אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:52 דק׳ • July 8th, 2025
אסטרוגנים הם הורמונים סטרואידים הפועלים כמולקולות איתות אנדוקריניות ונקשרים לקולטנים גרעיניים - קולטני אסטרוגן בטא, ויוצרים קומפלקסים של קולטני אסטרוגן-בטא.
קומפלקסים אלה של קולטני ליגנד מתעמעמים ויוצרים הומודימרים בציטופלזמה של התא. ההומודימר שנוצר נכנס לגרעין, נקשר לאלמנט תגובת האסטרוגן, ERE - רצף DNA ספציפי בתוך מקדם גן המטרה - ויוזם שעתוק.
כדי לקבוע את הפעילות האסטרוגנית של פיטואסטרוגנים - מטבוליטים משניים שמקורם בצמחים המחקים את תפקוד האסטרוגן - התחל בצלחת מרובת בארות המכילה תאים מדווחים תלויים בתווך מתאים.
תאי הדיווח מהונדסים לבטא יתר על המידה את קולטני האסטרוגן בטא ומועברים עם גן לוציפראז המותך למקדם ERE. הוסף את תמיסת הדגימה המכילה פיטואסטרוגנים ודגירה.
במהלך הדגירה, הפיטואסטרוגן נקשר לקולטני האסטרוגן, בטא - המתבטא בתאי המדווח. לאחר שנקשרו, קומפלקסי קולטני הפיטואסטרוגן מתעמעמים ועוברים לתוך הגרעין.
בתוך הגרעין, הקומפלקס הדימרי נקשר ל-ERE. הקישור יוזם שעתוק גן לוציפראז, ומייצר את האנזים לוציפראז. לאחר מכן, הסר את המדיום והוסף מגיב המכיל מצע ללוציפראז. דגירה כדי לאפשר לאנזים לוציפראז המתבטא לחמצן את המצע שלו ולייצר זוהר.
מדוד את הזוהר, המאשר את הפעילות האסטרוגנית של התרכובת בדגימה.
מערבולת הדגימות. לאחר מכן, הוסף 4 מיקרוליטר מכל דגימה ל-496 מיקרוליטר של מדיום סינון תרכובות, כ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים