השתלת intraportal של לנגרהנס במודל עכבר

אני תומאס לין, החוקר הראשי של קבוצת המחקר לסוכרת באוניברסיטת יוסטוס ליביג, גיסן, גרמניה. השתלת אי הלבלב היא טיפול בסוכרת מסוג 1. השתלת איים ניסיונית מבוצעת לקפסולת הכליה, בעוד שתוכניות קליניות מעדיפות את המסלול התוך-פורטלי.

לכן, אנו מאמינים כי יש צורך במחקר נוסף על השתלת איים תוך-פורטליים במודלים פרה-קליניים. לדוגמא, אתרי איים החשופים לדם, מכיוון שאתר ההשתלה הוא תוך-וסקולרי. יתר על כן, טכניקת המיקרו-כירורגיה זקוקה לניסיון מסוים.

לדוגמה, לאחר הזרקת וריד הפורטל, יכול להתרחש דימום, או שייתכנו בעיות בהרדמה או בשמירה על משקל הגוף של העכבר המקבל. לכן, אנו חושבים שהסבר חזותי של ההליך הוא קריטי. סרטון זה מתמקד במסלול התוך-פורטלי של השתלת איים.

כדי להשיג גליקמיה תקינה בעכברים סוכרתיים, ניתן להשתמש בו להשתלה סינגנית ואלוגנית בעכברים שחורים, אך גם במודלים סינגניים בעכברים עירומים. הסר את האיים המבודדים מהחממה והניח אותם מתחת לספסל זרימה. מרכז את האיים בתנועה סיבובית של צלחת הפטרי.

ממלאים מדיום של 100 מיקרוליטר במזרק של מ"ל אחד בעזרת מחט כחולה. לאחר מכן הוסף 350 איים ב-300 מיקרוליטר של הפתרון של האנק. שמור את המזרק במצב אנכי כדי לאפשר לאיים להתיישב.

הקטינו את עוצמת הקול ל-50 מיקרוליטר. החלף את המחט הכחולה במחט החומה. לאותו מזרק הוסף 150 מיקרוליטר של מדיום שיפוע צפיפות למעלה, כדי להגיע לנפח הסופי של 200 מיקרוליטר במזרק.

הימנע מבועות האוויר. שמור את המזרק במצב אנכי. סובב אותו מעט כדי למנוע גוש של איים.

האיים ישקעו בחרוט המזרק תוך שתיים-שלוש דקות. לאחר שלושה ימים של הזרקת סטרפטוזוטוצין, בדוק את רמת הגלוקוז בדם על ידי ניקוב וריד הזנב בעזרת מד סוכר כף יד. להרדים את העכברים עם דלזילוזין וקטמין על ידי הזרקה תוך צפקית.

הניחו את העכברים במצב שכיבה על צלחת תרמית חמה. בדוק את הרדמת העומק על ידי צביטה של הבוהן. נקה את העור עם זיהום ללא עור.

כדי למנוע התייבשות של העיניים, יש לשמור עליהן לחות עם משחת עיניים. התחל באלקטרוטומיה על ידי החזקת העור עם מלקחיים וביצוע חתך אמצעי באורך שניים עד שלושה סנטימטרים עם מספריים. הניחו גזה רטובה סטרילית סביב שולי הפצע כדי לשמור על לחותו.

שמור על המעי משמאל ומחוץ לחלל הבטן. הזיזו את התריסריון ואתרו את הלבלב. השתמש באצבע ובאגודל כדי לחשוף את וריד הפורטל.

הזרקו את האיים ב-200 מיקרוליטר לאט לתוך וריד השער. הפעל את הלחץ עם האצבע המורה במקום הניקוב למשך שש דקות כדי לעצור את הדימום. הנח בזהירות את שכבת המעי, הצפק ושרירי הבטן בחזרה למצב.

בעזרת מלקחיים יש להרים את העור, לסגור את חתך השרירים ואת שכבת העור העליונה עם תפר משי נספג. מרחו מרפא פצעים. שמור על טמפרטורת הגוף על 37 מעלות צלזיוס על צלחת תרמית חמה.

התבונן בעכבר עד שהוא חוזר להכרה מספקת. ספק טרמדול יחד עם נוזלים לטיפול בכאב. לאחר השתלת איים, נצפתה ירידה פתאומית ברמת הגלוקוז בדם ביום הראשון, מ-23 מילי-מולרי לליטר ל-4.6 מילי-מולרי לליטר בעכברים סוכרתיים המושרים על ידי סטרפטו.

גליקמיה תקינה נשמרה עד 121 ימים. משקל הגוף ורמת הגלוקוז בדם עקבו בערך אחר אותו דפוס. לאחר הזרקת הסטרפטוזוטוצין והניתוח, משקל הגוף ירד; מהיום השני ואילך הוא נוטה לעלות לכיוון הנורמלי, מ-25.3 גרם ל-29.7 גרם.

בעכברים עם תאימות היסטולוגית עיקרית לאחר השתלת איים, רמת הגלוקוז בדם ירדה ל-4.4 מילימול לליטר, והגליקמיה התקינה נצפתה עד 10 ימים. לאחר מכן, הוא מתחיל לדחות. גם משקל הגוף של עכברים סוכרתיים עוקב אחר דפוס דומה.

בהשתלה מוצלחת של איי לבלב מושתלים בכבד. במחקר זה נחקר המסלול התוך-פורטלי של השתלת איים. פרוטוקול זה יעיל ביותר בהקלה על מתח סוכרתי, ומספק הזדמנות מעמיקה לחקור השתלת איים.

פרוטוקול זה מאשר שכ-350 איים מסוגלים להפוך את המצב ההיפרגליקמי. יתר על כן, אף אחד מהעכברים לא מת במהלך ההליך, והשליטה הגליקמית נשמרה.