Name: Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: למדו טכניקת תגובת תרופות אקס ויו להערכת יעילות טיפולית בגידולי סרטן תוך שימור המיקרו-סביבה הטבעית של הגידול. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של תגובות לתרופות, מנגנוני עמידות ותופעות לוואי מחוץ למטרה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות לצוות שירות רכש הרקמות של MSKCC (TPS), במיוחד למריה קורזון מריאנו, פריסילה מקניל, אנס אידלבי, דניאל נברטה וקתרינה אלן, על כל מאמציהם במרדף המוצלח של פרויקט זה ובמימון מהמקורות הבאים: 5 R21 CA158609-02 וקרן Conquer Cancer והקרן לחקר סרטן השד. בנוסף, המחברים מבקשים להודות לאריק קוטינגטון, סגן נשיא המשרד למחקר וניהול פרויקטים, המשרד לפיתוח טכנולוגיה, הסברה וציות למחקר ותמיכה במערכות מידע RTM, על תמיכתו בהגשת כתב יד זה.

הערה: רכש רקמות חולה הוסמך באמצעות מועצה לביקורת מוסדית (IRB) -approved Biospecimen ופרוטוקולים קליניים (מספרי פרוטוקול 09-121 ו11-041, בהתאמה) בשעה Memorial Sloan Kettering Cancer Center. רכש .1 רקמות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכש של גידול / גרורות ראשוניות מטופל הערה: נכון להיום, בפרוטוקול זה בוצע על סוגים הוסרו בניתוח בלבלב, קיבה וסרטן השד, כמו גם, גרורות לימפומה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את צוות כירורגי כדי לספק את הדגימה על ידי מערכת צינור פנאומטי שליח או למחלקה לפתולוגיה בשקית דגימת פלסטיק דליפת הוכחה בחוזקה אטומה וסטרילי בתוך מיכל הוכחה לשפוך סטרילי. כוון את צוות כירורגי להעביר את הדגימה במדינה הטרי ללא פורמלין או מקבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את עוזר פתולוג או פתולוג לקצור את הדגימה הטרי באמצעות טכניקה סטרילית, שincשימוש לרכב של כפפות ומכשירים סטריליים תחת הזרימה למינרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את זמן הקציר של דגימת הרכש, אשר נשמרה בקפדנות תחת 30 דקות מסיום ההליך הכירורגי. אם ניקח בחשבון את ההשפעות של איסכמיה הקרה, לא לוקח דגימות מדגימות שעברו כריתה עם זמן איסכמי קר של&gt; 30 דקות 18. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את אנשי פתולוגיה המחלקה כדי להסיר דגימת גידול ראשונית של כ 0.5 סנטימטר 3-1.0 סנטימטר 3 בזרימה למינרית לשמור על סביבת סטרילית. במידת האפשר, לבחור רקמת גידול מהפריפריה של נגע המדד, כדי למנוע נמק מרכזי (מוות של תאים) פרנק פוטנציאלי. הערה: רקמת נימקי עשויה להיות מוכרת באופן בוטה על ידי כל אחד מהקריטריונים הבאים: אובדן צבע או החיוורון של הרקמות; איבוד כוח שברקמות נמקית היא רכות ופריכה; תיחום ברור בין הרקמות נמקית ובת קיימא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כוון את pathologist או עוזר פתולוג כדי לספק רקמות היקפיים שהיא ב( קלפים שנזרקו כירורגית) עודפים לאחר דגימה מיידית של הגידול להערכת אבחון. הנח את הדגימה בצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל סטרילי המכיל כ 5 מ&quot;ל של תקשורת המינימלית חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה (1% פניצילין וסטרפטומיצין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם זמין (לדוגמא, בלוטות לימפה בבית השחי של זנב של דגימת כריתת שד), להשיג דגימת בלוטות לימפה קשורה בעליל חיובית באותו הגודל (0.5 סנטימטר 3-1.0 סנטימטר 3) ולהשוות לתגובת תרופה של גידול ראשוני. כמו דגימת הגידול הראשונית, למקם את הדגימה הקשורים הבלוטה לימפה בצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל סטרילי המכילה כ 5 מ&quot;ל של מינימום תקשורת חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה (1% פניצילין וסטרפטומיצין). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם גודל של היתרים כירורגית דגימה (לדוגמא, דגימת כריתת שד), להסיר (רחוקה מגידול ראשוני) דגימה של רקמה נורמלית (כלומר,parenchyma נורמלי צפוף / סיבי שד) ומקום בצינור צנטריפוגות חרוטי 15 מ&quot;ל סטרילי המכיל כ 5 מ&quot;ל של תקשורת המינימלית חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה 1% למטרות העברה בלבד. בעקבות העברה למתקני המעבדה, להעביר את הדגימה &#39;הנורמלית&#39; להקפאת cryovial, &quot;הצמד&quot; וחנות במקפיא -80 מעלות צלזיוס לניתוחים מולקולריים עתיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כל הדגימות על קרח רטוב, ומייד להעביר למרחב המעבדה לחתך רקמה הטרי ex vivo. אל סעיף הדגימה הנורמלית אלא לאחסן במקפיא -80 מעלות צלזיוס לניתוחים מולקולריים עתיד. להעביר חלק מהגידול הראשוני וגרורות קשורות להקפאת cryovial, &quot;הצמד&quot; וחנות במקפיא -80 מעלות צלזיוס לניתוחים מולקולריים עתיד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רכש של רקמה ממחקרים קליניים (למשל, ביופסיות מחט ליבה אופציונלית (CNB)) הערה: אנו משיגים רקמות גידול מחוליםנרשם על פרוטוקולים קליניים שנותנים את הסכמתם לעבור CNB של גרורות סרטנית נגישות לפני התחלת טיפול. CNBs, עד היום, בוצעו על חולים עם שד, לימפומה האזור שולית, לימפומה תא מעטפת, paraganglioma גרורתי, צוואר רחם (תאי קשקש) וסרטן השחלות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כ 5 מ&quot;ל של תקשורת המינימלית חיונית (MEM) המכילה אנטיביוטיקה (1% פניצילין וסטרפטומיצין) יש אנשים קליניים מהתערבותית רדיולוגיה או מחלקה רלוונטית לבצע ביופסיה מחט ליבת טיפול מראש ומניחים את הדגימה ב15 מ&quot;ל צינור צנטריפוגות חרוטי סטרילית המכילים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את דגימת הביופסיה על קרח רטוב, ומייד להעביר למרחב המעבדה לחתך רקמה הטרי ex vivo. </li></ol></li></ol> 2 הכנת חומרים להגדרות חתך וVibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת חומרים לחתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע פתרון agarose 4% על ידי הוספת 4 גרם של האגאעלה לשל PBS 100 מ&quot;ל. החיטוי (הגדרות מחזור: נוזל, 121 מעלות צלזיוס, 30 דקות, 15 ק&quot;ג לסנטימטר רבוע) הפתרון לפני השימוש ראשון. לשימושים שלאחר מכן, הנח את agarose 4% במיקרוגל לנזל (חום גבוה במשך 30 מרווחי שניות) לפני כל שימוש ולקרר כראוי ל~ 25 ° C (כלומר, חם למגע) מודעת כי agarose מתמצק ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש agarose 4% כאמצעי תקשורת רקמות הטבעה שאינה קבוע. כאשר agarose 4% יתקרר, והוא עדיין במצב נוזלי, עם מלקחיים סטריליות למקם את דגימת הרקמה בעובש הטבעה ויוצקים בagarose 4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את דגימת הרקמה הקרובה (~ מרחק 2 מ&quot;מ), אך לא באופן ישיר על הקיר של עובש הטבעת משטח חיתוך. Agarose 4% יתחיל לגבש במהירות, ולכן כראוי למקם את דגימת הרקמה במהירות. במהלך חתך, לשמור agarose 4% באמבט המים C ° 55 לשמור בפתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצלחת 24 גם לניתוח סעיף, להוסיף 1 מ&quot;ל of מדיה מלאה (כלומר, אנטיביוטיקה סרום + 1% MEM + 10% שור עוברי) זה טוב. שמור את צלחת 24 גם ב RT (~ 25 ° C) בכל משך הזמן של חתך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת הגדרות Vibratome <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות microtome הרוטט, להגדיר את המהירות שבה להב גישות הדגימה [0 (0.00 מ&quot;מ / השנייה) ל10 (2.5 מ&quot;מ / שנייה)] ואת התדירות של (Hz 0) להב [0 עד 10 (100 הרץ) ]. התאם את ההגדרות בהתאם למרקם של הרקמה (כלומר, צפיפות / מוצקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגידול שד ראשוני של קרצינומה ductal פולשנית, להתאים את הגדרות ל6 ו -3, מהירות ותדירות בהתאמה. לרקמת גידול פחות צפופה / חברה, להקטין את המהירות ולהגדיל את התדירות בהתאם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את עובי הסעיף בגבולות המכשיר (1-999 מיקרומטר). לניתוחים אלו, להגדיר את עובי הסעיף ב200 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר הדגימה מוטבע agarose באמצעות שכבה דקה של דבק נוזלי על tha דיסק הדגימהt הוא טבל במאגר של תקשורת, כי הוא עטוף בקרח רטוב. </li></ol></li></ol> .3 רקמות חתך, טיפול וניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את החלקים שנחתך בדייקנות מייד עם חתך באמצעות מלקחיים ומקום סטרילי בצלחת רב גם עם 1 מ&quot;ל של מדיה מלאה. כאשר חלקים מספיקים נרכשים לתגובה וניתוחים גומלים, למקם את הצלחת רב גם לתגובה לטיפול בתרבית רקמת חממה נקבעה בתנאי culturing הרקמה סטנדרטיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את סעיפי שליטה מרובים שbookend הסעיפים שטופלו במאמץ כדי לאשר תגובה תלוית מינון בניגוד לממצאים בתרבית. לבצע רקמת חתך במהירות (~ 30 - 40 דקות), גם בתוך כל השפעות מזיקות של זמן איסכמי הקר (~ 2 - 4 שעות) 18. בצע טיפול בחלקים רק לאחר תקופת הסתגלות לשעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופת הסתגלות 1 שעות, להוסיף הגדלת מינון (רלוונטי טיפולי; <em.&gt; למשל, 0 - 10 מיקרומטר ריכוזים) של תרופה לסעיפים והבית בתנאי תרבית רקמה סטנדרטית לתקופת הטיפול. לצורך המחקר, השתמש 24 ו / או 48 תקופות הערכת שעות. עם זאת, סעיפי רקמות שליטה (רכב בלבד) יישארו קיימא, כפי שנבדקו במחקר זה, לתקופות עד וכוללים תקופות הערכה 96 שעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות טיפול, להסיר את כל הסעיפים בתנאים סטריליים ופורמלין לתקן על ידי הצבת קטע הרקמה בצינור המכיל גם 10% פורמלין ומקום שנאגרו ב RT O / N או בצינור המכיל 4% paraformaldehyde (לדלל paraformaldehyde 16% מבקבוקון עם PBS לריכוז סופי של 4%) ומקום בRT עבור שעה 2. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתקן סעיפי רקמות גדולים יותר (למשל., ~ 6 מ&quot;מ x 4 מ&quot;מ) 200 מיקרומטר עבה ב10% O נאגר פורמלין / N ב RT. לתקן חלקים קטנים יותר (לדוגמא., 1 מ&quot;מ x 1 מ&quot;מ) 200 מיקרומטר עבה בparaformaldehyde 4% עבור שעה 2 ב RT. הערה: לחדירה יעילה של מקבע את עוצמת הקול של fixative יש 20x הנפח של רקמה. בהתחשב בכך שתוצאות פרוטוקול זה בגדלים קטנים מאוד רקמות (לדוגמא, 6 מ&quot;מ 3 רקמה = 6 μl נפח), להבטחת שימוש קיבעון הנכון 1 מ&quot;ל של מקבע לכל גדלי הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות קיבעון יש לי דגימות רקמת פרפין מוטבעות על ידי אנשי המחלקה לפתולוגיה. סעיף דגימה בלוקים פרפין על גבי שקופיות טעונות להיות hematoxylin וeosin מוכתם והעריך immunohistochemically (למשל, אפופטוזיס). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Abercrombie, M., Ambrose, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interference+Microscope+Studies+of+Cell+Contacts+in+Tissue+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture.</a> Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).</li>
<li>Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+for+Determining+Malignancy+in+Tissue-Culture+Cell+Lines+in+the+Albino+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22New+York+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Criteria for Determining Malignancy in Tissue-Culture Cell Lines in the Albino Rat.</a> New York Academy of Science. 5, 351-355 (1957).</li>
<li>Paul, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cancer+Cell+in+Vitro%3A+A+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Cancer Cell in Vitro: A Review.</a> Cancer Research. 22, 431-440 (1962).</li>
<li>Dean, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+response+to+CDK4%2F6+inhibition+in+breast+cancer+defined+by+ex+vivo+analysis+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Therapeutic response to CDK4/6 inhibition in breast cancer defined by ex vivo analysis of human tumors.</a> Cell Cycle. 11 (14), 2756-2761 (2012).</li>
<li>Bray, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bcl-2+Modulation+to+Activate+Apoptosis+in+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Bcl-2 Modulation to Activate Apoptosis in Prostate Cancer.</a> Molecular Cancer Research. 7 (9), 1487-1496 (2009).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li>
<li>Nakasone, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Tumor-Stroma+Interactions+during+Chemotherapy+Reveals+Contributions+of+the+Microenvironment+to+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Imaging Tumor-Stroma Interactions during Chemotherapy Reveals Contributions of the Microenvironment to Resistance.</a> Cancer Cell. 21, 488-503 (1016).</li>
<li>Shi, Y., Hogue, J., Dixit, D., Koh, J., Olson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+genetic+studies+of+isolated+cells+from+parathyroid+tumors+reveal+the+complex+pathogenesis+of+parathyroid+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Functional and genetic studies of isolated cells from parathyroid tumors reveal the complex pathogenesis of parathyroid neoplasia.</a> PNAS. 111 (8), 3092-3097 (2014).</li>
<li>Vidal, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cancer+stem+cells+from+human+prostate+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of cancer stem cells from human prostate cancer samples.</a> J. Vis. Exp. (85), e51332(2014).</li>
<li>Wanping, X., Neckers, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+Molecular+Chaperone+Heat+Shock+Protein+90+Provides+a+Multifaceted+Effect+on+Diverse+Cell+Signaling+of+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting the Molecular Chaperone Heat Shock Protein 90 Provides a Multifaceted Effect on Diverse Cell Signaling of Cancer Cells.</a> Clinical Cancer Research. 13, 1625-1629 (2007).</li>
<li>Moulick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity-based+proteomics+reveal+cancer-specific+networks+coordinated+by+Hsp90%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Affinity-based proteomics reveal cancer-specific networks coordinated by Hsp90.</a> Nature Chemical Biology. 7 (11), 818-826 (1038).</li>
<li>Alpaugh, M. L., Tomlinson, J. S., Ye, Y., Barsky, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+sialyl-Lewis%28x%2Fa%29+underexpression+and+E-cadherin+overexpression+in+the+lymphovascular+embolus+of+inflammatory+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Relationship of sialyl-Lewis(x/a) underexpression and E-cadherin overexpression in the lymphovascular embolus of inflammatory breast cancer.</a> American Journal of Pathology. 161 (2), 619-628 (2002).</li>
<li>Chu, K., Boley, K. M., Moraes, R., Barsky, S. H., Robertson, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+E-cadherin%3A+role+in+response+to+hypoxia+in+the+tumor+microenvironment+and+regulation+of+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The paradox of E-cadherin: role in response to hypoxia in the tumor microenvironment and regulation of energy metabolism.</a> Oncotarget. 4 (3), 446-462 (2013).</li>
<li>Vaira, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+model+of+organotypic+culture+for+pharmacodynamic+profiling+of+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Preclinical model of organotypic culture for pharmacodynamic profiling of human tumors.</a> PNAS. 107 (18), 8352-8356 (2010).</li>
<li>Centenera, M. M., Raj, G. V., Knudsen, K. E., Tilley, W. D., Butler, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+culture+of+human+prostate+tissue+and+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Urology%22%5BJournal%5D)">Ex vivo culture of human prostate tissue and drug development.</a> Nature Reviews Urology. 10, 483-487 (2013).</li>
<li>Jhaveri, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+protein+90+inhibitors+in+the+treatment+of+cancer%3A+current+status+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 5, 611-628 (2014).</li>
<li>Gerecitano, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+124-PU-H71PET+imaging+to+predict+intratumoral+concentration+in+patients+on+a+phase+I+trial+of+PU-H71%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Using 124-PU-H71PET imaging to predict intratumoral concentration in patients on a phase I trial of PU-H71.</a> Journal of Clinical Oncology. 31, Suppl . 11076-11 (2013).</li>
<li>Yildiz-Aktas, I., Dabbs, D. J., Bhargava, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cold+ischemic+time+on+the+immunohistochemical+evaluation+of+estrogen+receptor%2C+progesterone+receptor%2C+and+HER2+expression+in+invasive+breast+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effect of cold ischemic time on the immunohistochemical evaluation of estrogen receptor, progesterone receptor, and HER2 expression in invasive breast carcinoma.</a> Modern Pathology. 25, 1098-1105 (2012).</li>
</ol>

לא נחשפו ניגודי אינטרסים.

ביולוגים הסרטן מתמודדים עם אתגרים משמעותיים כאשר מנסים לפתח אסטרטגיות טיפוליות יעילות. בדיקת תרופות בפיתוח בשורות תאי הסרטן שהוקמו לא יכולה לשקף באופן מדויק בתגובה vivo ובניסויי vivo על המודלים PDX הן עבודה אינטנסיבית ויקר מאוד. לאור אמור לעיל, היישום של טכניקות vivo לשעבר של מטופל עיקרי גידולים 14, 15 כעת ממוקם ליד הניתוח המולקולרי של שורות תאי הסרטן הוקמו וxenografts המופק מחולה (PDX). <p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rt...

פיתוח תרופות לסרטן יעילים הוכיח להיות מאוד מאתגר. קווי סרטן תאים וexplants גידול - כמו גם xenografts היו בשימוש במחקר סרטן ליותר ממחצית המאה 1,2,3. עד כה, הניתוח המולקולרי של רגישות לסמים והתנגדות בשתי שורות תאי הסרטן הוקמו וxenografts המופק מחולה (PDX) הוא הכרחי. עם זאת, הבדיקה של תרכובות בשורות תאי הסרטן שהוקמו לא לעתים קרובות חזויה של יעילות in vivo, ומקביל במחקרי vivo בבעלי חיים, במיוחד בדגמי PDX, זה מאוד יקר וגוזל זמן. המגבלות של מערכות מודל אלה, כלומר חוסר היכולת להודיע ​​על ההשפעה של microenvironment הילידים בהתקדמות גידול ותגובה לאסטרטגיות טיפוליות, הובילו את תחום המחקר לפיתוח שיטות נוספות כדי לשבח ניתוחים אלו. של אחרונים, תשומת לב מוגברת משלמת לכיוון ניתוח vivo לשעבר של קיבת חולהאו explants 4, 5 בשל ההבנה הגדולה יותר שתגובה לטיפול בסרטן אינה בלעדית להרכב המולקולרי הגלום של תאי סרטן, אלא מושפעת במידה רבה על ידי מייקרו-סביבת התאים הסרטניים 6, 7 תכונה שלא יכול להיות סכם על ידי שיטות culturing מסורתיות ו / או PDX. ניתוח Ex vivo בהקשר הנ&quot;ל (כלומר., השפעה של microenvironment תאים הסרטני המקיף הסמוך) מרמזת הערכת סעיפים גידול / גרורות עיקריות קיימא, ולא ניתוח vivo לשעבר של בידודים סלולריים 8, 9. אנו מדווחים כאן על טכניקת vivo לשעבר (כלומר., קטעים שנחתך בדייקנות טריות רקמה) של שני גידולים הראשוניים המטופל וגרורות קשורות (כלומר, בלוטות לימפה) שנאמנות מודיעה על תגובה (IC50), השפעות מחוץ היעד ומאפשר מולקולריים ניתוח של מנגנוני התנגדות ומשוב. בנוסף, ניתוח מתאם של therapeרגישות / התנגדות utic לעומת פרופיל ביטוי סמן ביולוגי והגנטי יכולה להתבצע במאמץ לזהות חולי סיכוי גבוה יותר להגיב לתרופה הניסיונית של עניין (כלומר., תגובת סמים גבוהה תואמת מטופל עם פרופיל ביולוגי מסוים). יישום של טכניקת vivo לשעבר והערכה באופנה רב פרמטר הוא תנועה לכיוון בחירת מטופלים ושיפור כללי של תוצאות קליניות. Ex vivo ניתוח תגובה לטיפול יכול להיות כלי סטנדרטי בפיתוח הקליני ופרה קליני של תרופות לסרטן והוא חזה כצעד לקראת גישת רפואה מותאמת אישית באסטרטגיות פיתוח טיפוליות.

<table><tbody><tr><td>Vibratome Leica VT1000s</td><td>Leica</td><td>14047235613</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure</td><td>agarose Invitrogen</td><td>16500500</td><td>הכן 4% ו-6% לפני השימוש</td></tr><tr><td>להב מזרק</td><td>טד פלה</td><td>121-4</td><td></td></tr><tr><td>MEM עם פניצילין&nbsp; + מתקני</td><td>ליבה של סטרפטומיצין מדיה (MSKCC)</td><td></td><td>המדיה מוכנה במרכז הסרטן ממוריאל סלואן קטרינג&nbsp;</td></tr><tr><td>אזמל מס' 10</td><td>Thermo Scientific</td><td>31-200-32</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים חד פעמיים</td><td>Cole-Parmer</td><td>84011182</td><td></td></tr><tr><td>עובש הטבעה</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>70181</td><td></td></tr><tr><td>FBS (מושבת בחום)</td> <td>צלחות תאומים</td><td>100106</td><td></td></tr><tr><td>24 בארות</td><td>קורנינג</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>פורמלין (10%)</td><td>Sigma Diagnostics</td><td>SDHT501128&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פורמלדהיד 16%</td><td>Thermo Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>הטמעת מיקרוסטים</td><td>Simport</td><td>M503-2</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (70%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A405P-4</td><td></td></tr><tr><td>Waterbath</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-2SQ</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוגל</td><td>דגם ג'נרל אלקטריקJES2051DNBB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דבק (אתיל ציאנואקרילט)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>E1505-5G</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 10 מ"מ</td><td>BD פלקון</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>שפופרות 15 מ"ל</td><td>BD פלקון</td><td>352096</td><td></td></tr></tbody></table>

ex vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

הניתוח המולקולרי של קווי תאים סרטניים מבוססים היה עמוד התווך של חקר הסרטן בעשורים האחרונים. תרבית תאים מספקת ניתוח ישיר ומהיר של רגישות ועמידות טיפולית. עם זאת, עדויות עדכניות מצביעות על כך שהתגובה הטיפולית אינה בלעדית להרכב המולקולרי המובנה של תאים סרטניים אלא מושפעת מאוד מהמיקרו-סביבה של תאי הגידול, תכונה שלא ניתן לסכם בשיטות תרבות מסורתיות. אפילו יישום של xenografts של גידול, למרות שהוא מספק שפע של מידע על אספקת תרופות/יעילות, אינו יכול ללכוד את הדיבור ההדדי של תא הגידול/מיקרו-סביבה (כלומר, גורמים מסיסים) המתרחש בתוך גידולים אנושיים ומשפיע מאוד על תגובת הגידול. לשם כך, פיתחנו טכניקת ex vivo (חתך רקמות טריות) המאפשרת הערכה ישירה של התגובה לטיפול בפיתוח טיפולים פרה-קליניים וקליניים. טכניקה זו שומרת על שלמות הרקמה והארכיטקטורה התאית בהקשר של תא הגידול/מיקרו-סביבה לאורך כל התגובה לטיפול ומספקת אמצעי מדויק יותר להערכת יעילות התרופה.

במחקר זה, טכניקת vivo לשעבר הייתה בשימוש בניתוח מתאם של רגישות / התנגדות טיפולית של מעכב חלבון הלם חום 90 (Hsp90i). בהערכה פרה קלינית של Hsp90i זה, גידול הראשוני בסרטן השד, ER + קרצינומה ductal פולשנית (IDC), וגרורות בלוטה לימפה קשורות נותחו vivo לשעבר לתגובה לטיפול   (איור 1). טופלו 200 מיקרומטר קטעי סדרתי מרובה עם רכב בלבד, והגדלת מינון (0.25, 0.50, 1.0 ו2.5 מיקרומטר) של Hsp90i. הנתונים בתרשים 1 מציגים-קבוע פור...

קווים הוקמו סרטן התאים וxenografts היו עמוד התווך של מחקר הסרטן בעשורים האחרונים. עם זאת, הראיות האחרונות עולה כי תגובה לטיפול מושפעת במידה רבה על ידי מייקרו-סביבת התאים הסרטניים. לכן, פיתחנו ניתוח vivo לשעבר של דגימות גידול ראשוניות למטרות פיתוח תרופות.

Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

המטרה של טכניקת התגובה לתרופות ex vivo הבאה היא ליישם בפיתוח הפרה-קליני והקליני של תרופות במאמץ ליידע על תגובה או השפעות IC 50 מחוץ למטרה ולאפשר ניתוח מולקולרי של מנגנוני עמידות ומשוב. זה מושג על ידי רכישה מהירה של דגימת גידול בת קיימא המועברת מיד למעבדה לחתך. לאחר מכן, הרקמה מוטמעת באגרוס, נחתכת ומטופלת בתרופה מעניינת במינונים רלוונטיים מבחינה טיפולית לפרקי זמן שונים.לבסוף, החלקים מוסרים מהבארות ומשאירים אחריהם כל צמיחת גידול שאינה מגיבה והרקמה מקובעת בנוסחה ומוטמעת פרפין לפני הכנת שקופית H ו-E אחת של כל קטע מטופל. התוצאות מראות טיפול תרופתי, תגובה של הגידול ו/או גרורות על סמך שינויים מורפולוגיים של הגרעינים המעידים על אפופטוזיס. קביעת IC 50 של תגובה לתרופות, זהות השפעות מחוץ למטרה וניתוח מולקולרי של מנגנוני עמידות ומשוב של צמיחת גידול שאינה מגיבה.היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו הערכת התגובה לתרופות בשורות תאי סרטן מבוססות או מבודדים תאיים מגידולים ראשוניים של חולים הוא ששיטה זו מאפשרת הערכת תגובה לתרופות בהקשר של המיקרו-סביבה השכנה. זה יכול. זה יכול גם לעזור לענות על שאלות מפתח בפיתוח תרופות כגון סלקטיביות גידול והשפעות מחוץ למטרה.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על פיתוח תרופות בסביבה הקלינית כאשר היא מיושמת, למשל, על ביופסיות קורנל שהתקבלו ממטופלים שנרשמו למחקרים קליניים. טכניקה זו מאפשרת ניתוח של גודל דגימה קטן מאוד המספיק כדי לדרוש כמויות נרחבות של נתונים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית כדי לטפל בחלק מהקשיים שאדם עשוי להיתקל בהם במיוחד ביחס להטמעה וחתך, מה שיכול להיות מאתגר ללמידה מכיוון שלא כל סוגי הגידולים דומים וביצוע ההתאמות המתאימות הוא המפתח להצלחת טכניקה זו.כדי להתחיל לכוון את הצוות הכירורגי למסור את הדגימה במצבה הטרי ללא פורמולה או קיבוע על ידי שליח או מערכת צינורות פנאומטיים למחלקה הפתולוגית בשקית דגימת פלסטיק אטומה היטב וסטרילית חסינת דליפות. בתוך מיכל סטרילי חסין שפיכה רשום את זמן הקציר של הדגימה שנרכשה, אותו יש לשמור בקפדנות מתחת ל-30 דקות מהשלמת ההליך הכירורגי. להנחות את אנשי המחלקה הפתולוגית להשתמש בטכניקה סטרילית מתחת למכסה זרימה למינרי כדי להסיר דגימת גידול ראשונית של כ-0.5 עד סנטימטר מעוקב אחד, רצוי מהפריפריה של נגע האינדקס.הנח את הדגימה בצינור צנטריפוגה חרוטי סטרילי של 15 מיליליטר המכיל כחמישה מיליליטר של מדיום חיוני מינימלי או mem המכיל 1% אנטיביוטיקה אם זמינה, רכוש דגימת בלוטות לימפה קשורה חיובית גסה באותו גודל כדי להשוות לתגובה התרופתית של הגידול הראשוני. אם גודל הדגימה הניתוחית מאפשר, הסר דגימה של רקמה רגילה לאחר שימוש במם ואנטיביוטיקה כדי להעביר אותה למעבדה. העבירו את הדגימה לבקבוקון קריו, הקפיאו אותה ואחסנו בטמפרטורה שלילית של 80 מעלות צלזיוס.לניתוח עתידי, השג ביופסיית מחט ליבה אופציונלית או CNB ממחקר קליני וגם העבר אותה למעבדה על פי פרוטוקול הטקסט מיקרוגל. תמיסת אגרו 4% שהוכנה בעבר ומצננת לכ-25 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, בעזרת מלקחיים סטריליים, הניחו את דגימת הרקמה בתבנית הטבעה והוסיפו את הארוס הנוזלי.לאחר מכן מקם את דגימת הרקמה כשני מילימטרים ממשטח החיתוך של התבנית לצלחת של 24 בארות. מוסיפים מיליליטר אחד של מדיום שלם לכל באר ושומרים בטמפרטורת החדר במהלך החיתוך. עבור גידול שד ראשוני של קרצינומה דוקטלית פולשנית, השתמש במיקרוטום רוטט.הגדר את המהירות שבה הלהב מתקרב לדגימה לשש ואת תדירות הלהב לשלוש או ניתוח זה. הגדר את עובי הקטע ל-200 מיקרומטר. לאחר מכן השתמש בשכבה דקה של דבק נוזלי על דיסק דגימה כדי להרכיב את הדגימה, שבסופו של דבר שקועה במאגר מדיה העטוף בקרח רטוב כהכנה לחיתוך רקמות.תוך כדי חיתוך מהיר כדי למנוע השפעות מזיקות מזמן איסכמי קר, השתמש במלקחיים סטריליים כדי להסיר מיד את חלקי הפרוסה המדויקים ולהניח בצלחת מרובת בארות עם מיליליטר אחד של מדיום שלם. קח מספר קטעי בקרה המזמינים את הסעיפים המטופלים כדי לעזור לאשר תגובות תלויות מינון. לאחר דגירה של שעה כדי להתאקלם בדגימות, הוסיפו מינונים הולכים וגדלים של התרופה לחלקים ודגרו עוד יותר לתקופת הטיפול של עד 48 שעות או יותר בהתאם לצרכים.הניסוי לאחר טיפול בתנאים סטריליים, מסירים את כל החלקים ומעבירים לכמיליליטר אחד של קיבוע ומשאירים בטמפרטורת החדר למשך הלילה לאחר הקיבוע, הדגימות מוטמעות בפרפין, נחתכות על שקופיות מטען וצבועות המטין ואואין להערכה. מוצג כאן. הגידול הראשוני של סרטן השד וקרצינומה דוקטלית פולשנית חיובית ל-ER נותחו ex vivo לתגובה לטיפול במעכב חלבון הלם חום 90.הטיפול ב-2.5 מיקרו-מולרית ברקמה מביא לאינדוקציה של 40% של אפופטוזיס כפי שנראה על ידי גרעיני PNO, בעוד שאונה שפירה סמוכה עם עין חומצית קשורה וצינור של אותו קטע מטופל של 2.5 מיקרו-מולרית נותרת ללא שינוי. נתון זה של גרורות קשורות בבלוטות הלימפה נותח גם ex vivo לתגובה לטיפול במעכב חלבון הלם חום 90 מדגים תגובה מלאה בקני IDC הקשורים באופן רופף לגרורות נלוות בבלוטות הלימפה, בניגוד ל-sphe שנוצר בחוזקה, שלא הראה תגובה לטיפול ונותר בר-קיימא. ניתוח נוסף של הסטרואידים הקיימים על ידי אימונופלואורסצנציה חשף התמשכות או דיכוי של מולקולת ההידבקות של תאי STO.E cadherin כפי שניתן לראות כאן, טכניקת ex vivo שימשה גם ב-CNBS לפני הטיפול של מחקרים קליניים לניתוח מתאם, ניתן להעריך ביופסיות מחט ליבה מגיבות ex vivo ולהשוות מאוחר יותר ל-CMBS 24 שעות לאחר הטיפול לשימור תרופות כפי שנמדד באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית, ניתוח ספקטרומטריית מסה טנדם ותגובות המטופל בפועל בניתוח תמונת חיות מחמד תוך כדי ניסיון ההליך. חשוב לזכור לעבוד בצורה מהירה ויעילה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליישם את טכניקת התגובה לתרופות XB בפיתוח הפרה-קליני והקליני של טיפולים כצעד לקראת גישת רפואה מותאמת אישית ואסטרטגיות טיפוליות.

ex-vivo-treatment-response-primary-tumors-andor-associated-metastases

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

בלוציפראז, שונה אדם xenografts גידול במוח ניתן לקבוע intracranially בעכברים athymic, עם ניטור הבאים של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור. בשילוב עם ניתוח הישרדות, ניטור פליטת אור הוא כלי מחקר הכרחי לצורך בדיקות טרום קליניים של טיפולים נשקלת לטיפול בגידולים במוח.

הקמת גידול תוך גולגולתי xenografts המוח עם ניתוח בדיעבד של הגידול ואת התגובה לטיפול באמצעות הדמיה פליטת אור

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

אנו מתארים שיטה לתגובת הדמיה לטיפול נגד...

חי הדמיה של תגובות סמים בmicroenvironment הגידול במודלים עכבריים של סרטן השד

כאן, ניטור בזמן אמת של חילוף החומרים של תאי הגידול, בשילוב עם מודל ממברנה כוריו-אלנטואית של עובר עוף (CAM) של גרורות, משמשים להערכת מטרות/סוכנים אנטי-סרטניים חדשים על יכולתם לעורר רגישות לתאי גידול לכימותרפיה הפוגעת ב-DNA.

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

אנו מתארים שיטה פשוטה יחסית עבור הדמיה vivo לשעבר החי של אינטראקציות תא-stroma הגידול בתוך גרורות ריאה, ניצול כתבים ניאון בעכברים. באמצעות מיקרוסקופ confocal ספינינג-דיסק, טכניקה זו מאפשרת הדמיה של תאים חיים לפחות 4 שעות ויכול להיות מותאם ללמוד תנאים ריאות דלקתיות אחרות.

Ex vivo הדמיה חיה של ריאות גרורה microenvironment שלהם

שיטת לוקליזציה vivo immunofluorescence ניתן להשתמש כדי לבחון ב vivo biodistribution של נוגדנים ושערי מעלה נוגדן למטרות אונולוגיות באורגניזמים חיים באמצעות שילוב של vivo הגידול מיקוד ולשעבר vivo חיסוני שיטות.

ב Vivo אימונוofor, לוקליזציה להערכת הטיפול הרפואי והאבחון ביופצת התרופות בחקר הסרטן

הגישה המתוארת משלבת הזנב הנסיוני גרורות מוסר עם הדמיה vivo live בעלי חיים כדי לאפשר ניטור בזמן אמת של גרורות סרטן השד היווצרות וצמיחה בנוסף לקוונפיקציה של מספר גרורות וגודל בריאות.

שימוש משולב של הזנב וריד גרורה Assays ובזמן אמת ב Vivo הדמיה כדי לכמת מושבת סרטן השד ונטל בריאות

מאמר זה מתאר שיטות לדור, טיפול תרופתי וניתוח של explants נגזרים על ידי המטופל להערכת תגובות לתרופות גידול במערכת מודל חי, רלוונטי למטופל, פרה-קלינית.

גידול שמקורו במטופל explants כפלטפורמה פרה-אקלינית "חיה" לחיזוי עמידות לתרופות בחולים

כתב היד מתאר מתודולוגיה להקמה וכן ניטור גדילה אורכי של גרורות ריאה ספונטניות מגידולי שד בהזרקה אורתוטופית, הניתנת להתערבות בכל שלבי המפל הגרורתי.

ב Vivo הדמיה למדידת גרורות ריאה ספונטניות של תאי גידול שד בהזרקה אורתוטופית

פרוטוקול זה מתאר את ההליך לביצוע הדמיית PET in vivo בעכברים באמצעות תבניות בעלי חיים תואמות גוף (BCAMs) בסורק G8 PET/CT. פרטים טכניים על הכנת עכברים, כולל השתלת גידול נכונה, מיקום אופטימלי, רכישת תמונות PET/CT בסיוע BCAM וניתוח נתונים, מסופקים.

טומוגרפיה פרה-קלינית של פליטת פוזיטרונים עם תבניות בעלי חיים תואמות גוף לניתוח תמונה אוטומטי מבוסס ענן בעכברים

מחקר זה מתמקד באינדוקציה תת עורית in vivo של תאי סרטן המעי הגס הזוהרים במודל עכברי ובמדידת הזוהר שלאחר מכן באמצעות מערכת הדמיה. ההליך נועד לבסס מודל גידול הניתן לשחזור לניטור והערכה טיפולית בזמן אמת.

הזרקה תת עורית של תאי סרטן המעי הגס האנושיים בעכברים עירומים אתימיים להערכת יעילות אנטי-גידולית

למדו טכניקת תגובת תרופות אקס ויו להערכת יעילות טיפולית בגידולי סרטן תוך שימור המיקרו-סביבה הטבעית של הגידול. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של תגובות לתרופות, מנגנוני עמידות ותופעות לוואי מחוץ למטרה.

Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics

גלה סרטונים נוספים