יצטרך לרוב לחכות במצב זה כדקה אחת אולי.
אבל אתה צריך להסתכל במיקרוסקופ ואתה יכול לראות את הביצים מתחילות להתכווץ. עוברים אלה מיובשים. אתה יכול לראות את הגומות וכשאתה רואה את הגומות האלה אתה צריך לשים שמן מיד ולהפסיק את הייבוש.
כאשר מייבשים עוברים, צריך לשים שמן מיד. העוברים מוכנים למיקרו-הזרקה ואני שם עוברים על הבמה ואני הולך למלא מחטים, DNA בשביל זה. אני משתמש בצינור נספח ומחט טעינה גם מנספח מכאן.
ואני לוקח את הדנ"א שלי ולוקח 1.5 מיקרוליטר. אוקיי ועומס והמחט ואני הצמדנו מחט למחזיק. והול מחובר למזרק המיקרו
.אנו משתמשים במזרק מיקרו einor, הנקרא Femto jet. עכשיו אני מוכן להזריק את העוברים. עבור נייר זה אנו משתמשים בלחץ הזרקה 600 לחץ אחורי 250 והזמן הוא ידני.
כרגע אני רואה עוברים מושלמים מאוד במיקרוסקופ. ואחרי זה אני מעביר מחט פנימה וגם אני צריך לראות בצורה מושלמת מאוד ולמקד את המחט במיקרוסקופ. לאחר מכן, אני מחזירה עוברים ויכולה לראות עוברים ומחט באותו שדה.
וכרגע חבר מחט קרוב מאוד לקצה האחורי של העוברים. ואני עושה הזרקה לקצה האחורי של העוברים. וקודם כל מה שאני עושה, קודם כל אני צריך לראות עוברים מאוד ברורים במיקרוסקופ.
אני מזיז את שלב המיקרוסקופ ותמיד רואה לאן המחט לא זזה. הזרקה טובה. ההזרקה המושלמת.
כשאתה רואה את הקצה האחורי ואתה מגיע למחט, גע בחלק האחורי ואתה חודר לתוכו ואתה לא יכול לראות שום התכווצות של ה-X, שום התכווצות כזו. אם אתה אוהב את זה, זה לא כל כך טוב. אבל אם x עדיין במצב כזה ואתה חודר למחט, זה אומר שהמחט שלך טובה מאוד וההזרקה טובה מאוד.
לאחר מיקרו-הזרקה, אני צריך להעביר את ה-EMRE פנימה, בתנאים רטובים. לשם כך אני משתמש בתא פלסטיק עם כותנה רטובה בתחתית ונייר רטוב. אני שמה את זה על הכותנה ובטוחה שהנייר הזה רטוב.
זה מוכן. אני לוקח את הכוח שלי. אני מלמדת את העוברים תחת שמן ותולה על הקיר על הנייר.
בבקשה אל תשים על התחתית כי שמן צריך לרדת מהעובר ואני, אני לוקח 2, 3, 5 עוברים בזמן אחד או אחד זה גם בסדר. עכשיו אני הולך להכין עוברים שיהיו מוכנים לחרקים. בשביל זה אני לוקח מגבון קרובים, מכסה את העוברים ומתקן בגומי.
וזה מוכן לחרקים למשך חמישה ימים. לאחר מכן אנחנו נשארים בבדיקה במשך חמישה ימים ולאחר מכן אנחנו הולכים לבקוע עם עובר, אה, ולקבל את הטרנסגנים. עכשיו אני בטיפול בנזעי חשמל ואני הולך להראות לכם איך לבקוע את העוברים.
ובראשון אני הולך לשפוך מים לתא הפלסטיק ולהוסיף את האוכל. זוג טיפות, קח את העוברים, שנשארים במזון insector חמישה ימים. קח את נייר הביצה, עשה חור קטן והניח עוברים.
זהו. העוברים מתחילים לבקוע לאחר הראשון בשבוע הראשון. וגם כמה עוברים מתחילים לבקוע לאחר ארבעה שבועות.
ותמיד יש לנו בחול, שלבים שונים של זחל ו-pu, רק הראיתי לכם איך לעשות מיקרו-הזרקה לעוברים של dete. ואני רוצה לומר ששלושה שלבים חשובים מאוד בהליך הזה. אתה צריך להכין מחטים טובות מאוד.
אתה צריך לאסוף עוברים בשלב הנכון. יש לבצע גם ייבוש בצורה מדויקת מאוד, לא יותר מדי. בעוד כארבעה שבועות יהיו לנו יתושים מהונדסים.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה כללית
הסרטון הזה מדגים את המתודולוגיה להפקת יתושים מהונדסים גנטית מסוג Aedes aegypti, שמהווים וקטורים חשובים למלריה. התהליך כולל הכנת מחטים להזרקה מיקרוסקופית, ייבוש עוברים, וביצוע הזרקה מיקרוסקופית.
רכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- גנטיקה
- אנטומולוגיה
- ביולוגיה של וקטורים
רקע
- יתושים מסוג Aedes aegypti הם וקטורים למלריה.
- טכניקות מהונדסים גנטית יכולות לעזור בשליטה באוכלוסיות היתושים.
- הזרקה מיקרוסקופית היא שיטה קריטית לשינוי גנטי.
- הכנה נכונה של עוברים היא חיונית להצלחת ההזרקה המיקרוסקופית.
מטרת המחקר
- להדגים את יצירתם של יתושים מהונדסים גנטית מסוג Aedes aegypti.
- לספק מדריך שלב אחר שלב לחוקרים.
- להעמיק את ההבנה של גנטיקה של יתושים ואסטרטגיות שליטה בווקטורים.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הכנת מחטים להזרקה מיקרוסקופית.
- ייבוש עוברים.
- הזרקה מיקרוסקופית של חומר גנטי לעוברים.
- שימוש ביתושים נקבות שניזונו מדם לאספקת עוברים.
תוצאות עיקריות
- הכנה מוצלחת של מחטים להזרקה מיקרוסקופית.
- טכניקות ייבוש יעילות לעוברים.
- הדגמה של תהליך ההזרקה המיקרוסקופית.
- ייצור יתושים מהונדסים גנטית כתוצאה מהתהליך.
מסקנות
- המתודולוגיה חיונית להתקדמות המחקר הגנטי ביתושים.
- יתושים מהונדסים גנטית מסוג Aedes aegypti יכולים לתרום למאמצי השליטה בווקטורים.
- טכניקות נכונות מבטיחות שיעורי הצלחה גבוהים בהזרקה מיקרוסקופית.
שאלות נפוצות
Executive Industry Relevance
Microinjection of Aedes aegypti embryos enables the generation of transgenic mosquito lines, supporting vector biology research and genetic tool development. This capability is critical for early-stage target validation and functional genomics in vector-borne disease programs. Reliable embryo manipulation and transgenesis underpin predictive confidence in downstream screening and translational studies.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables functional interrogation of gene targets in a disease-relevant vector system.
- Supports biological de-risking by allowing direct genetic manipulation and observation of phenotypic outcomes.
- Facilitates portfolio triage by providing a platform for hypothesis-driven validation of vector control strategies.
Screening & Assay Development
- Prepares validated transgenic mosquito lines for use in downstream phenotypic or molecular assays.
- Standardizes embryo handling and microinjection steps to ensure reproducibility across experiments.
- Enables scalable production of genetically modified lines for compound or genetic screening.
Translational & Preclinical Research
- Provides a foundation for translational studies linking genetic modifications to vector competence or disease transmission.
- Ensures continuity from genetic manipulation through to preclinical evaluation of vector control interventions.
- Supports predictive de-risking by enabling mechanistic studies in a relevant organism.
Pipeline & Workflow Integration
This microinjection protocol is positioned at the interface of early discovery and preclinical research, enabling the creation of genetically defined mosquito models for downstream validation and screening.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification through targeted gene manipulation.
- Screening: Provides reproducible transgenic lines for assay development and compound evaluation.
- Analytics: Enables quantitative assessment of genetic and phenotypic outcomes in modified embryos.
- Translational Research: Bridges early genetic studies with preclinical vector control research.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable workflow for generating and maintaining transgenic mosquito lines.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in vector biology studies.
- Operational Value: Standardizes microinjection and embryo handling for reproducible outcomes.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision-making and capital efficiency in vector control portfolios.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of genetic and vector-based interventions.
Implementation Considerations
- Requires technical expertise in microinjection and embryo staging.
- Needs specialized instrumentation for needle preparation and injection.
- Demands cross-team standardization of embryo handling and desiccation protocols.
- May require adaptation for different mosquito strains or related vector species.
- Success depends on precise control of desiccation and injection parameters as demonstrated.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
10:18
Micromanipulation and Microinjection
0:29
Embryo Collection
5:30
Alignment and Manipulation of Embryos
2:26
Preparing Microinjection Needles
13:59
Post Injection Treatment of Embryos
8:22
Dessication of Embryos
16:50
Conclusion
0:00
Introduction
15:25
Hatching of Larvae
