In vivo fluorescence imaging כדי למקם נוגדנים במודל xenograft גידול עכבר

התחל עם מזרק המכיל קולטן חומצה פולית אלפא-1 המבטא תאי גידול יונקים במדיום מטריצת קרום מרתף.

משוך את עור העכבר והזריק את תרחיף תאי הגידול לשכבה התת עורית.

במהלך הדגירה, קרום הבסיס יוצר מטריצה חצי מוצקה, דמוית ג'ל, הלוכדת את תאי הגידול ומקלה על הצמדתם לאתר ההזרקה.

עם הזמן, תאי גידול יונקים מחוברים מתרבים והופכים לכלי דם, ויוצרים קסנוגרפט גידול מוצק.

הזריק את קולטן החומצה הפולית המכוון לנוגדנים פלואורסצנטיים לווריד הזנב של העכבר נושא הגידול המורדם

לאחר ההזרקה, הנוגדנים המסומנים מגיעים לאתר הגידול.

הנוגדנים נקשרים לקולטני החומצה הפולית בתאי הגידול, מה שמוביל ללוקליזציה הספציפית שלהם על קסנוגרפט הגידול.

העבר את העכבר לתא ההדמיה ומדוד את אות הקרינה במרווחי זמן קבועים.

אות הקרינה המשופר בתוך קסנוגרפט הגידול מאשר את הלוקליזציה הסלקטיבית של נוגדנים.

כדי לפתח השתלות עכבר, הרם בעדינות את עור החיה והפריד אותו משכבת השריר הבסיסית. הזרקו לאט 100 מיקרוליטר של תרחיף תאים מתחת לעור בעזרת מחט בגודל 26. המתן מספר שניות לפני הוצאת המחט כך שמדיום מטריצת המרתף יוכל ליצור את המבנה דמוי הג'ל המוצק למחצה יחד עם תאים מתחת לעור, מה שימנע מהתערובת לצאת מאתר ההזרקה.

כדי לבצע הדמיה in vivo, הזריק את הנוגדן המסומן בצבע דרך וריד הזנב. לאחר הרדמת העכבר, בדוק אם אין תגובה לרפלקסים עובריים, והרחיב את הווריד על ידי מריחת מים חמים.

השתמש במזרק אינסולין בנפח 1 סמ"ק עם מחט בגודל 26 כדי להזריק 25 מיקרוגרם של הנוגדן המסומן בנפח של 100 מיקרוליטר. כבקרה שלילית, סמן והזריק את נוגדן האיזוטיפ IgG הלא ספציפי, שאינו מכוון לתאים סרטניים.

בצע הדמיה in vivo 8, 24 ו-48 שעות לאחר הזרקת נוגדנים. בתוכנת ההדמיה, לחץ על אתחול ואשר שטמפרטורת השלב היא 37 מעלות צלזיוס. בלוח הבקרה, הגדר הדמיה פלואורסצנטית באמצעות אשף ההדמיה והגדר את העירור ל-773 ננומטר ואת הפליטה ל-792 ננומטר.

העבירו את העכבר המורדם לתוך תא ההדמיה ומקמו אותו בשדה ההדמיה באמצעות חרוט האף. כשתהיה מוכן, לחץ על Acquire בלוח הבקרה לרכישת התמונה ולחץ על Auto Expose. התמונה שנוצרה היא שכבת העל של הקרינה על התמונה הצילומית עם עוצמת הקרינה האופטית המוצגת ביחידות של ספירה או פוטונים.