Name: הדור של מבנה האשך של פורצין עם הארכיטקטורה הספציפית ביותר באמצעות התרבות של המיקרוגל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: למד ליצור אורגנואידים של אשך חזיריים עם ארכיטקטורה ספציפית לאשך באמצעות מערכת תרבית מיקרובאר. שיטה זו מאפשרת מחקר מורפוגנזה וסקרינינג תרופות ביעילות גבוהה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי NIH/HD091068-01 לד ר רינה דוברינסקי.

הערה: האשכים מ 1-שבוע החזרזירונים התקבלו מחוות חזיר מסחרית כתוצר לידי מסירוס של חזירים מסחריים. המקור של האשכים אושרה על ידי ועדת הטיפול בעלי חיים באוניברסיטת קלגרי.
1. הכנת פתרונות אנזימים לעיכול רקמות
הערה: יש צורך בשלושה פתרונות אנזימטיים שונים, הכוללים שתי פתרונות לקולגן שונים (פתרון A, B) ופתרון deoxyribonuclease I (DNase I).
<ol><li>כדי להכין את הפתרון A, לפזר 20 מ"ג של הקולגן של העירוי (טבלת חומרים) ו 40 מ"ג של הקולגן של הרביעי W (טבלת חומרים) ב 25 מ ל של בינונית הנשר השונה של Dulbecco של מדיום (dmem). לאחר מכן לסנן לעקר עם מסנן יקרומטר 0.22. הוסף 0.4 mL של סרום העוברי (FBS) כדי פתרון A כדי לעכב טריפסין פעילות.</li>
	<li>כדי להכין פתרון B, לפזר 80 מ"ג של הקולגן הרביעי W (לוח חומרים) ב 40 ML של dmem. לאחר מכן לסנן לעקר עם מסנן יקרומטר 0.22.</li>
	<li>כדי להכין פתרון DNase I (7 מ"ג/mL), לפזר 70 מ"ג של DNase I ב 10 מ ל של d,. לאחר מכן לסנן לעקר עם מסנן יקרומטר 0.22. הערה: ריכוז האנזים לפתרונות הקולגן המתואר כאן, משתנה מהריכוזים (2 מ"ג/mL) המופיעה בסעיף14המקורי. הפרוטוקול הנוכחי מניב תאים עם יכולת קיום מעט גבוהה יותר. עם זאת, תאים מבודדים על ידי שני הפרוטוקולים לייצר אורגנואידים עם ארכיטקטורה זהה רקמה.</li>
</ol>2. רקמת עיכול אנזימטית
<ol><li>לאסוף את האשכים לתוך הגביע סטרילי ולשטוף עם מלוחים באגירה פוספט (PBS) המכיל 1% פניצילין/סטרפטומיצין (P/S). לאחר כביסה, להעביר את האשכים לצלחת התרבות 100 מ"מ רקמות עם PBS המכיל 1% P/S ולהסיר את הוגיניקה ואת האפידיאמיס באמצעות מספריים בלוק מלקחיים. להעביר את האשכים מבודדים למנה חדשה 100 mm ולשטוף ביסודיות עם PBS המכיל 1% P/S.</li>
	<li>כדי לשמור על עקרות, להשתמש בקבוצה אחרת של מספריים סטרילי מלקחיים לקלף את האשך האשכים מתוך אלבומין המנהרה. חותכים את האשכים לאורך ציר האורך ישירות מתחת tunica. לאחר מכן לקלף את האשכים מתוך tunica באמצעות שני מלקחיים ומקום לתוך מנה חדשה 100 mm המכיל 1 mL DMEM זיכרון עם 1% P/S.</li>
	<li>האוהב את האשכים קלופות עם מספריים סטרילי לתוך 1-2 מ"מ חתיכות רקמה. לאחר חיתוך, השתמש מלקחיים סטרילי להסיר שברי לבן של רקמת החיבור.</li>
	<li>להעביר את חתיכות הרקמה הטחון לתוך פתרון A ולמעלה עד 50 mL עם DMEM כדי לקבל ריכוז של 0.4 mg/mL עבור הקולגן הרביעי (טבלת חומרים) וריכוז של 0.8 Mg/ml עבור הקולגן הרביעי W (טבלת חומרים). פתרון מקום A המכיל את חתיכות הרקמה לתוך אמבטיה מים 37 ° c עבור 30 דקות, בעדינות להפוך את הצינורות כל 5 דקות ולבדוק חזותית עבור שחרורו של ה-DNA.<ol>
<li>הוסף 500 μL של DNase I אם ה-DNA צף בחינם הוא נצפתה. לאחר 30 דקות, צנטריפוגה את הצינור ב 90 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 1.5 דקות ולהיפטר supernatant. הערה: הדנ א יופיע כחומר מעונן. כאשר הצינורות מזועזעת, את חתיכות הרקמה להתיישב בעוד ה-DNA היה לצוף.</li>
	</ol></li>
	<li>הוסף פתרון B לצינור העליון עד 50 mL עם DMEM כדי לקבל ריכוז של 1.2 mg/mL של הקולגן הרביעי W (טבלת חומרים). מניחים את הצינור לתוך 37 אמבט מים ° c עבור 30 דקות ובעדינות להפוך את הצינור כל 5 דקות. הוסף 500 μL של DNase אני אם ה-DNA צף בחינם הוא נצפתה.</li>
	<li>לאחר 30 דקות, צנטריפוגה את הצינור ב 90 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 1.5 דקות. לאחר מכן לבטל את הסופרנטנט ולשטוף פעם אחת עם PBS 1% P/S. הערה: הסופרנטטים שנזרקו מהפתרון A ו-B יכילו בעיקר תאים ביניים.</li>
	<li>במעלה הצינור עם הערוץ הגבוה עד 50 mL. בזהירות לאסוף את tubules מן החלק העליון ומקום לתוך צינור חדש 50 mL. הערה: שברי הרקמה הגדולה והבלתי מתעכל מתפשרים במהירות בתחתית, ואילו tubules מתעכלים יישארו בהשעיה. אין לאסוף שברי רקמות גדולים. הליך זה יכול לחזור מספר פעמים עד הפתרון בצינור המקורי הוא כמעט ברור רק שברי רקמות לא מתעכל נשאר, אשר ניתן להיפטר.</li>
	<li>צנטריפוגה את tubules ב 90 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 1.5 דקות ולהיפטר supernatant. הוסיפו שוב את הערוץ החדש והצנטריפוגה. חזור על שלב השטיפה פעמיים.</li>
	<li>לאחר השטיפה האחרונה של ה-PBS, הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הטוטטוספסים ב-5 מ ל של PBS. לאחר מכן, הוסף 15 מ ל של 0.25% טריפסין-אתילליאדיאמטהחומצה (EDTA) כדי tubules. הניחו את הצינור באמבט המים 37 ° c והיפוך עדין כל 2 דקות. אם הרבה בחינם צף DNA הוא נצפתה, להוסיף 500 μL של DNase I עם 5 מ ל של Dזיכרון.</li>
	<li>הערכת העיכול האנזימטי של tubules לתאים בודדים מתחת למיקרוסקופ (הראשון אחרי 5 דקות, ואז כל 2 דקות). אם בעיקר תאים בודדים ניתן לזהות, לעצור את התגובה עם 5 מ ל של fbs ולסנן דרך רשת 70 יקרומטר ולאחר מכן באמצעות רשת 40 יקרומטר. הערה: הטיפול צריך להילקח כי הכובעים על הצינורות 50 mL המשמשים לעיכול (פתרון A, B ו 0.25% טריפסין-EDTA) הם התהדקו כראוי. אם זיהום באמבט מים היא דאגה, סרט פרפין עשוי להיות עטוף סביב כובע כדי להבטיח עקרות.</li>
	<li>צנטריפוגה את התאים היחידים ב 500 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 5 דקות, להשעות מחדש במדיום העשרה (בינונית הנשר משתנה בינוני F/12 (dmem/F12) המכיל 5% fbs ו 1% P/S) ולספור את מספר תאים קיימא. זוהי אוכלוסיית התא ההתחלתית. תקן 100 x 103 תאים ולבצע האימונולוציטוכימיה עבור תא הנבט סמן UCHL1 (אוביקוויב C-טרמינל הידרוקלז L1) כמתואר12 ולקבוע את אחוז התאים הנבט באוכלוסייה זו מתחיל תא. הערה: תא נבט סמן פרוילציטים חלבון לוקמיה האצבע אבץ (PLZF)15 יכול לשמש גם כחלופה מתאימה UCHL1. באוכלוסיית התא ההתחלתי, תפוקת התאים הצפויה היא סביב 700-800 x 109/g של רקמות. אחוז תאי הנבט באוכלוסיית תאים זו צריך להיות 4-5%.</li>
	<li>מניחים סביב 20 x 106 של האוכלוסייה ההתחלתית הזאת בשני מצורף נמוך במיוחד 100 מ"מ מנות פטרי (10 x 106 תאים הושעה 10 מ ל/F12 המכיל 1% P/S בכל מנה) עבור 2 ימים בחממה תרבות רקמה (37 ° c , 5% CO2, 21% חמצן). בצע את תא הנבט העשרה עם התאים הנותרים. הערה: כדי להבטיח את הכדאיות האופטימלית ואת איכות התאים, בעוד תא הנבט העשרה והקוונפיקציה הבאה מתרחשת, אוכלוסיית התא המתחיל ממוקם בתרבות של מנות מצורף מאוד נמוך ברקמת העור במשך יומיים.</li>
</ol>3. העשרה לתאי נבט
הערה: ההליך המתואר לעיל תשואות בעיקר תאים Sertoli ותאי נבט. תכונות הדבקה שונות מאפשרות הפרדת תאי Sertoli ותאי נבט באמצעות ציפוי דיפרנציאלי.
<ol><li>Seed 20-25 x 106 תאים של אוכלוסיית התאים המתחילים לכל 100 מ"מ ממנה התרבות הרקמה בנפח כולל של 8 מ ל של העשרה mL של בינונית (dmem/F12 עם 5% fbs ו 1% P/S) עבור ציפוי דיפרנציאלי. מניחים את התאים לתוך אינקובטור (37 ° c, 5% CO2, 21% O2) ואחרי 1.5 h, לוודא כי רוב התאים sertoli להצמיד לצלחת.</li>
	<li>לאסוף ולשלב את supernatant (בעיקר המכיל תאי הנבט) של 2 צלחות לצלחת אחת חדשה 100 mm ולמקם אותו בחזרה לתוך החממה. אחרי 1 h, שוב לשלב את supernatant של 2 צלחות לצלחת 100 mm חדש. מניחים את הצלחות בחזרה. לתוך החממה למשך הלילה הערה: הסופרנטנמלים המשולבים יכילו בעיקר תאי נבט. התאים הדוניים שנזרקו יחד עם הלוחות הם בעיקר תאי האשכים הסומטיים כגון Sertoli ו peritubular myoid תאים.</li>
	<li>לאסוף את תאי הנבט מועשר בשני שברים כדלקמן. הערה: תאי הנבט מועשר לדבוק באופן שונה, שבר לא מחסיד ושבריר דבקה מעט. שני השברים האלה מהווים את אוכלוסיית תאי הנבט המועשרת<ol>
<li>שבר לא מחסיד: לאסוף את הסופרנטאנט.</li>
		<li>שבר במקצת חסיד: לשטוף את הצלחות בעדינות עם PBS, לטפל עם 2 מ ל של 1:20 דילול של 0.25% טריפסין-EDTA עבור 5 דקות בטמפרטורת החדר, לעצור את התגובה עם 2 מ ל של העשרה מדיום ולאסוף בצינור זהה כמו שבר לא חסיד. הערה: 0.25% טריפסין-EDTA צריך להיות מדולל עם PBS כדי לייצר מ1:20 טריפסין פתרון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לספור את המספר הכולל של תאים באמצעות מונה התא, לתקן 100 x 103 תאים ולבצע החיסונית של תא הנבט סמן UCHL1 כמתואר12 ולקבוע את אחוז תאי הנבט באוכלוסיה זו מועשר תאים. הערה: אחוז תאי הנבט באוכלוסיית תאים זו צריך להיות לפחות 60-70%. מאז הכימיה החיסונית לכימות ידרוש יום אחד, את התאים מועשר צריך להיות ממוקם מצורף נמוך במיוחד 100 מ"מ צלחת פטרי עם DMEM/F12 שיושלם עם 1% P/S עבור המשך כדי להבטיח איכות תא אופטימלי ויכולת הכדאיות.</li>
</ol>4. הכנת תאים לזריעה
<ol><li>כדי לקצור את הכנת התא ההתחלתי, לאסוף את supernatant בצינור 50 mL מתוך החזקה אולטרה מצורף מנות 100 מ"מ. לשטוף את הצלחות במרץ עם PBS לאסוף את התאים הדבקו. אין צורך בעיכול אנזימטי. הערה: חלק מתאי האשכים, בעיקר בתאי Sertoli, יכולים מעט לדבוק לוחיות ההחזקה האולטרה נמוכה.</li>
	<li>לשלב את ההכנה התא ההתחלתי ותאי נבט מועשר כדי להשיג הכנה לתא עבודה המכיל 25% תאי הנבט. צנטריפוגה ב 500 x g עם בלמים 25 ° צלזיוס עבור 5 דקות, למחוק את supernatant ולהשעות את התאים בינונית היווצרות אורגאיד (Dמאמ/F12 בתוספת אינסולין 10 μg/ml, העברת 5.5 Μg/ml, סלניום 6.7 Ng/ml, 20 Ng/ml מקדם גידול באפידרמיס , 1% P/S). כוונן את צפיפות התא ל-2.4 x 106 לכל mL. הערה: כל באר בלוחות המיקרוגל המשמשים13 בפרוטוקול זה הכילו 1,200 המיקרוגל.</li>
	<li>השתמש בנוסחה שלהלן כדי לחשב את מספר התאים בהתאם למפורט להלן. מספר התאים בבאר = מספר התאים של המיקרוגל x שניתן לאשכולות עבור כל אורגנואיד.</li>
	<li>כדי ליצור אורגנואידים מ 1, 000 תאים כל אחד, זרע כל עם (1,200 x 1,000 תאים כל =) 1.2 x 106 תאים. כוונן את צפיפות התא בתא ההשעיה באופן שבו התאים נזרע בנפח של 0.5 mL של בינוני. עבור אורגנואידים נוצר מ 1,000 תאים כל אחד, להשתמש בצפיפות של 2.4 x 106 תאים לכל mL (1.2 x 106 תאים בשנת 0.5 mL).</li>
</ol>5. הכנת המיקרוגל לקבלת תאים
הערה: כדי לוודא שהתאים אינם נצמדים למשטח המיקרוגל, התייחס לפתרון שטיפה הניתן לשטיפה הזמין לרכישה על-ידי היצרן.
<ol><li>הוסף 0.5 mL של פתרון שטיפה לכל טוב. ודא כי אין בועות אוויר לכודים בבאר. כדי להסיר בועות אוויר, אם בכלל, צנטריפוגה את הצלחת ב 2,000 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 2 דקות.</li>
	<li>שימו לב לצלחת תחת מיקרוסקופ הפוך נמוך, כדי לוודא כי הבועות הוסרו מן המיקרוגל. אם לכודים בועות הם נצפו, צנטריפוגה שוב ב 2,000 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 2 דקות כדי להסיר את כל הבועות הנותרים.</li>
	<li>מכסים את הצלחת עם המכסה ואת הדגירה עבור 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הטיפול הושלם, להסיר את הפתרון שטיפה ומיד לשטוף את הצלחת עם מים סטרילי או PBS. ודא כי הצלחת לא להתייבש לאחר הטיפול עם פתרון שטיפה.</li>
</ol>6. דור של אורגנואידים האשכים
<ol><li>הוסף 0.5 mL של היווצרות אורגאיד בינונית (ללא כל התאים) כל היטב צנטריפוגה ב 2,000 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 2 דקות כדי להסיר כל בועות אוויר לכודים. צפו בבאר תחת מיקרוסקופ הפוך נמוך כדי לוודא כי בועות האוויר הוסרו. אם לכודים בועות הם נצפו, צנטריפוגה שוב ב 2,000 x g עם בלמים 25 ° צ' עבור 2 דקות כדי להסיר את כל הבועות הנותרים.</li>
	<li>הוסף 0.5 mL של ההשעיה התא עובד בעדינות לערבב על ידי ליטוף למעלה ולמטה. צנטריפוגה ב 500 x g עם בלמים 25 ° צלזיוס עבור 5 דקות. השתמש במיקרוסקופ הפוך כדי לוודא כי התאים מקובצים בתוך המיקרוגל.</li>
	<li>להעביר את הצלחת לתוך החממה תרבות התאים והתרבות עבור 5 ימים. . לשנות חצי מהמדיום בכל יום<ol>
<li>כדי לשנות בינונית מבלי לאבד אורגנואידים, גע בעצת הפיפטה לקיר הבאר והנמך בעדינות כדי לגעת במנקוס ולמשוך לאט את המדיום. הקפידו לעקוב אחרי המאנקוס כשהוא נופל. כדי להוסיף בינונית טרייה, גע בעצת הפיפטה לקיר של הבאר באותו צד של הנסיגה הבינונית והוסף בעדינות בינוני טרי לקיר הבאר ומאפשר לו לזרום לאט במורד הקיר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כדי לשחזר את האורגנואידים, בעדינות למעלה ולמטה באמצעות פיפטה בפה רחב. זה יאפשר לאורגנואידים. לצאת ממיקרוגל</li>
	<li>לאסוף את האורגנואידים, לשטוף עם PBS, לתקן ולבצע אימונוציטוכימיה לסמן תא הנבט (בL1), מסמן תא Sertoli (החלבון כריכה מחייב 4-GATA4), peritubular מסמן התא myoid (α-חלקה שריר Actin-αSMA) ו ליידיג סמן תא (ציטוכרום P450-CYP450) כמתואר12 והמחש במיקרוסקופ קונפוקלית וקד.</li>
</ol>

<ol><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lgr5%28%2Bve%29+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lgr5(+ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell Stem Cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li>
<li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unlimited+in+vitro+expansion+of+adult+bi-potent+pancreas+progenitors+through+the+Lgr5%2FR-spondin+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+Journal%22%5BJournal%5D)">Unlimited in vitro expansion of adult bi-potent pancreas progenitors through the Lgr5/R-spondin axis.</a> Embo Journal. 32 (20), 2708-2721 (2013).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li>
<li>Takebe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+and+functional+human+liver+from+an+iPSC-derived+organ+bud+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant.</a> Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).</li>
<li>Quadrato, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+diversity+and+network+dynamics+in+photosensitive+human+brain+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell diversity and network dynamics in photosensitive human brain organoids.</a> Nature. 545 (7652), 48-53 (2017).</li>
<li>Abbott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture%3A+biology%27s+new+dimension%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell culture: biology's new dimension.</a> Nature. 424 (6951), 870-872 (2003).</li>
<li>Pendergraft, S. S., Sadri-Ardekani, H., Atala, A., Bishop, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+testicular+organoid%3A+a+novel+tool+for+the+study+of+human+spermatogenesis+and+gonadotoxicity+in+vitrodagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional testicular organoid: a novel tool for the study of human spermatogenesis and gonadotoxicity in vitrodagger.</a> Biology of Reproduction. 96 (3), 720-732 (2017).</li>
<li>Strange, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+testicular+organoid+system+as+a+novel+tool+to+study+Zika+virus+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Microbes+%26+Infections%22%5BJournal%5D)">Human testicular organoid system as a novel tool to study Zika virus pathogenesis.</a> Emerging Microbes & Infections. 7 (1), 82-82 (2018).</li>
<li>Alves-Lopes, J. P., Soder, O., Stukenborg, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testicular+organoid+generation+by+a+novel+in+vitro+three-layer+gradient+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Testicular organoid generation by a novel in vitro three-layer gradient system.</a> Biomaterials. 130, 76-89 (2017).</li>
<li>Baert, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Human+Testicular+Cells+Self-Organize+into+Organoids+with+Testicular+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Primary Human Testicular Cells Self-Organize into Organoids with Testicular Properties.</a> Stem Cell Reports. 8 (1), 30-38 (2017).</li>
<li>Sakib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+organotypic+testicular+organoids+in+microwell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Formation of organotypic testicular organoids in microwell culture.</a> Biology of Reproduction. , (2019).</li>
<li>Razian, G., Yu, Y., Ungrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Large+Numbers+of+Size-controlled+Tumor+Spheroids+Using+Microwell+Plates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Production of Large Numbers of Size-controlled Tumor Spheroids Using Microwell Plates.</a> Journal of Visualized Experiments. (81), 50665(2013).</li>
<li>Sakib, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+organotypic+testicular+organoids+in+microwell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Formation of organotypic testicular organoids in microwell culture.</a> Biology of Reproduction. 100 (6), 1648-1660 (2019).</li>
<li>González, R., Dobrinski, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+the+Mouse+Monopoly%3A+Studying+the+Male+Germ+Line+in+Domestic+Animal+Models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Beyond the Mouse Monopoly: Studying the Male Germ Line in Domestic Animal Models.</a> ILAR Journal. 56 (1), 83-98 (2015).</li>
<li>Oatley, J. M., Brinster, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+germline+stem+cell+niche+unit+in+mammalian+testes%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">The germline stem cell niche unit in mammalian testes.</a> Physiological Reviews. 92 (2), 577-595 (2012).</li>
<li>Chen, L. Y., Willis, W. D., Eddy, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+Gdnf+Gene+in+peritubular+myoid+cells+disrupts+undifferentiated+spermatogonial+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science+USA%22%5BJournal%5D)">Targeting the Gdnf Gene in peritubular myoid cells disrupts undifferentiated spermatogonial cell development.</a> Proceedings of the National Academy of Science USA. 113 (7), 1829-1834 (2016).</li>
</ol>

לדוקטור אנגרין יש אינטרס פיננסי. בטכנולוגיית הצובר כממציא

הקמנו שיטה פשוטה המאפשרת את עקבית, הדור לשחזור של מספר גדול של אורגנואידים האשכים עם אדריכלות רקמות דומה להעיד ב vivo12. בעוד הגישה פותחה באמצעות תאי התפיסה של חזירי, היא ישימה יותר באופן כללי גם על העכבר, הפרימטים הלא אנושיים ו-האדם12. מספר שיטות שונות דווחו להפקת אורגנואידים האשכים8,9,10,11. Baert et אל. שנוצר האשכים האנושיים אורגנואידים ממבוגרי...

בשנים האחרונות, היתה תחייה של עניין באורגנואידים תלת ממדיים. איברים שונים כגון המעי1, בטן2, הלבלב3,4, הכבד5, ואת המוח6 נגזר בהצלחה לתוך 3d מערכות אורגאיד. לאורגנואידים אלה יש דמיון אדריכלי ופונקציונלי לאיברים בvivo והם רלוונטיים יותר ביולוגית לחקר מיקרואקולוגיה של רקמות מאשר מערכות התרבות7. כתוצאה מכך, מארגני האשכים החלו לקבל ריבית כמו גם8,9,10,11,12. רוב השיטות שדווחו עד כה מורכבות, תפוקה שאינה גבוהה10 ודורשות תוספת של חלבונים ecm8,10. מורכבות זו גם מובילה לבעיות עם התוכסות. שיטה פשוטה ומקיימת צורך שמאפשר את הדור של אורגנואידים האשכים עם שיוכי תאים שהם כמו ביקורות של vivo.
לאחרונה דיווחו על מערכת שתפנה לדרישות הללו12. בעזרת החזיר כמודל, העסקנו גישה. לצבירת כפייה גלית במערכת המיקרוגל במערכת המיקרוגל, כל הבאר מכילה מספר רב של מערך המיקרוגל הקטן יותר13. זה מאפשר את הדור של מספר רב של מידות בגודל אחיד. מערכת המיקרוגל אפשרה דור של מספר רב של ממדים אחידים עם ארכיטקטורה ספציפית. המערכת פשוטה ואינה דורשת תוספת של חלבונים מבית ECM.

<table><tbody><tr><td>צלחת תרבית רקמה צמודה נמוכה במיוחד 100 מ"מ</td><td>קורנינג</td><td>#CLS3262</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית רקמות 100 מ"מ</td><td>קורנינג</td><td>#353803</td><td></td></tr><tr><td>Aggrwell 400</td><td>טכנולוגיות תאי גזע</td><td>#34411</td><td></td></tr><tr><td>טכנולוגיות תאי גזע תמיסת שטיפה נגד היצמדות</td><td></td> <td>#07010</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז מסוג IV מבית Clostridium histolyticum</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>#C5138</td><td>המכונה קולגנז IV S</td></tr><tr><td>קולגנאז סוג IV וורת'ינגטון</td><td>וורת'ינגטון-ביוכימיה</td><td>#LS004189</td><td>המכונה קולגנאז IV W</td></tr><tr><td>דאוקסיריבונוקלאז I מלבלב בקר</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>#DN25</td><td></td></tr><tr><td>דולבקו s Modified Eagle' s בינוני/F12</td><td>Gibco</td><td>#11330-032</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Modified Eagle' s בינוני - גלוקוז גבוה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#D6429</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s פוספט בופר</td><td>מלח סיגמא-אולדריץ'</td><td>#D8537</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמיס</td><td>מו"פ & D Systems</td><td>#236-EG</td><td></td></tr><tr><td>מסנני תאי פלקון 70 ומיקרו; m</td><td>FisherScientific</td><td>#352350</td><td></td></tr><tr><td>מסנני תאי פלקון 40 ומיקרו; m</td><td>FisherScientific</td><td>#352340</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>#12483-020</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין-טרנספרין-סלניום</td><td>Gibco</td><td>#41400-045</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>#P4333</td><td></td></tr><tr><td>רקמת אשך חזירית</td><td>Sunterra Farms Ltd (אלברטה, קנדה)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriflip-GP צינור צנטריפוגה סטרילי יחידת מסנן עליון</td><td>Millipore</td><td>#SCGP00525</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Sigma</td><td>#T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

הדור של מבנה האשך של פורצין עם הארכיטקטורה הספציפית ביותר באמצעות התרבות של המיקרוגל

Generation of Porcine Testicular Organoids with Testis Specific Architecture using Microwell Culture

אורגנואידים הם שלושה מבנים ממדיים המורכב מסוגי תאים מרובים המסוגלים ללכוד את ארכיטקטורת הרקמה ופונקציות של איברים בvivo. היווצרות אורגנואידים פתחה שדרות שונות של מחקר בסיסי וטרנסלייתי. בשנים האחרונות, אורגנואידים האשכים צברה עניין בתחום ביולוגיה של הגבר הרבייה. אורגנואידים האשכים לאפשר את המחקר של אינטראקציות תא תא, התפתחות רקמות, ואת התא הנבט נישה מיקרואקולוגיה ולהקל על התפוקה הגבוהה של סמים והקרנות רעילות. שיטה נדרשת באופן אמין ומתוכשל ליצור אורגנואידים האשכים עם הרקמה הספציפית של רקמת רקמות. מערכת התרבות של המיקרוגל מכילה מערך צפוף של המיקרוגל בצורת פירמידה. תאים האשכים נגזר מפני האשכים pubertal הם centrifuged לתוך המיקרוגל האלה ותרבותי כדי ליצור אורגנואידים האשכים עם ביקורות-הרקמה הספציפית בדיקות ואגודות תאים. בתהליך זה ניתן ליצור אלפי אורגנואידים אחידים. הפרוטוקול המדווח כאן יהיה עניין נרחב לחוקרים הלומדים רבייה גברית.

תאים מבודדים מ 1-שבוע האשכים חזירי שהיו מתורבתים במיקרוגל עצמי מאורגן לתוך spheroids (איור 1A, איור 2), עם החיצוני הנבדל ונפרד (אפיתל הרקמות) ותאי פנים ( interstitium) (איור 1ב, איור 2). שני התאים היו מופרדים על ידי קולגןהרביעי וקרום מרתף. L1+ ve תאים נבט ו GATA4+ ve sertoli תאים היו בתא החיצוני על קרום ה...

לכאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור הדור הניתן להתרבות של אורגנואידים האשך של חזירי עם ארכיטקטורת רקמה ספציפית בראש באמצעות מערכת התרבות הזמינה מסחרית למיקרוגל.

Organoids are three dimensional structures composed of multiple cell types that are capable of recapitulating tissue architecture and functions of organs ...

פרוטוקול זה הוא משמעותי משום שהוא מאפשר את הדור של אורגנואידים האשכים, אשר יכול לשמש כפלטפורמה לחקר morphogenesis האשך עבור תרופות tropo גבוהה הקרנות רעילות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא ניתנת לשחזור מאוד, דורשת מספר נמוך יחסית של תאים ו ניתן להשתמש בה כדי ליצור מספר רב של אורגנואידים האשכים עם ארכיטקטורה ספציפית לאשם. שיטה זו יכולה להיות מיושמת כדי ללמוד מערכות אחרות, כגון תאי גזע פלוריפוטנטיים או תאי איון הלבלב עם האופטימיזציה הדרושה.הפגנת הליך העיכול האנזימטי של רקמת האשכים תהיה אנה וויגט, דוקטורנטית מהמעבדה שלי. אסוף את האשכים לתוך מקור סטרילי ולשטוף עם PBS המכיל 1%פניצילין סטרפטומיצין. לאחר הכביסה מעבירים את האשכים לתבשיל תרבות רקמה של 100 מילימטר עם PBS המכיל 1%פניצילין סטרפטומיצין.השתמש מספריים autoclaved ומלקחים כדי להסיר את הנרתיק טוניקה ואפידימיס. מעבירים את האשכים המבודדים לתבשיל חדש של 100 מילימטרים ושוטפים היטב עם PBS המכיל 1%פניצילין סטרפטומיצין. חותכים את האשכים לאורך ציר האורך ישירות מתחת לטוניקה.לאחר מכן לקלף את האשכים מתוך טוניקה באמצעות שני ממטרים ולמקם אותו לתוך צלחת חדשה 100 מילימטר המכיל 1 מיליליטר של DMEM עם 1% פניצילין סטרפטומיצין. טחון את האשכים קלופים עם מספריים סטריליים לחתיכות רקמה אחד עד שני מילימטר. לאחר החיתוך להשתמש מדפים סטריליים כדי להסיר את השברים הלבנים של רקמת חיבור.להעביר את חתיכות רקמה טחון לתוך פתרון A בצינור 50 מיליליטר ו לראשו עד 50 מיליליטר עם DMEM כדי לקבל ריכוז של 0.4 מיליגרם למיליליטר עבור colagenase 4S וריכוז של 0.8 מיליגרם למיליליטר עבור colagenase 4W. מניחים את הצינור המכיל את חתיכות הרקמה לתוך 37 מעלות צלזיוס אמבט מים במשך 30 דקות. בעדינות להפוך את הצינור כל חמש דקות.לאחר 30 דקות, צנטריפוגה הצינור ב 90 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך 1.5 דקות. השלך את supernatant, מודעה 40 מיליליטר של פתרון B, ו העליון עד 50 מיליליטר עם DMEM כדי לקבל ריכוז של 1.2 מיליגרם למיליליטר של colagenase 4W. מניחים את הצינור לתוך אמבט מים 37 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות בעדינות להפוך את הצינור כל חמש דקות.צנטריפוגה הצינור ב 90 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך 1.5 דקות. לאחר מכן להשליך את supernatant, ולשטוף פעם אחת עם PBS עם 1%פניצילין סטרפטומיצין. בזהירות לאסוף את הצינורות מלמעלה ואת המקום לתוך צינור חדש 50 מיליליטר.למעלה את הצינור עם PBS עד 50 מיליליטר. צנטריפוגה הפקעות ב 90 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך 1.5 דקות. השליכו את העל-טבעי והוסיפו PBS טרי לשטוף פעמיים נוספות.לאחר לשטוף PBS האחרון להסיר את העל טבעי מחדש להשעות את צינוריות חצי מיליליטר בחמישה מיליליטר של PBS. לאחר מכן, להוסיף 15 מיליליטר של 0.25% טריפסין EDTA לשחפת. מניחים את הצינור באמבט מים 37 מעלות צלזיוס בעדינות להפוך כל שתי דקות.לאחר חמש דקות להעריך את העיכול האנזימטי של צינוריות לתאים בודדים מתחת למיקרוסקופ עם 10 microliters של מדגם על צלחת תרבות רקמה. כל שתי דקות מניחים את הדגימה מתחת למיקרוסקופ כדי להתבונן. אם בעיקר תאים בודדים ניתן לזהות לעצור את התגובה עם חמישה מיליליטר של FBS ולסנן דרך רשת של 70 מיקרון ולאחר מכן דרך רשת של 40 מיקרון.צנטריפוגה התאים הבודדים ב 500 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. להשעות מחדש 50 מיליליטר של מדיום העשרה, ולספר את מספר התאים קיימא באמצעות hemocytometer. העבר 20 מיליון מאוכלוסיית תאים התחלתית זו לכל אחד משני צלחות פטרי אולטרה-נמוכות 100 מילימטר וחרבן באינקובטור של תרבות הרקמות ב-37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו-חמצני ו-21% חמצן ליומיים.לוותר על 20 עד 25 מיליון תאים של אוכלוסיית התאים ההתחלתיים הנותרים לכל צלחת תירתי רקמה 100 מילימטר בנפח כולל של שמונה מיליליטר של מדיום העשרה. מניחים את המנה לתוך אינקובטור ולאחר 1.5 שעות להבטיח כי רוב התאים Sertoli מחוברים לצלחת. להטות מעט שתי צלחות כדי לאסוף ולשלב את supernatants לתוך צלחת אחת חדשה 100 מילימטר ולמקום אותו בחזרה לתוך החממה.לאחר שעה, שוב לשלב את supernatants של שתי צלחות לצלחת חדשה 100 מילימטר. מניחים את הצלחות בחזרה לתוך החממה לילה. לאחר מכן לאסוף את תאי הנבט מועשר בשני שברים, שבר שאינו חסיד שבר חסידי מעט.אסוף את העל-טבעי כשבר שאינו חסיד. עבור שבר מעט חסיד לשטוף את הצלחות בעדינות עם PBS ולטפל עם שני מיליליטר של אחד עד 20 דילול של 0.25% טריפסין EDTA במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לעצור את התגובה על ידי הוספת שני מיליליטר של מדיום העשרה ולאסוף בצינור שבר שאינו חסיד.שלב את הכנת התא ההתחלתי ואת תאי הנבט המועשרים בצינור כדי להשיג הכנת תא עבודה המכילה 25% תאי נבט. צנטריפוגה ב 500 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. השלך את העל-טבעי והשהה מחדש את התאים ב-20 מיליליטר של מדיום היווצרות אורגנואידים כדי להגיע לריכוז של 2.4 מיליון תאים למיליליטר.בצינור חדש להוסיף מיליליטר אחד של הפתרון המכיל תאים. הוסף 0.5 מיליליטר של פתרון שטיפה פעילי שטח לכל באר בצלחת מיקרו באר. ודא כי אין בועות אוויר לכודים באר.כדי להסיר בועות אוויר צנטריפוגה הצלחת ב 2, 000 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך שתי דקות. שימו לב לצלחת תחת מיקרוסקופ הפוך הגדלה נמוכה כדי לוודא שהבועות הוסרו מהמיקרו בארות. מכסים את הצלחת במכסה ודגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.לאחר סיום הטיפול להסיר את פתרון השטיפה מיד לשטוף את הצלחת עם מים סטריליים או PBS. הוסף 0.5 מיליליטר של היווצרות אורגנואידית בינונית לכל באר וצנטריפוגה ב 2, 000 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך שתי דקות כדי להסיר את כל בועות אוויר לכודים. שימו לב ל באר תחת מיקרוסקופ הפוך הגדלה נמוכה כדי לוודא כי בועות האוויר הוסרו.מוסיפים 0.5 מיליליטר של ההשעיה של תא העבודה ומערבבים בעדינות על ידי צינור למעלה ולמטה. צנטריפוגה ב 500 פעמים G עם הפסקות ב 25 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. השתמש במיקרוסקופ הפוך כדי לוודא שהתאים התקבצו בתוך בארות המיקרו.מעבירים את הצלחת לאנקובטור ותרבות של תרבות תאים למשך חמישה ימים. תחליף חצי מהמדיום כל יומיים. כדי לשחזר את האורגנואידים להשתמש פיפטה רחבת פה כדי pipette בעדינות את המדיום למעלה ולמטה.זה מאפשר האורגנואידים לצאת ממיקרו בארות. לאסוף את האורגנואידים, לתקן ולבצע ציטוכימיה חיסונית עבור סמן תא נבט, סמן תא Sertoli, סמן תא מיואיד פריטובולרי סמן תא Leydig ולהמחיש תחת מיקרוסקופ קונפוקלי. במחקר זה בודדו תאים מתוך אשכי פורצ'ין בני שבוע שהיו מתורבתים במיקרו בארות מאורגנות בעצמן לספריואידים עם תאים חיצוניים ופנימיים מובחנים ומובחנים.שני התאים הופרדו על ידי קרום מרתף חיובי קולגן IV. תאי סרטולי חיוביים GATA4 ותאי נבט חיוביים UCHL1 היו בתא החיצוני על קרום המרתף. תאי מיואידים פרי-צינוריים חיוביים של aSMA היו מקומיים לאורך החלק הפנימי של קרום המרתף בעוד תאי Leydig חיוביים CYP450 היו במרכז האינטרסטיטיום.מבנה זה דומה לתנאי Situ, שבו תאי Leydig, תאים מיואידים צינוריים פרי, ממוקמים interstitium, בתאי תאים interstitial ונבט, תאי Sertoli ממוקמים האפיתל חצי שנתי. חשוב להבטיח כי תאים המשמשים ליצירת אורגנואידים יש איכות אופטימלית. יש להקדיש תשומת לב זהירה במהלך שלב ההתזה של העיכול האנזימטי.בעקבות הליך זה האורגנואידים יכולים להיות מתורבתים לטווח ארוך כדי ללמוד התברואה תא נבט או לנתח ביטוי גנים וחלבונים מופרשים או הורמונים. היכולת ליצור אורגנואידים עם אסוציאציות תאים ספציפיות לאשם מספקת מערכת חוץ-חוץ-תאית חדשנית לחקר אינטראקציות בין תאים לתאים החשובים להתפתחות האשכים ולתפקוד תאי הנבט.

generation-porcine-testicular-organoids-with-testis-specific

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

אנו מראים שיטה של נקרופסי וניתוח של מודלים של סרטן הערמונית העכבר, התמקדות בניתוח גידול בערמונית. פרוטוקול צעד אחר צעד עבור דור של גידול בבלוטת הערמונית העכבר מוצג גם.

הדור של אורגנואידים גידול מ מהונדסים גנטית עכבר מודלים של סרטן הערמונית

בלוטת החלב היא מבנה מחודד, המורכב מיואפיתל חיצוני ותאי אפיתל הפנים הפנימיים. המוצג הוא פרוטוקול להכין אורגנואידים. באמצעות טריסיזציה דיפרנציאלית שיטה יעילה זו מאפשרת לחוקרים לטפל באופן נפרד בשני סוגי תאים אלה כדי לחקור שאלות הנוגעות לתפקידם בצורת בלוטת החלב ובתפקוד.

הדור של הפסיפס של חלב באמצעות טריסיזציה דיפרנציאלית

כאן, ארבע שיטות ליצירת אורגנואידים אשכים מתאי אשכים מורין ילודים ראשוניים מתוארים כלומר, מטריצה חוץ תאית (ECM) וסביבות תרבות 2D ותלת-מיוד ללא ECM. טכניקות אלה יש יישומי מחקר מרובים והם שימושיים במיוחד ללימוד פיתוח האשכים ופיזיולוגיה במבחנה.

אקסטרה סלולר מבוסס מטריצה ודור נוסף ללא מטריקס סלולרי של אורגנואידים אשכים Murine

מאמר זה מציג פרוטוקול ייצור לסוג חדש של מצע תרבית עם מאות מיקרו-מיכלים למ"מ2, שבו ניתן לגדל אורגנואידים בתרבית ולצפות בהם באמצעות מיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה. פרוטוקולי זריעת התאים ומערכת החיסון מפורטים גם הם.

פלטפורמה בעלת תפוקה גבוהה לתרבית והדמיה תלת-ממדית של אורגנואידים

כאן, אנו מתארים פרוטוקול לתרבית אורגנואידים תלת-ממדיים במעי חזיר מקריפטים אפיתליאליים שמורים בהקפאה. אנו מתארים גם שיטה להקמת חד-שכבות תאים הנגזרות מאורגנואידים תלת-ממדיים, המאפשרים גישה לצד האפי של תאי אפיתל.

תרבית אורגנואידים תלת-ממדיים במעי חזרזיר מקריפטים אפיתליאליים שמורים בהקפאה והקמת חד-שכבות תאים

פרוטוקול זה מציג שיטה ליצירת אורגנואידים וסקולריים באמצעות תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים.

יצירת אורגנואידים וסקולריים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי אדם

מחקר זה מתאר פרוטוקול ליצירת חד-שכבות דו-ממדיות של אורגנואידים חזיריים שמקורם במעי הדק והגס. הצמיחה של חד-שכבות אלו מסומנת על ידי הגדלת ערכי TEER, המעידים על שלמות אפיתל חזקה. בנוסף, חד-שכבות אלה מציגות תגובות הפרשה פיזיולוגיות בניסויי תא אוסינג לאחר יישום פורסקולין.

אורגנואידים דו-ממדיים במעי חזיר המשקפים את התכונות הפיזיולוגיות של המעיים הטבעיים

מחקר זה מציג מתודולוגיה חסכונית ויעילה ליצירת מבני תאים תלת מימדיים באמצעות מערכת מבוססת חותמת ליצירת מיקרו-בארות בתבניות אגרוז. המערכת מקדמת היווצרות של ספרואידים/אורגנואידים אחידים, ובכך משפרת את האינטראקציות בין התאים. גישה זו מפחיתה את השונות הניסויית ותומכת ביישומים בבדיקות תרופות והנדסת רקמות.

יצירת ספרואידים/אורגנואידים תלת מימדיים מתרביות תאים דו-ממדיות באמצעות מכשיר חותמת חדשני

אנו מתארים שיטות לבידוד תאי סומטיקה של שחלות העכבר מחלק מועשר בסטרומה של השחלה וליצירת אורגנואידים סומטיים של שחלות העכבר בגישה ללא פיגומים.

חקירת מיקרו-סביבת השחלות: שיטות לבידוד, תרבית דו-ממדית ותרבות אורגנואידית של תאי סומטיקה בשחלות בעכברים

אדם בתאי גזע pluripotent (hPSCs) יש פוטנציאל לטפל מספר עצום של מחלות שונות. השירות של תאים אלה הוא בכך שהם יכולים להתמיין לכל סוג תא בגוף. כאן אנו מתארים את assay תפלצת רוחנית, אשר משמש כדי להדגים את pluripotence של hPSCs.

תפלצת רוחנית דור הקפסולה testis

למד ליצור אורגנואידים של אשך חזיריים עם ארכיטקטורה ספציפית לאשך באמצעות מערכת תרבית מיקרובאר. שיטה זו מאפשרת מחקר מורפוגנזה וסקרינינג תרופות ביעילות גבוהה.

הדור של מבנה האשך של פורצין עם הארכיטקטורה הספציפית ביותר באמצעות התרבות של המיקרוגל

גלה סרטונים נוספים