Canalostomy כמו הגישה כירורגי של משלוח סמים מקומי לתוך האוזן הפנימית של עכברים בוגרים ו Neonatal

כאן נתאר canalostomy הליך המאפשר משלוח סמים מקומי לתוך האוזן הפנימית של עכברים בוגרים ו neonatal דרך תעלת semicircular במינימום נזקים לפונקציה שמיעה ואת שיווי המשקל. בשיטה זו ניתן לחסן וקטורים ויראלי, פרמצבטיקה, מולקולות קטנות לתוך האוזן הפנימית העכבר.

המטרה הכוללת של מחקר זה היא לתאר את הטכניקות הכירורגיות הכרוכות בקנלוסטומיה בעכברים בוגרים ויילודים כאחד. שיטה זו החלה לראשונה בסוף שנות ה -80. תפוצה רחבה של ריאגנטים מוזרקים באיברי הקצה של השבלול ושיווי המשקל של עכברים בוגרים ויילודים כאחד.

היתרון העיקרי של הטכניקה הוא בכך שהיא גורמת נזק מינימלי לשמיעה ולתפקוד שיווי המשקל. וניתן לבצע ניתוחים מרובים בקלות, במידת הצורך. מי שמדגים את ההליך יהיה ד"ר ג'ינג-יינג גואו, תושב במחלקתנו.

התחל בחיבור צינורות פולימיד לצינורות פוליאתילן על מנת ליצור את צינורית ההזרקה. השתמש בדבק סופר כדי לאטום את החיבור בשלושה יישומים לפחות. ולעקר את צינורית ההזרקה עם תחמוצת אתילן.

לאחר מכן, השתמש במחט בגודל 30 כדי לחבר את קצה צינור הפוליאתילן למזרק סמ"ק אחד המכיל מי מלח רגילים. מלאו את הצינורית במי מלח רגילים על ידי הזרקה עם מזרק One-CC כדי לבדוק אם יש דליפה או סתימה בחיבור בין צינור הפולימיד לצינור הפוליאתילן. פנה מיקרו-מזרק של 10 מיקרוליטר עם מי מלח רגילים וחבר אותו למחט בגודל 30 עם צינורית ההזרקה.

לאחר מכן, התקן את המיקרו-מזרק על משאבת מיקרו-הזרקה. הגדר את מהירות ההזרקה ל-0.5 מיקרוליטר לדקה ואת הנפח למיקרוליטר אחד לצבע ירוק מהיר ואת הגלאי הנגיפי AAV8-GFP או שני מיקרוליטר לסטרפטומיצין. לבסוף, משוך את המיקרו-מזרק לאחור למיקרוליטר אחד וחלץ את מגיב ההזרקה כדי ליצור מרווח אוויר בין מי המלח הרגילים למגיב המוזרק.

התחל בהנחת העכבר המורדם על כרית חשמלית שחוממה מראש. הגדר את הטמפרטורה של הכרית החשמלית לכ-37 מעלות צלזיוס. כסו את עיני החיה במשחת עיניים.

לאחר מכן, יש לגלח את האזור הפוסט-אאוריקולרי השמאלי בעזרת קוצץ חשמלי של בעלי חיים ולחטא את העור שלוש פעמים עם אתנול 75%. לאחר מכן, הנח את החיה במצב רוחבי ימני כדי להקל על ניתוח באוזן שמאל. בצע חתך פוסט-אאוריקולרי של סנטימטר עד 1.5 סנטימטר שלושה מילימטרים מהחריץ הרטרו-אאוריקולרי השמאלי.

שימו לב, כאשר שורש האפרכסת מוגדר כמקור, והמישור המקביל לקלווריום בשעה שלוש עד תשע, התעלה החצי עגולה האחורית והתעלה החצי עגולה הצדדית ממוקמות בדרך כלל כשלושה מילימטרים משורש האפרכסת, בין שתיים לשלוש. נתח בצורה בוטה את השריר המכסה את העצם הטמפורלית בעזרת מיקרו מלקחיים כדי לחשוף את התעלה החצי עגולה האחורית והתעלה החצי עגולה לרוחב, ששוליה נראים בבירור כפסים כהים בעצם הטמפורלית. לאחר מכן, אספו חתיכת שריר קטנה בעזרת מיקרו מלקחיים ותנו לה להתייבש.

לאחר מכן, צור חור קטן בחלק האמצעי של התעלה החצי עגולה האחורית באמצעות מחט בגודל 26, כך שדליפת נוזלים דרך החור מעידה על חדירה מוצלחת של הדופן הגרמית של התעלה החצי עגולה האחורית. הגדל את החור למעט גדול יותר מקוטר צינור הפולימיד. לאחר מכן, נקו את התפליט המקיף את החור של התעלה החצי עגולה האחורית באמצעות כדור כותנה.

הכנס את קצה צינור הפולימיד בעדינות לתעלה החצי עגולה האחורית, לכיוון קומונת ה-crus, לעומק של מילימטר עד שניים. התחל את ההזרקה על ידי לחיצה על כפתור ההפעלה במשאבה. לאחר ההזרקה, המתן שתי דקות כדי לאפשר למגיב להתפשט.

לאחר מכן, הסר את צינורית ההזרקה והנח מיד את השריר לתוך החור בתעלה החצי עגולה האחורית. החזר את השרירים המופרדים והרקמות התת עוריות יחד. לתפור את החתך באמצעות תפר 5-0.

יש לחטא את אזור החתך ביוד פובידון. לבסוף, לאחר השלמת הניתוח, מקם את בעל החיים במצב רוחבי ימני על כרית חשמלית שחוממה מראש ל-37 מעלות צלזיוס להחלמה. השלבים הבאים שונים ביילוד בהשוואה לעכברים הבוגרים.

על היילוד המורדם, השוכב על משטח מלא קרח, התחל בביצוע חתך פוסט-אאוריקולרי של שלושה מילימטרים משני מילימטרים אחוריים לקפל האפרכסת. לאחר מכן, צור בעדינות פתח בתעלה החצי עגולה האחורית הרכה באמצעות מחט בגודל 26. הכנס את הצינורית לתעלה החצי עגולה האחורית מבלי להגדיל את הפתח.

לאחר ההזרקה, השתמש בחתיכת השריר כדי לכסות, במקום לסתום, את הפתח, מכיוון שהאחרון יכול להוביל לשבר בתעלה החצי עגולה האחורית הרכה. סגור את העור באמצעות תפר 6-0. להלן תמונות סטריאוסקופיות של האוזניים הפנימיות של עכברים בוגרים ויילודים, שכן צבע ירוק מהיר ניתן באמצעות קנלוסטומיה.

דגימות נאספו מיד לאחר הניתוח. יתר על כן, תמונות קונפוקליות אלה מציגות תושבות שלמות של השבלול והרחם של עכברים בוגרים, שהוכנו 30 יום לאחר הזרקת AAV8-GFP באמצעות קנוסטומיה. בשבלול, GFP מתבטא ברוב תאי השיער הפנימיים.

ובמישור המוקד של הצלחת הקוטיקולרית של הרחם, תאי שיער רבים מבטאים GFP. לבסוף, תמונות קונפוקליות אלה של רחם שעבר טראומה התקבלו 30 יום לאחר הזרקת AAV8-GFP באמצעות תעלה. תאים חיוביים ל-GFP, מיוזין 7A חיוביים הם תאי שיער מתמרים, ואילו תאים חיוביים ל-GFP, מיוזין 7A שליליים הם תאים תומכים.

בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לוודא שקצה הצינורית מוכנס היטב לתעלה החצי עגולה ושהצינורית אינה כפופה או חסומה. לאחר הזרקה בעכברים בוגרים, מומלץ להשתמש בחתיכה קטנה של שריר יבש כדי לאטום את החור בתעלה החצי עגולה. בדוק אם יש נוזל שדולף מהחור כדי לוודא שהוא אטום לחלוטין.

המחקר שלנו מראה כי קנלוסטומיה היא גישה יעילה ובטוחה להעברת תרופות לאוזן הפנימית של עכברים. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 25 דקות אם היא מבוצעת כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד למקם את התעלות החצי עגולות ולהעביר וקטורים ויראליים, siRNA, תאי גזע או תרופות לאוזן הפנימית של עכברים בוגרים ויילודים באמצעות קנלוסטומיה.