בלתי מתאים של תאי גזע בתוך מונח של חולדות הנוטרסית

תיאר הוא פרוטוקול לביצוע השתלת intratracheal של תאים סטרומה mesenchymal (MSCs) באמצעות הזרקת intratracheal בטווח חולדות הלאומית. טכניקה זו היא אופציה מעשית מבחינה קלינית לאספקת תאי גזע ותרופות לתוך הריאות חולדה התינוק כדי להעריך את יעילותם.

Intracheal instillation הוא ביוטכנולוגיה קלינית להעברת תאי גזע ותרופות לתוך ריאה יילודים כדי להעריך את יעילות צ'ילמן. טכניקה זו עשויה להיות בתום לב לשימוש עם מגוון רחב של יישום ראשוני בחולדת יילודים והוא אמצעי קל יחסית וחסכוני לטיפול במחלות ריאות. ביום החמישי שלאחר הלידה, רסנו גורי עכברושים מרדים של ספראג-דאולי, על דוכן צנרור בזווית של 60 מעלות.

ולהדביק סרט תיוג מעבדה לכל ארבעת הגפיים של כל גור כדי לאבטח אותם במקום. החל קלטת מתחת לכל אף כדי לתקן את הראשים. ולהצביע על הצוואר הראשון לנקב קנה הנשימה.

השתמש כרית הכנה 75% אלכוהול כדי לחטא את אזור החתך. ולעשות חתך אנכי 3 ס"מ קו האמצע מעל קנה הנשימה, כדי למנוע פגיעה בעורקים הראשיים. השתמש פינצטה מחודדת מעוקל ללא וו כדי לנטרל את שכבות השומן והשרירים כדי לאתר את קנה הנשימה.

כאשר ניתן לראות את קנה הנשימה, להשתמש פינצטה כדי לתפוס את קנה הנשימה ולהשתמש 100 מזרק microliter מצויד מחט 30 מד להזריק פעם אחת עשרה של GFP גחלילית גחלילית החמישי שכותרתו תאים סטרומלי mesenchymal ב 30 microliters של מלוחים לתוך קנה הנשימה, במהלך השלב מעורר השראה. כאשר כל התאים הוזרקו, לסגור את החתך עם 160 תפר משי קשירת הקשר בחוזקה ככל האפשר. וחותכת את קצות התפר קצר ככל האפשר.

לאחר מכן אפשרו ל הגור להתאושש מההרדמה, במקום חם עם ניטור עד שהוא חם, ורוד, ומסוגלים לתנועה ספונטנית לפני החזרת החיה לכלוב שלה. כדי לעקוב אחר התאים הסטרומליים הקסנצ'ימליים האנושיים המושתלים 15 דקות לאחר שהעכברושים התאוששו מהניתוח, מוזרקים תוך-אפית את הגורים שעברו הרדמה מחדש עם 125 מיליגרם לקילוגרם של מלח אשלגן לוציפריאני ב- PBS. 10 דקות לאחר ההזרקה, השתמש במערכת הדמיה קטנה של בעלי חיים כדי לרכוש תמונות רציפות במרווחי זמן של 5-15 שניות עם binning בינוני, עצירת f אחת, ושדה תצוגה של 26 ס"מ.

לאחר מכן השתמש בתוכנת ההדמיה כדי לכמת את פעילות האלוהות מהריאות בהתבסס על אזורי העניין האוטומטיים. רמה גבוהה של ביטוי GFP נצפתה לוציפראז גחליל שכותרתו תאי גזע mesenchymal אנושי. תאי גזע Mesenchymal יכול להיות מאופיין עוד יותר על ידי ביטוי סמן פני השטח התא שלהם ואת היכולת שלהם להבדיל לתוך osteocytes, chondrocytes, ו adipocytes.

הדמיה זוהרת של התאים המזנצ'ימליים האנושיים המושתלים ב- VIVO, מגלה היעדר איתות זוהר באזורי הריאות של חולדות שטופלו בתמיסת מלח רגילה. בחולדות שטופלו בתאי גזע קסנצ'ימליים, זוהר נצפה בתוך קנה הנשימה ואזורי הריאות המרכזיים של בעלי חיים אלה. ואכן, בניתוח מייצג זה, כימות עוצמת האור גילה כי חולדות שטופלו בתאי גזע mesenchymal הציגו עלייה של כ 13 פי 13 בפעילות luminescence לעומת חולדות שטופלו מלוחים נורמליים.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לנתח ולבודד את קנה הנשימה מבלי להגביל את העורקים שמסביב. טכניקה זו מאפשרת לחקור את ההשפעות של ניהול תוך-אופן של תאים ותרופות של מחלת פאלמר יילודים באמצעות קרניים עם מצב של חולה אנושי.