עיצוב של הIntranasal וניקוב, מודל כפול של דיכוי חיסוני מושרה באלח דם
15 ביוני 2019
פרוטוקול זה מתאר טכניקות למדידת תוצאות זיהומיות בבסיס החולים שנרכשו משני זיהומים במצב המדכא, הראשון על ידי הקמת לאחר הקשר/עכברים לאחר מכן מאתגרת אותם עם זיהום intranasal כדי ל ליצור מודל רלוונטי קלינית של אלח דם חיסוני.
הכינו את העכבר לניתוח. לגלח את הרבעים התחתונים של הבטן באמצעות סכין גילוח ולחטא את האזור עם יוד. מניחים את העכבר על משטח עבודה נקי על גבו כשהראש מצביע הרחק מהמפעיל.
הפוך חתך בעור אורך כחצי סנטימטר ארוך בבטן התחתונה השמאלית. היזהר לא לחדור את חלל הקדום. השתמש במספריים קטנים כדי להאריך את החתך על אחד עד שני סנטימטרים.
בצע חתך תוך שרירי כדי לקבל גישה לחלל ההצטלבות. ברוב המקרים, cecum הוא בצד שמאל של הבטן. לבודד את cecum.
באמצעות מדפים קהים, אנטומיים, בעדינות ובזהירות לחשוף את cecum דרך החתך. השלב הרביעי הוא הרצועה. מיקום הרצועה על cecum קובע את רמת החומרה של אלח דם.
חיבור כ 75% של cecum גורם אלח דם חמור. חיבור 50% מהסג'ם גורם לא אלח דם ברמה בינונית. בעוד קשירה 25% או פחות של cecum יגרום אלח דם קטין.
ליגה cecum בעמדה המיועדת. הקפד לא לצרף את שסתום ileocecal. השלב החמישי הוא לנקב את ההפסקה.
באמצעות מחט, לנקב את cecum עם יחיד דרך ודרך לנקב באמצע הדרך בין הקשירה ואת קצה cecum. ודא שאתה לא לנקב את כל כלי הדם. כדי להבטיח כי היה לנקב מלא, להחדיר טיפה קטנה של צואה משני חורי מחט.
בזהירות להחליף את cecum לתוך חלל הבטן. סגור את שרירי הבטן על ידי החלת תפרים ריצה פשוטה ולסגור את העור. לנקות את העור עם יוד.
להזריק לעכבר עם תמיסת מלח מחוממת מראש כדי להחיות. מניחים את העכבר בחזרה לתוך הכלוב עם גישה בלתי מוגבלת למזון ומים. לאחר כשלושה ימים מן הקשירה cecal ונקב או הליך CLP, אנו כפופים את העכבר ללהיט שני עם זיהום תוך-אנלסי כדי לעורר דלקת ריאות המתרחשת לעתים קרובות אלח דם.
התקרבו לצוואר העכבר מאחור, בצורה חלקה ובעדינות. האגודל והאצבע המורה של יד שמאל יוצרים מיקום בצורת U. החזק את הצוואר מיד מאחורי האוזניים כך ראש העכבר הוא מאופק לחלוטין.
הצג את הזיהום ה תוך-רנסאלי. באמצעות פיפית מיקרוליטר 100, להחדיר את זן סטפילוקוקוס aureus תוך-בלתי-בלתי נראה. מחזיק את העכבר במצב זקוף, לאט טיפה שניים עד שלושה microliters של הפתרון החיידקי לתוך שני הנחיריים של העכבר.
הרם את העכבר למעלה ולמטה עם ראשו למעלה וזנב למטה כדי לעזור לפתרון החיידקי להיכנס קנה הנשימה. הרם את העכבר במהירות תוך הנתחתו בעדינות ובאט. חזור על ההטמה 15 פעמים או עד שכל הפתרון החיידקי יוחדיר.
השלב האחרון הוא לסיים את ההליך. הניחו את העכבר על המצעים הזוויתי בזווית של כ-35 מעלות כדי להתאושש. ודא שהעכבר על גבו כשראשו מונח.
צפה בעכבר כדי לוודא שהוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה ואת ההליך. לאחר שיטוח המצעים, מניחים את העכבר בחזרה בכלוב עם גישה בלתי מוגבלת למזון ומים. עכברים החלו למות בסביבות 12 שעות לאחר אינדוקציה של דלקת כליות.
התמותה הייתה הרבה יותר גבוהה עבור עכברים עם CLP לפני דלקת ריאות. שלושה ימים לאחר הניתוח, עכברי CLP היו יותר תמותה עם ממשל תוך-רנסאלי של סטפילוקוקוס אוראוס. רמות הציטוקינות התומכות בסרום עלו באופן משמעותי ב-24 שעות לאחר החדירה החיידקית בעכברי אלח דם בהשוואה לעכברים שהיו להם CLP לבד או לעכברים המופעלים על ידי Sham עם פגיעה שנייה.
עם זאת, עכברים פעמיים פגע הראו ירידה משמעותית ברמות ציטוקינות נוזל BAL בהשוואה הן SA ו ניתוח שאם בתוספת עכברי SA. לפיכך CLP פוגע בהגנה המארחת ומגביר את הרגישות לזיהום. מודל זה כפול פגע הוא כלי רב ערך כדי להבין את המנגנונים המולקולריים עבור אינטראקציה מארח-פתוגן, אשר עשוי לפתוח את השדרה לפתח תרופות חדשות ויעילות וטיפולים אחרים עבור זיהומים superbug.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
פרוטוקול זה מתאר טכניקות למדידת תוצאות זיהומיות העומדות בבסיס זיהומים משניים שנרכשו בבית החולים במצבים של דיכוי חיסוני. הפרוטוקול כולל הקמת מודל של ליגציה/ניקור של העקום (cecal ligation/puncture) בעכברים והדבקתם באמצעות זיהום תוך-אפי, כדי ליצור מודל רלוונטי קלינית של ספסיס תחת דיכוי חיסוני.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- מחלות זיהומיות
- אימונולוגיה
- מודלים חייתיים
רקע
- זיהומים משניים שנרכשו בבית החולים מהווים סיכונים משמעותיים עבור מטופלים עם דיכוי חיסוני.
- הבנת המנגנונים של זיהומים אלו חיונית לפיתוח טיפולים יעילים.
- מודלים של בעלי חיים מסייעים בסימולציה של מצבי מחלה אנושיים לצורכי מחקר.
- ליגציה ונקב של העקום (Cecal ligation/puncture) היא שיטה נפוצה להשראת ספסיס בעכברים.
מטרת המחקר
- להקמת מודל מהימן לחקר זיהומים משניים בעכברים עם דיכוי חיסוני.
- להערכת השפעת זיהומים תוך-אפיים על מודלים אלה.
- להעמקת ההבנה של תוצאות זיהומיות במסגרות קליניות.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הכנת עכברים להליכים כירורגיים.
- השראת ספסיס באמצעות קשירה/ניקור של העקום (cecal ligation/puncture).
- הדבקה תוך-אפית לצורך אתגור של המודל המודכע חיסונית.
- הערכת תוצאות הזיהום לאחר האתגור.
תוצאות עיקריות
- הקמה מוצלחת של מודל ספסיס בעכברים עם דיכוי חיסוני.
- תוצאות מתועדות של זיהומים תוך-אפיים (intranasal) בהקשר זה.
- תובנות לגבי המכניזמים של זיהומים משניים.
- השלכות פוטנציאליות על אסטרטגיות טיפול קליניות.
מסקנות
- המודל מספק כלי בעל ערך לחקר זיהומים משניים.
- הממצאים עשויים להנחות מחקרים עתידיים ופרקטיקות קליניות.
- נדרשים מחקרים נוספים כדי לבחון התערבויות טיפוליות.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
מידול של דיכוי חיסונית המושרה על ידי אלח-דם (sepsis) עם זיהום משני הוא קריטי להורדת סיכונים בתהליכי גילוי של תרופות אנטי-אינפקטיביות ואימונו-מודולטוריות. מודל כפול של קשירה וניקוב של העיוור (CLP) בתוספת זיהום תוך-נחרי מאפשר בחינה מכניסטית של אינטראקציות מאכסן-פתוגן ושל תפקוד חיסוני לקוי הרלוונטי לדלקת ריאות שנרכשה בבית חולים בחולים עם אלח-דם. גישה זו תומכת באמון חזוי במחקרים תרגומיים ומספקת מידע לקבלת החלטות לגבי תיקי פיתוח המכוונים לסיבוכים של אלח-דם.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביו-פרמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר תיקוף פונקציונלי של מטרות חיסוניות המעורבות בדיכוי חיסון המושרה על ידי אלח דם (sepsis).
- תומך בהפחתת סיכונים מכניסטיים באמצעות מידול של תרחישי זיהום משני רלוונטיים מבחינה קלינית.
- מסייע בהבהרה של מסלולים עבור מנגנוני הגנה של המאכסן ומנגנוני רגישות.
סריקה ופיתוח בדיקות
- מספק מערכת in vivo מתוקפסת להערכת מועמדים לאנטי-אינפקטיביים ומודולטורים חיסוניים.
- מאפשר מדידה כמותית של תגובות ציטוקינים ותוצאות הישרדות לאחר זיהום.
- תומך בהערכה הדירה של יעילות תרכובות בהקשר של זיהום כפול (dual-hit).
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתואם עם מודלים רלוונטיים למחלה של דלקת ריאות נרכשת בבית חולים במארחים עם דיכוי חיסוני.
- מאפשר רצף משלב הגילוי ועד לתיקוף פרה-קליני של היפותזות טיפוליות.
- תומך בקידום מותאם-סיכון של מועמדים המכוונים לסיבוכים של אלח דם (sepsis).
אינטגרציה של תהליכי עבודה וצינורות עיבוד (Pipeline & Workflow)
מודל פגיעה כפולה זה מגשר בין השלב המוקדם של הגילוי לבין תיקוף פרה-קליני עבור תוכניות אנטי-אינפקציוניות ואימונו-מודולטוריות המטפלות בספסיס ובזיהומים משניים.
- ביולוגיה של גילוי: מאפשרת בדיקת השערות בנוגע لديכוי חיסוני ורגישות לזיהומים משניים.
- סריקה: מספקת מדדים כמותיים, כגון רמות ציטוקינים ושיעורי תמותה, לצורך הערכת תרכובות.
- אנליטיקה: מאפשרת השוואה סטטיסטית של תוצאות הזיהום בין קבוצות ניסוי שונות.
- מחקר תרגומי: מדמה דינמיקת זיהום רלוונטית קלינית לצורך התאמה של סמנים ביולוגיים וטיפולים.
- שימוש חוזר ארגוני: משמש כפלטפורמה הניתנת לשימוש חוזר למגוון מחקרים מכניסטיים ומחקרי יעילות בתחום מחקר הספסיס.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזוי בתיקוף מטרות ובמחקרים מכניסטיים של תפקוד לקוי של מערכת החיסון.
- ערך תפעולי: מנרמל מידול של זיהום כפול עבור מחקרי in vivo הניתנים לשחזור ולהרחבה.
- ערך אסטרטגי: מספק בסיס להחלטות go/no-go עבור נכסים אנטי-זיהומיים ואימונו-מודולטוריים המכוונים לסיבוכים של אלח דם (sepsis).
- השפעה על תיק הפיתוח: תומך בתעדוף מותאם סיכונים של מועמדים המטפלים בזיהומים משניים בחולים עם דיכוי חיסוני.
שיקולי יישום
- נדרשת מומחיות בטכניקות של השראה כירורגית של ספסיס והדבקה תוך-אפית.
- נדרשת גישה למתקני בעלי חיים ולפלטפורמות אנליטיות לניתוח סייטוקינים והישרדות.
- נדרש סטנדרטיזציה בין צוותים לגבי חומרת ההדבקה והתזמון לצורך הדירות.
- ייתכן שיידרש ביצוע התאמות עבור זנקים חיידקיים שונים או רקעים גנטיים שונים של המארח.
- יש לנהל את השונות בתמותה ובתגובה החיסונית כדי להבטיח פרשנות נתונים איתנה.
