אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:59 דק׳ • April 30th, 2023
נויטרופילים בצפיפות נמוכה, או LDNs, הם תת-אוכלוסיית נויטרופילים מובהקת הנמצאת במספרים גבוהים במהלך מצבים פתולוגיים כמו סרטן מערכת העיכול. ניתן לבודד LDNs משטיפת חלל הצפק או מנוזל השטיפה של חולים.
ראשית, סנן את נוזל השטיפה כדי להסיר פסולת רקמות. צנטריפוגה את המסנן כדי להשיג גלולה המכילה תאי דם, כולל LDNs. השעו אותו מחדש במאגר מתאים. שכב מתלה זה על מדיום שיפוע צפיפות מתאים האופטימלי לבידוד LDN.
צנטריפוגה להפרדת מרכיבי הדם השונים על סמך הצפיפות היחסית שלהם. ה-RBCs הצפופים יותר יוצרים את השכבה התחתונה, בעוד שחלק הפלזמה הפחות צפוף יוצר את השכבה העליונה. ה-LDNs הפחות צפופים תופסים את שכבת הביניים יחד עם תאים חד-גרעיניים אחרים.
העבירו את שכבת הביניים לצינור טרי המכיל מגיב חוסם. רכיבי המגיב חוסמים אתרי קשירה לא ספציפיים על כל משטחי התאים שאינם מטרה ומגדילים את הספציפיות של LDN במהלך התיוג שלאחר מכן.
הוסף מיקרו-חרוזים מצומדים לנוגדנים המכוונים למולקולת משטח תא ספציפית המתבטאת יתר על המידה ב-LDNs. דגירה כדי שמתחמי הנוגדנים-חרוזים ייקשרו למולקולות המטרה שלהם ב-LDNs.
העבירו את המתלה המודגר דרך עמוד הממוקם בשדה מגנטי. תחת ההשפעה המגנטית, כל קומפלקסי המיקרו-חרוזים של LDN נצמדים לדופן העמוד בזמן שתאים לא מסומנים עוברים דרכו.
הסר את העמודה. שטפו את התכולה באמצעות מאגר מתאים כדי לאסוף ולאסוף את החל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים