שימוש במודל של בעלי חיים אלח דם להערכת טיפולים צמחים רומן

אלח דם מתייחס תסמונת תגובה דלקתית מערכתית עקב זיהום מיקרוביאלי, והוא יכול להיות מדומה על ידי טכניקה כירורגית כינה קשירת לנקב cecal ו (CLP). כאן אנו מתארים שיטה להשתמש CLP-Induced מודל החיה למסך צמחי מרפא עבור סוכני טיפולית.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לייצר מודל עכברי של אלח דם על ידי הליך כירורגי הנקרא SQL Ligation and Puncure, או CLP. זה מושג על ידי ביצוע חתך קו אמצע של 1.5 עד 2 סנטימטר בבטן של עכבר. לאחר מכן, הסקום נחשף וקושר ואז הנסיב מנוקב כדי לגרום לטרנסלוקציה של חיידקים.

לבסוף, החתך נסגר. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות עלייה ברמות הציטוקינים המערכתיים והצפק כמו גם תסמינים כמו עייפות וקטלניות. מה שאני הולך להראות לכם הוא לייצר מודל אלח דם בעכבר שנקרא sation and pincure, אשר שונה מהמודל המקורי שפותח על ידי ד"ר צ'נדרי ומשתפי הפעולה שלו.

היתרון העיקרי הממוצע של דגם זה הוא שזהו המודל הרלוונטי ביותר של אלח דם. בנוסף, הוא פשוט, מאופיין היטב ואפשרי מבחינה כלכלית, ולכן נעשה בו שימוש נרחב בתחום חקר אלח דם ודלקות. כדוגמה, נדגים את השימוש במודל זה כדי להעריך את הפוטנציאל הטיפולי של תמצית צמחים באלח דם.

להכנת תמצית הצמחים, יש להשרות 10 גרם עשבי תיבול ב -200 מיליליטר מים בטמפרטורה של 85 מעלות צלזיוס למשך שעה עד ארבע שעות כדי להסיר חלקיקים בלתי מסיסים, לצנטריפוגה את חלק המים ב -3, 300 גרם למשך 20 דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, סנן את הסופרנטנט דרך מסנן 0.2 מיקרון. לאחר מכן יש לרכז עוד יותר את המסנן באמצעות מסנן צנטריפוגלי עם חתך משקל מולקולרי של 10,000 קילו-דלטון וסיבוב ב-5,000 גרם למשך 60 דקות בארבע מעלות צלזיוס.

שימוש בתרביות מקרופאגים סינן שברים בעלי משקל מולקולרי נמוך וגבוה לעיכוב פעילויות של מתווכים פרו-דלקתיים מאוחרים, כגון קבוצת ניידות גבוהה קופסה אחת או HGB. כדי להתחיל בבידוד מקרופאגים תחילה, אינטרפריטונאלי נתן שני מיליליטר של מרק גליקול 4% TH לעכברים רגילים לאחר שלושה ימים של קציר תרבית מקרופאגים צפקית ראשונית, המקרופאגים ב-DMEM הוסיפו 10% FBS, שני מילי-מולרי גלוטמין ו-1% פניצילין. סטרפטומיצין שוטף בעדינות את המקרופאגים הדבקים באופטימום ודוגר אותם באותו מדיום למשך שעתיים.

לאחר מכן לעורר אותם עם האנדוטוקסין החיידקי ליפופוליסכריד או LPS 16 שעות לאחר הגירוי. אסוף את המדיום המותנה בתא והשתמש בו לביצוע כתמים מערביים. כדי למדוד את הרמות של HM GB אחד.

כמת את עוצמת הרצועה באמצעות עקומה סטנדרטית שנוצרה עם H mgb מטוהר כדי לבסס אלח דם לאחר הרדמת עכבר בהזרקה תוך שרירית של 75 מיליגרם לק"ג קטמין ו-20 מיליגרם לק"ג קסילזין. ושימוש בצביטה בבוהן כדי לבדוק את רמת ההרגעה שלו. הניחו את העכבר במצב שכיבה, נקו את הבטן, ואז בצעו חתך בקו האמצע של 15 מילימטר כדי לחשוף את הצקום כחמישה מילימטרים מקצה ההמשך עם תפר משי של ארבעה.

קשרו את הצקום, ולאחר מכן ניקוב את גדם ההמשך הקשור פעם אחת כדי לאפשר שחול של הצואה, החזירו מיד את הצקום למקומו התוך-בטני הרגיל וסגרו את הבטן. לאחר שבעלי החיים חוזרים להכרה ולניידות. החזירו את הכלוב לחדר החיות תוך 24 שעות.

לאחר CLP יש לתת 200 מיקרוליטר של תמצית צמחים או לשלוט מדי יום למשך שלושה ימים. עקוב אחר ההישרדות של בעל החיים כל עוד יש צורך תוך מספר שעות לאחר קשירה וניקוב, או ניתוח CLP. בעלי חיים מראים סימנים קליניים של אלח דם הכוללים זקפה, עייפות, הצטופפות וירידה בצריכת מזון ומים.

בעלי חיים המפתחים דלקת צפק חמורה עם זיהום מערכתי עוקב מתים בדרך כלל תוך 48 עד 96 שעות. עם זאת, אפילו בעלי חיים תואמים לגיל, מין ורקע גנטי יכולים להגיב לניתוח בצורה מובחנת במהלך אלח דם ניסיוני, למשל, 48 שעות לאחר CLP. בעוד שחלק מבעלי החיים התקרבו למצב התל כפי שהוגדר כאן, אחרים עשויים להישאר במצב שאינו גוסס.

סקרים מקיפים של ציטוקינים במחזור הדם חשפו הבדלים דרמטיים ברמות של מספר ציטוקינים, כולל IL 6, kc, MIP 2 ו-ST nfr, אחד בין עכברים במצב גוסס ולא גוסס. יש לציין כי מתווכים דלקתיים אלה סווגו כסמנים חלופיים של אלח דם מכיוון שרמות המחזור שלהם הן מנבאים אמינים לתוצאה קטלנית באלח דם ניסיוני או קליני. בנוסף, CLP גרם לשחרור מקומי של ציטוקינים וכימוקינים פרו-דלקתיים וכימוקינים שונים, למשל, 48 שעות לאחר CLP, כמויות משמעותיות של הציטוקין IL 6 והכימוקינים KC ו-MI P 2 עדיין ניתנות למדידה לא רק באופן סיסטמי בדם, אלא גם באופן מקומי בנוזל השטיפה הצפקית.

כאן, היכולות של תמציות צמחים שונות או תרכובות בקרה הוערכו על יכולתן לעכב שחרור HGB אחד המושרה על ידי אנדוטוקסין. אלה שהיו בעלי יכולת לעכב שחרור HGB אחד נבדקו עוד in vivo באמצעות מודל עכבר של אלח דם. בגלל הקינטיקה המאוחרת והממושכת של הצטברות HGB אחת באלח דם ניסיוני, המנה הראשונה של מעכבי HGB one ניתנה 24 שעות לאחר הופעת אלח דם, נקודת זמן שבה עכברים פיתחו סימנים ברורים של אלח דם, כולל עייפות, שלשולים ופילו-זקפה, כפי שמוצג כאן, עיכוב ומתן חוזר של רכיב T ירוק עיקרי epi Gallo, קטכין 3 GALLATE או EGCG החל מ-24 שעות לאחר הופעת אלח דם, הציל משמעותית עכברים מאלח דם קטלני גם כאשר ניתן דרך הפה EGCG עדיין הציל עכברים מאלח דם קטלני, והגדיל משמעותית את שיעורי ההישרדות של בעלי החיים מ-16% ל-44%לאחר ששלטו בקשירה זו וניתן לסיים את מודל הניקוב תוך פחות מחמש דקות אם זה נעשה כראוי.