ביסוס תרביות איברים נשירים ונשירים כמודלים אקס ויוו של ממשק אם-עובר אנושי

התחל עם דגימות שליה villous ו-decidual parietalis.

נתחו את הווילוס - רקמה בעלת כלי דם טובים המכילה עמודות תאים טרופובלסטים חוץ-וויליים, או EVT.

העבירו את הווילוס על מטריצה חוץ-תאית, מצופה ECM המונח בבאר תרבית רקמה.

קחו את הדגימה הבאה; נתחו את הדצידואה - רקמת רחם המקיפה את העובר המתפתח.

הנח את הדצידואה על טרנסוול אחר מצופה ECM.

הוסף מדיום מתאים לבארות תרבית הרקמות כדי לשמור על לחות, תוך שמירה על הטרנסוולס נטול מדיום.

ללא מדיום, עמודות תאי ה-EVT מפרישות חלבונים המבקעים חלבוני ECM.

זה יוזם שיפוץ ECM, ויוצר מקום לתאי EVT לפלוש ולהיצמד היטב למטריצה.

בינתיים, התאים האחרים של ה-villous ו-decidua מתחברים ל-ECM על ידי הפעלת קולטני אינטגרין, המתקבצים כדי להיקשר בשיתוף פעולה למטריצה.

תהליכים אלה מחזקים את הידבקות התא ל- ECM, ומטמיעים היטב את הרקמות.

לבסוף, הוסף מדיה ספציפית לרקמה לטרנסוול לצמיחת תרבית.

באמצעות טכניקה סטרילית במכסה מנוע של תרבית רקמות, יש להפשיר קבצי מטריצה חוץ-תאית על קרח, ולאחר מכן, לדלל את המטריצה החוץ-תאית המחוממת ביחס של 1 ל-1 עם מדיום איסוף קר כקרח. מערבבים את המתלה עם פיפטינג, מקפידים לא לגרום לבועות.

לאחר מכן, הניחו תוספות transwell עם נקבוביות של 0.4 מיקרון לבארות בודדות של צלחת תרבית רקמות בת 6 בארות ומצפים כל תוספת ב-100 מיקרוליטר של מתלה המטריצה החוץ-תאית. מניחים את הצלחת על קרח, ושוטפים את הדגימות פעמיים במדיום איסוף, ומעבירים את הרקמה לצלחת פטרי סטרילית תחת מיקרוסקופ מנתח לאחר הכביסה השנייה.

הדגימות מכילות 2 סוגים נפרדים של רקמות דצידואליות; decidua parietalis ו-decidua capsularis. באמצעות מספריים ומלקחיים סטריליים המנתחים קפיצים, ניתחו את הדצידואה פריאטליס לחתיכות של 3 מילימטר מעוקב, השתמשו במלקחיים כדי להקניט כל דם אימהי קרוש והשתמשו במלקחיים כדי להעביר 3 או 4 חתיכות של דצידואה לכל טרנסוול.

זהה את הווילי בעל כלי הדם היטב עם עמודי תא טרופובלסטים חיצוניים בולטים והשתמש במלקחיים כדי להעביר 3 או 4 עצי וילוס לכל טרנסוול. התאם את הענפים, כך שהעצים ימוקמו שטוחים על גבי המטריצה החוץ-תאית והפרידו את כל הענפים הגושים. לאחר מכן, הוסיפו 1 מיליליטר של מדיום איסוף לתחתית כל באר ודגרו על התרביות למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס ב-5% פחמן דו חמצני. 12 עד 16 שעות לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של מדיום התרבית המתאים לחלק העליון של כל טרנסוול.