משלוח תרופות מבוסס משאבה אוסמוטי למחקר רמיאלינציה In Vivo על מערכת העצבים המרכזית

משאבה אוסמוטית היא בעלת ערך רב למחקר של התחדשות המיאלין, במיוחד עבור תרופות אלה עם זמן מחצית חיים קצר, חדירות מחסום דם - מוח לקוי, ותופעות לוואי היקפיות שונות. משאבה אוסמוטית יכולה לעקוף את מחסום הדם - מוח ולספק תרופות ישירות לקורפוס קאלוזום, אשר משפר ביעילות את הזמינות הביולוגית של תרופות, במיוחד עבור תרופות מסוימות עם מחצית חיים קצרה. כדי להתחיל, אבטחו את ראשו של עכבר מורדם במנגנון הסטריאוטקסי עם מוט שיניים וחטיפי אוזניים.

לכסות את גוף החיה למעט האתר הכירורגי. באמצעות אזמל, לעשות חתך בינוני באורך סנטימטר אחד של העור מבסיס הצוואר אל בין העיניים כדי לחשוף את הגולגולת. באמצעות צמר גפן המכיל 30% מי חמצן, לנגב בעדינות את פני השטח של הגולגולת כדי לדמיין את המבנים הגולגולתיים.

התאימו את הגובה של מוט השיניים וחטיפי האוזן כדי למקם את נקודת למבדה ואת נקודת ברגמה באותו גובה. מניחים את הקצה של מחט מזרק של 10 מיקרוליטר ו-33 מד בעדינות בנקודת הברגמה, ומאפסים את הקואורדינטות X, Y ו- Z לאפס. העבר את המזרק לאתר ההזרקה.

לקדוח לאט חור בר קטן דרך הגולגולת באתר ההזרקה מבלי לחדור את הדורה עם מד מיקרוליטר אחד 26 ו 0.45 מ"מ מחט מזרק. הכנס באיטיות את מחט מזרק המיקרוליטר לרקמת המוח דרך החור עד להגעה לעומק מסוים. הזריקו 1.5 מיקרוליטרים של 1% ליזולציתין במהירות של 0.5 מיקרוליטרים לדקה.

המתן חמש דקות לפני הוצאת המזרק, ותפר את העור עם תפרים כירורגיים 5-0. מקם את העכבר שעבר ניתוח לבד בכלוב, ולפקח על העכבר מדי יום לאחר הניתוח. חבר שלושה מרווחי כוונון עומק למחט של צינורית עירוי המוח עם דבק רקמות כדי להשיג עומק הזרקה של 1.5 מילימטרים הקרוב לקאלוזום.

מלא את המשאבה האוסמוטית על ידי חיבור מחט המזרק עם חבילת משאבה למזרק מיליליטר אחד, ושאף את התרופה. החזק את המשאבה במצב זקוף. הכנס את המזרק לתוך הפתח בחלק העליון של המשאבה ולאט לאט להזריק את התרופה מבלי ליצור בועת אוויר.

מוציאים באיטיות את המזרק כשהנוזל זורם מהפתח. באמצעות מספריים או צבת, להסיר את האוגן הלבן מווסת הזרימה. הכנס את מנחה הזרימה למשאבה.

כדי לקבוע אם יש בועות במשאבה האוסמוטית, לשקול את המשאבה האוסמוטית בנפרד, לפני ואחרי מילוי. חותכים את הצנתר לאורך הנדרש בהתאם לגודל החיה. חבר את הצנתר לשלולית עירוי המוח.

מלא את הצנתר בסמים באמצעות המזרק מבלי להכניס אוויר. חבר את הצנתר למנחה הזרימה כך שהוא מכסה כארבעה מילימטרים של מנחה הזרימה החשוף. טבול את המשאבות הממולאות ב-0.9% מלוחים סטריליים או PBS ב-37 מעלות צלזיוס למשך ארבע עד שש שעות לפחות.

מעדיף להאריך לילה לאחר היישום. אבטחו שוב את העכברים במנגנון הסטריאוטקסי. פתחו את החתך הכירורגי שנתפר בעבר והרחיבו את החתך עד לשכמות הכתפיים.

להפריד את העור מרקמת החיבור התת עורית בעצם השכם, באמצעות צבת hemostatic או פינצטה כדי לפתוח חלל, ומניחים את המשאבה האוסמוטית לתוך החלל. עם צמר גפן, לנגב בעדינות ולחשוף את חור הסיכה על פני השטח של הגולגולת שנוצר בעת הקמת מודל demyelinisation. הכנס את צינורית עירוי המוח דרך חור הסיכה בניצב ואבטח אותה על הגולגולת עם דבק רקמות.

הסר את הכרטיסייה הנשלפת מעל צינורית עירוי המוח עם זוג מספריים. תפרו את החתך או חברו אותו עם דבק רקמות. מניחים את החיה בכלוב לבד לאחר הניתוח.

לאחר ביצוע יישום כתמי DAPI גילה כי חור הסיכה ברקמת המוח נמצא ממש מעל החומר הלבן, המציין יישום מוצלח של צינורית עירוי המוח של המשאבה האוסמוטית. ניסוי ההכלאה in situ בוצע עם סמן oligodendrocyte בוגר בדיקה MAG נעשה שימוש כדי לתייג אוליגודנדרוציטים מובחנים חדשים. התוצאות הראו כי הטיפול UM206 הניב יותר תאים חיוביים MAG באזור demyelinated מאשר קבוצת הביקורת.

מיקרוסקופ אלקטרונים שידור של האזור demyelinated הראה כי מספר האקסונים myelinated גדל בקבוצת הטיפול UM206 בהשוואה לקבוצת הביקורת, מה שמרמז כי UM206 גרם רמה גבוהה יותר של מיאליניזציה מחדש. בעת הכנת המשאבה האוסמוטית, להיזהר לא להכניס כל בועה לתוך המערכת.