מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום ההשתלות ושימור האיברים. היישומים של שיטה זו כוללים בדיקת פרפוזטים ותוספי פרפוזאט חדשים, בדיקת תוכנה המיועדת להערכת איברים וביצוע ניסויים המיועדים לתיקון איברים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שמודל זלוף הכבד הנורמותרמי ex vivo המוצג כאן הוא פשוט, ניתן לשכפול בקלות, בעלות נמוכה ויש לו מגוון רחב של יישומים.

התחל בהכנת שרוול הפורטל בגודל 16. חותכים קטע צינור של חמישה מילימטרים, וקובעים את נקודת האמצע של הקטע על ידי מדידת 2.5 מילימטרים. חתך בנקודת האמצע והסר את החצי הקדמי של הצינור.

השתמש בהמוסטט כדי לרסק את החלק השטוח הזה. השתמש במצית כדי להמיס את הקצה השני של האנגיוקטטר ליצירת שפתיים. לאחר מכן, הכן את צינורית צינור המרה על ידי חיתוך יציאת ההזרקה מאנגיוקטטר בגודל 27, והשאיר רק את הקטטר.

חבר את זה לקטע של 10 סנטימטר של צינורות צינורית בגודל 27. מקם חולדה מורדמת עם אפה בקונוס האף המרדם וארבע גפיה משותקות. עקוב אחר סימנים חיוניים על ידי הצמדת הצג לגפה האחורית השמאלית.

בצע צביטה בבוהן כדי לאשר את עומק ההרדמה המתאים. רססו את בטן החיה באלכוהול איזופרופיל 70% והניחו לה להתייבש. הניחו וילון סטרילי מעל החיה.

לאחר מכן, לאחר ביצוע חתך בקו האמצע מה- xiphoid לערווה באמצעות מספריים חדים, היכנס בעדינות לצפק וחתך את השריר. הרחב את החתך לרוחב שמאלה וימינה ליצירת צלב בגובה הגבול התחתון של הכבד. בשלב זה, הפעל את הרדמת האיזופלורן ל-2% החזר את תהליך ה-xiphoid באמצעות מהדק יתושים מעוקל והצלעות באמצעות מחזירי צלעות.

לאחר מכן השתמש במספריים חדים כדי לחתוך את הרצועות הפלציפורמיות, הפרניות והגסטרוהפטיות. אתר וקשר את הווריד הפרני עם תפר 7-0 קרוב ככל האפשר למקורו כדי למנוע דליפה. לאחר מכן, השתמש באפליקטור סטרילי לח עם קצה כותנה כדי להוציא את החולדה.

עטפו את המעי בגזה לחה במי מלח רגילים של 0.9%, והקפידו לא למתוח את כלי הדם. לאחר מכן נתח את הווריד הנבוב התחתון כדי להסיר רקמות עודפות. נתח מאחורי ה- IVC בדיוק עדיף על ההסתעפות והעביר לולאה של תפר משי 4-O לשימוש מאוחר יותר.

לאחר מכן, החזר את הכליה הימנית כדי לספק חשיפה לווריד יותרת הכליה הימני והחזיר את האונה הימנית של הכבד בצורה מעולה עם גזה. קשרו את וריד יותרת הכליה הימני עם תפר משי 7-0 קרוב ככל האפשר ל-IVC וצרבו לרוחבו רחוק לעניבה. ואז לנתח בזהירות את וריד הטחול.

קושרים אם באמצעות שני תפרי משי 7-0 וחותכים אותו בין שני התפרים. לאחר ניתוח סביב עורק התריסריון, קשרו את עורק התריסריון עם תפר משי 7-0 וקשירה. לאחר מכן חתכו סביב עורק הכבד והניחו סביבו עניבת תפר משי 7-0

לאחר מכן, נתח את צינור המרה. לאחר מכן בדוק את אורך צינור המרה, קשר אותו בקצה הדיסטלי והניח לולאת תפר סביב צינור המרה וקרוב ככל האפשר. השתמש במספריים קטנים כדי לחתוך חור בקוטר מחצית הצינור, והנח קטטר בגודל 27 לתוך צינור המרה בסמיכות.

קושרים את הקטטר למקומו באמצעות תפר קשירת סנדל רומי. לאחר מכן, השתמש במחט בגודל 27 כדי להזריק 0.5 מיליליטר הפרין לווריד הפין, או IVC. לאחר מכן מהדקים וקושרים את ה- IVC באמצעות תפר המשי 4-0 שהוצב קודם לכן וקושרים את עורק הכבד באמצעות תפר המשי 7-0 שהוצב קודם לכן.

כעת, השתמש בקליפ מיקרוכירורגי כדי להדק את וריד הפורטל. קנול את וריד הפורטל באמצעות אנגיוקטטר 22 מד ושטוף עם 60 מיליליטר של תמיסת מלח קרה 0.9% רגילה המכילה 100 יחידות הפרין עד שהכבד מסמין. לאחר שטיפת הכבד, חשפו את ה-IVC העל-הפטי וחתכו אותו גבוה ככל האפשר בחזה.

בצע את כריתת הכבד על ידי חיתוך סביב הסרעפת ולאחר מכן חיתוך עורק הכבד, ה- IVC, וריד הפורטל וכל רצועה נוספת. הרם את הכבד והניח מי מלח קרים כקרח של 0.9% רגיל. לבסוף, הנח את שרוול כלי הדם בגודל 16 בווריד הפורטלי וחבר את הכבד למעגל הזלוף הנורמותרמי של הכבד ex vivo.

לפני תחילת כל זילוף, יש לבצע בדיקה ויזואלית של המעגל כדי לזהות ולפגוע או להצטבר על רכיבי המעגל או הצינורות. אם יש הצטברות של חיידקים או חומרים אחרים במעגל, יש להחליף או לנקות חלקים. התחל בהזרמת הפרפוזה בשני מיליליטר לדקה.

צפה במוניטור לאיתור קפיצות בלחץ וריד הפורטל, מכיוון שהדבר עשוי להצביע על כך שהכלי נסתם ומחייב מיקום מחדש של הצינורית. הכנס את צינורית הווריד הפרוטלי לווריד הפורטל האזוק לזרימה חוזרת של הפרפוזה והתפר באמצעות תפר משי 7-0. לאחר ששתי הקנולות נמצאות במקומן, התחל להגביר את זרימת הפרפוזה במיליליטר אחד לדקה עד להגעה ללחץ הפיזיולוגי בטווח של 10 עד 16 סנטימטרים של מים.

הסר דגימות מיליליטר אחת מהיציאה הקודמת ואחרי היציאה במהלך הזילוף. חלקו כל דגימה של מיליליטר לשתי דגימות של 0.5 מיליליטר. הצמד הקפיא אחד מ-0.5 מיליליטר בצינורות קריוגניים בחנקן נוזלי והפעל ניתוח גזי דם עורקי באמצעות 0.5 מיליליטר הפרפוזה הנותרים.

לאחר מכן, מדוד את ה-pH וחצץ את הפרפוזה לפי הצורך כדי לחזור ל-pH 7.4. לאחר ארבע שעות של זלוף, נתק את הכבד ממעגל הזלוף. מחלקים את הכבד למקטעים של 0.5 גרם, מעבירים לצינורות קריוגניים ומקפיאים בחנקן נוזלי.

ALT נמדד באפס, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ו-240 דקות של זלוף. יש פחות ALT באופן משמעותי בקבוצת הפרפוזה הבסיסית בתוספת PEG-CAT בהשוואה לפרפוסאט הבסיס, המוצג בשחור ב-150, 180, 210 ו-240 דקות. ATP רקמתי נשמר בקבוצת הפרפוזה הבסיסית בתוספת PEG-CAT בהשוואה לקבוצת הפרפוזה הבסיסית בלבד.

ייצור MDA ברקמות היה גבוה משמעותית בקבוצת הפרפוזה הבסיסית מאשר בקבוצת הפרפוזה הבסיסית בתוספת PEG-CAT. סך ה-GSH נשמר בפרפוזה הבסיסית בתוספת PEG-CAT בהשוואה לקבוצת הפרפוזה הבסיסית בלבד. כל יישום מוצע של זלוף כבד נורמותרמי ex vivo יצטרך להיבדק באופן שיטתי במודלים של בעלי חיים לפני ניסויים באיברים אנושיים שהושלכו ולאחר מכן בכבד אנושי.

הדגם המוצג כאן הוא אידיאלי מכיוון שהוא ניתן לשכפול בקלות, מבטל בדיקות זרות ובעלות נמוכה. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע מודל זלוף כבד ex vivo זול, הניתן לשכפול בקלות, באמצעות חולדות.