מדידות Autoradiographic של [ 14 C] -Iodoantipyrine ב במוח חולדה בעקבות מרכזי פוסט-שבץ כאב

המטרה הכוללת של הליך ניסיוני זה היא להעריך את המעורבות של מצעים עצביים של כאב מרכזי לאחר שבץ מוחי הנגרם על ידי נגע תלמי באמצעות שיטת מעקב אחר איזוטופים רדיו. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח באיזה אזור במוח מעורב בכאב מרכזי לאחר שבץ. היתרון העיקרי של טקטיקה זו הוא שהיא זולה יותר ויעילה יותר לביצוע בהשוואה לטכניקות מיפוי מוח אחרות.

בהליך זה, בצע את מבחני פון פריי ופלנטר כדי לקבוע קווי בסיס על ידי הנחת החולדה במתחם אקרילי למשך 30 דקות. השג חוטי פון פריי בעלי אורך זהה אך בקטרים משתנים כדי לספק טווח כוחות של שניים עד 100 גרם. לאחר מכן, השתמש בחוטים כדי לעורר את מרכז כף הרגל האחורית של החיה דרך יציאה דמוית רשת על הצלחת האקרילית.

כאשר החולדות מפגינות תגובת נסיגת כפות לגירוי, רשום את מספר הנימה. לאחר מכן השתמש בחוטים עולים וקבע את הערך הנמוך ביותר עבור תגובת המשיכה. חזור על הבדיקה בסך הכל שלוש פעמים ברציפות על אותה חולדה עד לרישום הלחץ המרבי המופעל.

באמצעות רשימת התייחסות, המר את מספר החוטים לכוח המתאים, ולאחר מכן ממוצע את הערכים. השתמש בקרן אינפרא אדום כדי לעורר את מרכז כף הרגל האחורית של החולדה דרך צלחת זכוכית. לחץ פעמיים על החלק התחתון האדום של מכשיר ה-Plantar כדי למדוד את חביון תגובת הנסיגה.

הגדר את מרווח הזמן בין הניסוי לחמש דקות לפחות כדי למנוע גירוי עוקב. רשום את משך האור האינפרא אדום כאשר החולדה מציגה תגובת נסיגת כפות. משך הזמן הארוך ביותר לא יעלה על 20 שניות בכל ניסוי כדי למנוע נזק לרקמות.

חזור על השאר עם שלושה ניסיונות עבור כפות האחוריות השמאלית והימנית וחשב את ממוצע תגובות הנסיגה עבור כל כף אחורית. בשלב זה, העבירו את החולדה המורדמת למכשיר סטריאוטקסי עם כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת גופה. מרחו משחה על העיניים כדי למנוע יובש בזמן ההרדמה.

לאחר מכן, יש לגלח את ראש החיה בעזרת קוצץ חשמלי מעוקר. בצע חתך עם אזמל לאורך קו האמצע של הקרקפת. לאחר מכן, נקו את העור והגולגולת עם אלכוהול ויוד פובידון לסירוגין.

לאחר מכן משתמשים בכפפות ומכשירים סטריליים. קדחו חור קטן בקוטר של שלושה מילימטרים בגולגולת מעל גרעין הבסיס הגחוני של התלמוס. הורד את המחט והזריק מיקרו 0.5 מיקרוליטר של תמיסת מלח רגילה או 0.125 יחידות של תמיסת קולגנאז מסוג ארבע.

לאחר השלמתו, שמור את מחט ההזרקה במקומה כך שציון הדרך של הגולגולת עם קו כהה סומן לזיהוי. מחט ההזרקה מאפשרת דיפוזיה של תרופה למשך חמש דקות נוספות. לאחר מכן, השתמש במלט דנטלי כדי למלא את החור במיומנות ולתפור את החתך.

בהליך זה, הניחו את החולדה בכלוב מנוחה למשך חמש עד 10 דקות להסתגלות. בעזרת מפצל, חבר לשני מזרקים של מיליליטר אחד. מלאו מזרק אחד במי מלח רגילים, ואת השני בתמיסת IAP.

חבר צינור PE-50 למפצל. לאחר מכן, הזריק את הרדיואקסר לווריד הצוואר החיצוני של החיה. לאחר מכן, מלאו את המזרק בשלושה אשלגן כלורי מולארי.

10 שניות לאחר הזרקת הרדיו-טרסר, יש להזריק אשלגן כלורי תחת מנת יתר של איזופלורן לפני הקרבת החיה. לאחר דקה אחת, הוציאו את המוח והשתמשו בתרכובת OCT כדי להקפיא אותו בקרח יבש ומתילבוטן. לאחר מכן, אחסן את רקמת המוח במקפיא.

כדי להכין קטעי מוח, כוונו את המוח במיקרוטום כשהמוח האחורי פונה כלפי מטה. בעזרת קריוסטט, פורסים את המוח למקטעים בעובי 20 מיקרומטר. לאחר מכן, הניחו את פרוסות המוח על שקופיות מיקרוסקופ בטמפרטורה שלילית של 20 מעלות צלזיוס.

לאחר מכן, הנח את שקופיות המיקרוסקופ וחמישה ניירות סינון סטנדרטיים עם רדיואקטיביות מדורגת בקלטות החשיפה. על פי רצף זה של פרוסות מוח, סדרו את שקופיות המיקרוסקופ מלמעלה למטה. לאחר מכן, הניחו את מקומות המסנן בתחתית הקלטות.

לאחר מכן, הסר את מסך הזרחן מקלטות החשיפה. השתמש במצלמת מצב משתנה כדי לקרוא את מסך הזרחן וליצור תמונות כדי להציג את קליטת ה-IAP עבור פרוסות המוח. מוצגים כאן אזורי העניין באטלס אנטומי.

ניתוח ה-ROI הראה כי הפעלת קליפת המוח האינפרה-לימבית, קליפת המוח הקדם-לימבית ואזור פיתול החגורה הראשון הייתה גבוהה משמעותית בקבוצת CPS-P בהמיספרה הימנית למעט גרעין הגחון-בסיס. הבדלים במתאמים בין-אזוריים של rCBF נצפו בין קבוצות CPSP ו-sham בהמיספרה הימנית. ומצעים עצביים הקשורים לכאב נקבעו על ידי ניתוח ההבדלים במתאמים הבין-אזוריים של rCBF.

הקווים האדומים מצביעים על מתאמים חיוביים משמעותיים, והקווים הכחולים מצביעים על מתאמים שליליים משמעותיים. ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעתיים אם היא מבוצעת כראוי. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום מיפוי המוח לחשוף מוח מרכזי לאחר שבץ מוחי בשבץ מוחי.

בעקבות הליך זה, ניתן לבצע מסות אחרות כמו FMRI על מנת לענות על שאלות נוספות כמו פעילות עצבית בזמן אמת ורשת עצבית. אחרי הצפייה בסרטון הזה, אתם אמורים להבין היטב כיצד לבחון אילו אזורים במוח מעורבים בכאב המרכזי שלאחר השבץ.