איסוף רוק ומדידת קורטיזול רוק ואלפא-עמילאז בקהילה שברירית המתגוררת בקשישים באמצעות בני משפחה מטפלים
December 18th, 2013
אנו מדגימים: (1) נהלים לאיסוף דגימות רוק בקשישים לקויים קוגניטיביים על ידי בני משפחה מטפלים במסגרת הביתית, (2) נהלים למדידת פעילות מתח באמצעות קורטיזול ברוק ואלפא עמילאז, ו-(3) פרופילים מייצגים. פרוטוקולים המאפשרים לחוקרים לחקור תהליכים הקשורים ללחץ מקדמים את ההבנה שלנו לגבי רגישות ורגישות ביולוגית.
המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים את האיסוף והניתוח של מדדים ביולוגיים ברוק באוכלוסייה שברירית מבחינה רפואית המתגוררת בקהילה. זה מושג על ידי הרכבה תחילה של ציוד איסוף הרוק הדרוש. השלב השני הוא לארגן את ביקור הבית, לספק את הציוד ולהדגים את הליכי איסוף הרוק למטפל.
לאחר מכן, ספקו הוראות כתובות וענו על כל שאלה. השלב האחרון הוא החזרת דגימות הרוק למעבדה וביצוע הליכי הבדיקה. בסופו של דבר, הפרוטוקול נועד למדוד את הפרופיל היומי של ריכוזי אלפא עמילאז ברוק וקורטיזול ברוק בחולים שבריריים מבחינה רפואית המתגוררים בקהילה.
שיטה זו תענה על שאלות מפתח בתחומי המחקר הביו-התנהגותי כדי לשפר את ההבנה שלנו לגבי רגישות ביולוגית ורגישות סביב תהליכים הקשורים ללחץ. לפני קביעת ביקור בית להסכמה, המשתתפים אוספים ומרכיבים את האספקה הדרושה, הכוללת ארבעה מטושים לילדים פסיכומטריים, ארבעה צינורות אחסון מטושים, ארבעה מכסי שפופרות מקודדים בצבע, חמש תוויות לבנות, שקית פלסטיק אחת של זיפלוק, גיליון הוראות לאיסוף רוק, חמש כפפות ניטרו וקופסת אחסון. בעזרת יד עטויה כפפת ניטרו, הכניסו ארבע ספוגיות לילדים של סלומה לתוך ארבעת צינורות האחסון של הספוגיות וכסו אותן במכסי צבע צהוב, כתום, כחול וסגול בהתאמה.
לאחר מכן, הניחו תווית על כל צינור אחסון כדי לציין את זמן האיסוף. הנח את ארבעת צינורות האחסון המכסים, גיליון ההוראות לאיסוף הרוק וארבע כפפות ניטרו בשקית ה-Ziploc, ותייג אותו עם מזהה הנושא ותאריך האיסוף. בהתאם ללוח זמנים זה, ביקור בית קצר לנבדקים בהסכמה מראש וביום שלפני דגימת הרוק.
לאחר ההגעה לביתו של הנבדק, יש לספק את שקית הניילון של הציוד ואת דף ההוראות לאספן הרוק. עיין בגיליון ההוראות והדגיש את הצורך לתעד את זמני ההתחלה והעצירה של איסוף הרוק על ידי הדגשת ההוראות הכתובות. רשום את השם, המינון ולוח הזמנים של כל תרופות המרשם והתרופות ללא מרשם שנלקחו על ידי המשתתף במהלך 48 השעות האחרונות.
הנחו את אספן הרוק או SC למרוח כפפת ניטרו על היד הדומיננטית. אמרו למשתתף להטות את ראשו קדימה כדי לאפשר לרוק להצטבר על רצפת פיו. לאחר מכן, הורה ל-SC לפתוח את צינור האחסון של המקלון ולהחזיר את המקלון דרך הפה.
הורה ל-SC להניח את ספוגית הפה מתחת לקדמת הלשון של המבוגר המבוגר כדי לספוג כשלוש טיפות מהרוק שנאגר ולהחזיק את ספוגית הפה במקומה למשך שתי דקות כדי להבטיח שהיא רוויה, בקש מה-SC להחזיר את ספוגית הפה הרוויה בחזרה לסל של צינור אחסון המקלון, והחזר את המכסה. לאחר מכן, בקש מה-SC להניח מיד את הצינור בקופסת האחסון ולהניח אותו במקפיא. לאחר השלכת הכפפה לפח האשפה, ייעץ ל-SC לרשום את זמני ההתחלה והעצירה בגיליון הוראות הרוק.
לאחר מכן, הודיעו ל-SC שהם יאספו דגימות רוק בארבע הזדמנויות למחרת, במיוחד בהתעוררות 30 דקות לאחר ההתעוררות באמצע הבוקר והערב, בקשו מה-SC להורות למטופל לשטוף את פיו במים 10 דקות לפני איסוף הרוק. לאחר איסוף הרוק, השליכו את הדגימות המזוהמת בעליל בדם. הורה ל-SC שדגימות הרוק יישארו במקפיא עד לאחזור על ידי צוות המחקר.
התקשר לצוות המחקר כדי לאשר שהם יקבעו שעה ויום לאחזור הדגימות הקפואות ולהביא ציוד חדש לאיסוף רוק לכל תאריך איסוף עתידי. לאחר הוצאת הדגימות מהמקפיא של הנבדק, שמור אותן קפואות במהלך ההובלה למעבדה על ידי הנחתן בשקית מקפיא מבודדת. עם ההגעה למעבדה, החלף את התווית הלבנה על כל שפופרת בברקוד עוקב.
בדוק שהברקוד הרציף תואם למזהה הנושא, תאריך האיסוף ושעת האיסוף. לאחר מכן החזירו את דגימות הרוק למקפיא מינוס 20 מעלות צלזיוס כדי לזרז את המוצין. לאחר הפשרת דגימות הרוק, צנטריפוגה את הדגימות בכוח הכבידה פי 1500 למשך 15 דקות.
לאחר שהריאגנטים של ערכת בדיקת הרוק נמצאים בטמפרטורת החדר למשך כ-90 דקות, הכן את מאגר הכביסה בהתאם להוראות הערכה פיפטה 25 מיקרוליטר של בקרות התקנים ודגימות לבארות המתאימות של צלחת 96 בארות. בעקבות פיפטה זו, 200 מיקרוליטר של תמיסת אנזים שהוכנה בעבר מצמידים לבארות. מערבבים את הדגימות על ידי הנחת הצלחת על מסובב למשך חמש דקות ב-500 סל"ד.
לאחר דגירה של הדגימות בטמפרטורת החדר למשך 55 דקות, יש לשטוף ולמחוק את הצלחת עם מאגר כביסה ארבע פעמים. לאחר מכן הוסף 200 מיקרוליטר של תמיסת טטראתיל בנזן או TMB. לאחר ערבוב הדגימות במשך חמש דקות.
ב -500 סל"ד מכסים את הצלחת בנייר אלומיניום ודוגרים אותם בחושך למשך 25 דקות נוספות. בסיום, הוסיפו 50 מיקרוליטר של תמיסת עצירה וערבבו את הדגימות במשך שלוש דקות ב-500 סל"ד. תוך 10 דקות מהוספת תמיסת העצירה, נגב את תחתית הצלחת וקרא את הצלחת עם קורא צלחות ב-450 ננומטר.
לאחר מכן, חשב את ריכוז הקורטיזול באמצעות הצפיפות האופטית הממוצעת. הפחיתו את הצפיפות האופטית הממוצעת בבארות קשירה לא ספציפיות מהצפיפות האופטית הממוצעת בבארות בקרה ודגימה סטנדרטיות אפס. לבסוף, העריכו את ריכוזי הבקרות והלא ידועים באמצעות תוכנה המסוגלת ללוגיסטיקה.
ההליכים המתוארים נועדו למדוד את הפרופיל היומי של ריכוזי קורטיזול ברוק, אלפא עמילאז ורוק. מכיוון שתוצאות הקורטיזול הוכחו כמוטות לטובה, מומלץ להשתמש בטרנספורמציה של יומן לנתונים כדי להניב התפלגות נורמלית. קיימות מספר אסטרטגיות למידול הבדלים במקצבים היומיים של קורטיזול ואלפא עמילאז.
האסטרטגיה הראשונה היא לשרטט את השינוי היומי של אלפא עמילאז או קורטיזול בין ההתעוררות ל-30 דקות לאחר ההתעוררות. האסטרטגיה השנייה היא לשרטט את ריכוז הקורטיזול או אלפא עמילאז הכולל במהלך יום. ניתן לקבץ את פרמטרי הסיכום המתקבלים לשתי קטגוריות כלליות, מדד גודל התגובה או מדדי דפוס התגובה לאורך זמן.
מודלים של עקומת גדילה עשויים להיות שימושיים למחקרים שבהם נאספות דגימות מרובות באנשים לאורך היום. ניתן להתאים עקומת צמיחה כדי לאפשר הבדלים אינדיבידואליים במחזור היומי על ידי הוספת מנבאים ברמת הפרט או ברמת המדידה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לאסוף רוק וכיצד ללמד את המטפלים כיצד לאסוף רוק מבחינה רפואית עבור המבוגרים שלנו במסגרת הביתית, ואתה צריך להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע ניתוח מעבדה של אנליטים ברוק שהם אפשריים, בעלי תאימות גבוהה ומניבים דגימות איכותיות.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה כללית
מאמר זה מציג נוהל לאיסוף וניתוח של ביומרקרים ברוק בקרב מבוגרים בעלי ליקוי קוגניטיבי. הוא מתאר את השלבים לאיסוף דגימות רוק בסביבה ביתית ואת מדידת פעילות הלחץ באמצעות קורטיזול ואלפא עמילאז ברוק.
מרכיבי מחקר מרכזיים
תחום המדע
- מדעי המוח
- ביומרקרים
- מדידת לחץ
רקע
- ביומרקרים ברוק חשובים לחקר תגובות לחץ.
- ליקוי קוגניטיבי בקרב מבוגרים מציב אתגרים ייחודיים לאיסוף דגימות.
- הבנת תהליכים הקשורים ללחץ יכולה להודיע על התערבויות בריאות.
- נהלי איסוף מבוססי בית יכולים לשפר את ההשתתפות.
מטרת המחקר
- להדגים שיטות יעילות לאיסוף רוק למטפלים.
- למדוד פרופילים יומיים של קורטיזול ואלפא עמילאז ברוק.
- לקדם את ההבנה של רגישות ביולוגית בקרב מבוגרים.
שיטות ששימשו
- הרכבת חומרים לאיסוף רוק.
- ביצוע ביקורי בית להדרכת המטפלים.
- מתן הוראות בכתב לאיסוף דגימות.
- החזרת דגימות למעבדה לצורך נהלי מבחן.
תוצאות עיקריות
- איסוף מוצלח של דגימות רוק על ידי המטפלים.
- מדידת ריכוזי קורטיזול ואלפא עמילאז ברוק.
- פרופילים מייצגים של פעילות לחץ באוכלוסיית המחקר.
- פרוטוקולים שנקבעו למחקר עתידי על תהליכים הקשורים ללחץ.
מסקנות
- איסוף רוק מבוסס בית הוא מעשי ויעיל.
- ביומרקרים ברוק יכולים לספק תובנות לגבי תגובות לחץ.
- פרוטוקולים מחקריים יכולים לשפר את ההבנה של בריאות בקרב מבוגרים.
שאלות נפוצות
Executive Industry Relevance
Measuring salivary cortisol and alpha-amylase provides a minimally invasive, cost-effective approach to assess stress physiology in frail older adults, supporting target validation in neurobehavioral and aging research. The protocol enables caregiver-mediated sample collection in home settings, improving feasibility and compliance for longitudinal biomarker studies. This method supports mechanistic de-risking by linking peripheral stress markers to central nervous system activity in preclinical and translational models of age-related frailty.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of HPA-axis and sympathetic nervous system activity as peripheral biomarkers of central stress response systems.
- Operational Value: Supports functional target validation by correlating salivary analyte levels with behavioral or physiological phenotypes in frail populations.
- Predictive Value: Provides quantitative, diurnal profile data to assess target engagement and biological plausibility of stress-modulating interventions.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Delivers standardized saliva collection and processing procedures that ensure sample integrity and minimize pre-analytical variability.
- Quantitative Output: Generates measurable concentrations of cortisol and alpha-amylase via immunoassay, enabling dose-response and time-course analyses.
- Scalability: Uses widely available collection materials and lab-based ELISA protocols suitable for medium-throughput screening in academic and industrial settings.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Directly applicable to studying stress dysregulation in models of frailty, cognitive decline, and age-related comorbidities.
- Translational Continuity: Enables cross-species comparison of diurnal biomarker rhythms when aligned with preclinical stress models.
- Risk-Adjusted Decision-Making: Supports go/no-go criteria by providing objective, peripheral readouts of central nervous system-targeted interventions.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the discovery continuum from hypothesis generation through lead optimization, particularly for compounds targeting stress pathways, neuroinflammation, or behavioral phenotypes in aging.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing of neuroendocrine targets by measuring downstream effector biomarkers in vivo.
- Screening: Produces reproducible, quantitative readouts suitable for assay validation and compound screening cascades.
- Analytics: Delivers time-resolved concentration data enabling AUC, peak amplitude, and slope calculations for pharmacokinetic/pharmacodynamic modeling.
- Translational Research: Connects peripheral biomarker dynamics to central disease mechanisms in age-related stress pathologies.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized, caregiver-adaptable workflow for multi-site biomarker collection in aging and neurodegeneration programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by reducing mechanistic ambiguity between central stress pathways and peripheral biomarker output.
- Operational Value: Enhances reproducibility through standardized collection timing, caregiver training, and lab processing protocols.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early de-risking of CNS-targeted candidates using non-invasive, translatable biomarkers.
- Portfolio Impact: Informs risk-adjusted prioritization by providing objective data on target modulation in clinically relevant, frail populations.
Implementation Considerations
- Requires training in biospecimen handling, cold chain maintenance, and analyte-specific assay techniques.
- Depends on access to centrifuge, freezer storage (-20°C), plate reader, and validated immunoassay kits for cortisol and alpha-amylase.
- Necessitates cross-team standardization between field coordinators, caregivers, and laboratory personnel to ensure protocol adherence.
- Must account for confounding factors such as medication use, oral hygiene, and circadian timing when interpreting results.
- Limited to correlative biomarker measurement; does not establish causal mechanism without complementary interventions or genetic models.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:05
Title
1:10
Preparation of Saliva Collection Supplies
2:24
Saliva Collection Instruction
3:44
Provide Additional Instructions and Answer Questions
4:32
Saliva Handling and Processing and Salivary Cortisol Assay Protocol
6:44
Results: Collection of Salivary Biomeasures in the Community Setting
7:53
Conclusion
