גרימת פגיעה מוחית טראומטית חודרת בזבובי דרוזופילה בוגרים

קחו לדוגמה זבובי דרוזופילה בוגרים שזה עתה הופיעו מהונדסים גנטית.

גופי פטריות במוחו של הזבוב מכילים נוירונים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים ירוקים.

גופי פטריות הם מבנים המכילים רשתות עצביות מורכבות החיוניות ללמידה וזיכרון.

הרדמו את הזבובים על כרית פחמן דו חמצני.

תחת מיקרוסקופ סטריאו המצויד במסננים הנדרשים, דמיינו את גופי הפטריות המבטאים פלואורסצנטיות ירוקה.

קח סיכת Minutien מחוטאת ודחף אותה דרך קפסולת הראש לגוף הפטרייה.

זה גורם נזק לתאי עצב בגוף הפטריות ומשבש את רשתות העצבים, וגורם לפגיעה מוחית טראומטית חודרת.

לאחר מכן, הסר בעדינות את הסיכה מהזבוב.

הניחו את הזבובים הפצועים בבקבוקון עם מזון ואפשרו להם להתאושש למחקרים נוספים.

לאחר הרדמת הזבובים על כרית פחמן דו חמצני, מיין זבובים זכרים צעירים F1 שזה עתה נסגרו תוך שש שעות מרגע האקלוזיה, והניח אותם בבקבוקונים נקיים המכילים מזון עם 40 זבובים או פחות בכל בקבוקון. לאחר מכן, יש לחטא סיכות זעירות על ידי הנחת כ-100 פינים בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר מלא ב-70% אתנול למשך חמש דקות. לאחר מכן, חטאו את כרית הפחמן הדו חמצני במכחול על ידי ריסוס 70% אתנול וניגוב יבש עם טישו נקי ונטול מוך.

לאחר שהכלים נקיים ויבשים, העבירו 40 זכרי F1 ממוינים או פחות על הכרית הנקייה והפרידו אותם לשתי קבוצות. קבוצה אחת תשמש כזבובי ביקורת שלא נפגעו, וקבוצת הניסוי השנייה תהיה נתונה לפגיעה מוחית טראומטית חודרת. לאחר מכן, בעזרת מלקחיים, משוך ארבעה עד חמישה פינים זעירים חדשים מתוך צינור המיקרו-צנטריפוגה, והנח אותם ליד קצה כרית הפחמן הדו-חמצני. לאחר מכן, תחת טווח הניתוח, בחר סיכת זעיר ישרה עם חוד חד. השתמש שוב בפינים חדים והנח פינים פגומים או קהים בצינור נפרד המכיל 70% אתנול לסילוק בטוח.

לאחר מכן, עבור זבובים עם הגנוטיפ הצלב הסטנדרטי, הפעל את מנורת ה-LED הסטריאומיקרוסקופית המצוידת במסנני העירור והפליטה המתאימים לחלבון הפלואורסצנטי הירוק, המאפשר עירור ב-440 עד 460 ננומטר ומאפשר הדמיה ב-500 עד 560 ננומטר. לאחר מכן, בחרו זבוב מקבוצת הניסוי, ומקמו את הזבוב כך שלנסיין תהיה מבט גבי על קפסולת הראש עם ראש הזבוב ימינה. בעזרת מלקחיים, הרם והחזק את סיכת הפרטים שנבחרה ביד אחת, ואת המכחול ביד השנייה. לאחר מכן, הניחו את המברשת על החלק הפנימי של בית החזה הגבי ודחפו בעדינות כלפי מטה כדי לייצב את הזבוב.

כוונו את קצה הסיכה הקטנה אל גופי הפטריות, גופי התאים בצד ימין של הראש, וחדרו לקפסולת הראש. אם אתה משתמש בציוני דרך, כוון את ציפורן הראש הגבי בין האוקלי לשפת הגב של העין. לאחר השלמת הפציעה, השתמש במברשת כדי לדחוף את הראש בעדינות מהסיכה הקטנה. אם משתמשים במוח לריצוף RNA או qRT-PCR, בצע פגיעה שנייה בצד שמאל של הראש. לאחר שכל זבובי הניסוי נפצעו, הניחו את זבובי הביקורת והפצועים בבקבוקונים נפרדים המכילים מזון.