Name: ב Vivo יישום של תיוג קירבה מבוסס TurboID ב-Drosophila melanogaster (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: למדו שיטת תיוג קירבה מבוססת TurboID לחקירת אינטראקציות חלבונים בזרעי Drosophila melanogaster. השיטה מאפשרת זיהוי אינטראקטורים חדשים ומיפוי מנגנונים מולקולריים בביולוגיה התפתחותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kim, D. I., Roux, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filling+the+void%3A+Proximity-based+labeling+of+proteins+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Trend+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Filling the void: Proximity-based labeling of proteins in living cells.</a> Trend Cell Biol. 26 (11), 804-817 (2016).</li>
<li>Mair, A., Xu, S. L., Branon, T. C., Ting, A. Y., Bergmann, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+labeling+of+protein+complexes+and+cell-type-specific+organellar+proteomes+in+Arabidopsis+enabled+by+turboid%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Proximity labeling of protein complexes and cell-type-specific organellar proteomes in Arabidopsis enabled by turboid.</a> eLife. 8, e47864(2019).</li>
<li>Qi, Y., Katagiri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+low-abundance+Arabidopsis+plasma-membrane+protein+complexes+and+identification+of+candidate+components%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Purification of low-abundance Arabidopsis plasma-membrane protein complexes and identification of candidate components.</a> Plant J. 57 (5), 932-944 (2009).</li>
<li>Branon, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+proximity+labeling+in+living+cells+and+organisms+with+turboid%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Efficient proximity labeling in living cells and organisms with turboid.</a> Nat Biotechnol. 36 (9), 880-887 (2018).</li>
<li>Rhee, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+mapping+of+mitochondria+in+living+cells+via+spatially+restricted+enzymatic+tagging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Proteomic mapping of mitochondria in living cells via spatially restricted enzymatic tagging.</a> Science. 339 (6125), 1328-1331 (2013).</li>
<li>Roux, K. J., Kim, D. I., Raida, M., Burke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+promiscuous+biotin+ligase+fusion+protein+identifies+proximal+and+interacting+proteins+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A promiscuous biotin ligase fusion protein identifies proximal and interacting proteins in mammalian cells.</a> J Cell Biol. 196 (6), 801-810 (2012).</li>
<li>Quantitative Proteomics. , 
 <a target="_blank" href="https://case.edu/medicine/nutrition/centers-and-collaborations/case-center-proteomics-and-bioinformatics/proteomics-and-small-molecule-mass-spectrometry-core/quantitative-proteomics">https://case.edu/medicine/nutrition/centers-and-collaborations/case-center-proteomics-and-bioinformatics/proteomics-and-small-molecule-mass-spectrometry-core/quantitative-proteomics</a> (2025).</li>
<li>Udeshi, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+to+biotin+enable+large-scale+detection+of+biotinylation+sites+on+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Antibodies to biotin enable large-scale detection of biotinylation sites on proteins.</a> Nat Meth. 14 (12), 1167-1170 (2017).</li>
<li>Ummethum, H., Hamperl, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+labeling+techniques+to+study+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">Proximity labeling techniques to study chromatin.</a> Front Genet. 11, 450(2020).</li>
<li>Han, S., Li, J., Ting, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity+labeling%3A+Spatially+resolved+proteomic+mapping+for+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Proximity labeling: Spatially resolved proteomic mapping for neurobiology.</a> Curr Opin Neurobiol. 50, 17-23 (2018).</li>
<li>Nishimasu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+zucchini+endoribonuclease+in+pirna+biogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure and function of zucchini endoribonuclease in pirna biogenesis.</a> Nature. 491 (7423), 284-287 (2012).</li>
<li>Zamudio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+methylation+restrains+transposons+from+adopting+a+chromatin+signature+permissive+for+meiotic+recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">DNA methylation restrains transposons from adopting a chromatin signature permissive for meiotic recombination.</a> Genes Dev. 29 (12), 1256-1270 (2015).</li>
<li>Cha, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+modulation+of+gsto+activity+rescues+fus-associated+neurotoxicity+via+deglutathionylation+in+als+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Therapeutic modulation of gsto activity rescues fus-associated neurotoxicity via deglutathionylation in als disease models.</a> Dev Cell. 57 (6), 783-798.e8 (2022).</li>
<li>Pulver, S. R., Berni, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fundamentals+of+flying%3A+Simple+and+inexpensive+strategies+for+employing+Drosophila+genetics+in+neuroscience+teaching+laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22J+Undergrad+Neurosci+Educ%22%5BJournal%5D)">The fundamentals of flying: Simple and inexpensive strategies for employing Drosophila genetics in neuroscience teaching laboratories.</a> J Undergrad Neurosci Educ. 11 (1), A139-A148 (2012).</li>
<li>Feizy, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+identification+of+Drosophila+rhodopsin+interaction+partners+by+biotin+proximity+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo identification of Drosophila rhodopsin interaction partners by biotin proximity labeling.</a> Sci Rep. 14 (1), 1986(1986).</li>
<li>Zhang, B., Zhang, Y., Liu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+effective+proximate+labeling+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Highly effective proximate labeling in Drosophila.</a> G3. 11 (5), jkab077(2021).</li>
<li>Hudson, A. M., Cooley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+oogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying oogenesis.</a> Methods. 68 (1), 207-217 (2014).</li>
<li>Waring, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+of+the+eggshells+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis of the eggshells in Drosophila.</a> Int Rev Cytol. 198, 67-108 (2000).</li>
<li>Weil, T. T., Parton, R. M., Davis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparing+individual+drosophila+egg+chambers+for+live+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparing individual drosophila egg chambers for live imaging.</a> J Vis Exp. (60), e3679(2012).</li>
<li>Nguyen, T. T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+profiling+of+the+zucchini+proximal+proteome+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">In vivo profiling of the zucchini proximal proteome in the Drosophila ovary.</a> Development. 150 (4), dev201220(2023).</li>
<li>Ahmadi, S., Winter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+poly%28ethylene+glycol%29+and+poly%28ethylene+glycol%29-based+detergents+using+peptide+search+engines%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Identification of poly(ethylene glycol) and poly(ethylene glycol)-based detergents using peptide search engines.</a> Anal Chem. 90 (11), 6594-6600 (2018).</li>
<li>Zada, A., Khan, I., Zhang, M., Cheng, Y., Hu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airid-based+proximity+labeling+for+protein-protein+interaction+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Airid-based proximity labeling for protein-protein interaction in plants.</a> J Vis Exp. (187), e64428(2022).</li>
<li>Fang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lowering+sample+requirements+to+study+tyrosine+kinase+signaling+using+phosphoproteomics+with+the+tmt+calibrator+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Lowering sample requirements to study tyrosine kinase signaling using phosphoproteomics with the tmt calibrator approach.</a> Proteomics. 20 (24), 2000116(2020).</li>
<li>Park, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-stage+tip+method+for+tmt-based+proteomic+analysis+of+a+minimal+amount+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Omega%22%5BJournal%5D)">One-stage tip method for tmt-based proteomic analysis of a minimal amount of cells.</a> ACS Omega. 8 (22), 19741-19751 (2023).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turboid-based+proximity+labeling+for+in+planta+identification+of+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Turboid-based proximity labeling for in planta identification of protein-protein interaction networks.</a> J Vis Exp. (159), e60728(2020).</li>
<li>Trinkle-Mulcahy, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+proximity-based+labeling+methods+for+interactome+mapping%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Res%22%5BJournal%5D)">Recent advances in proximity-based labeling methods for interactome mapping.</a> F1000Res. 8, Faculty Rev-135 F1000(2019).</li>
<li>Wei, X. F., Li, S., Hu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+turboid-based+proximity+labelling+approach+for+identifying+the+DNA-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A turboid-based proximity labelling approach for identifying the DNA-binding proteins.</a> STAR Protoc. 4 (1), 102139(2023).</li>
<li>Bosch, J. A., Chen, C. L., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proximity-dependent+labeling+methods+for+proteomic+profiling+in+living+cells%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22WIREs+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Proximity-dependent labeling methods for proteomic profiling in living cells: An update.</a> WIREs Dev Biol. 10 (1), e392(2021).</li>
<li>Rayaprolu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+type-specific+biotin+labeling+in+vivo+resolves+regional+neuronal+and+astrocyte+proteomic+differences+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cell type-specific biotin labeling in vivo resolves regional neuronal and astrocyte proteomic differences in mouse brain.</a> Nat Commun. 13, 2927(2022).</li>
<li>Uckun, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+profiling+of+the+alk+proximitome+in+the+developing+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo profiling of the alk proximitome in the developing Drosophila brain.</a> J Mol Biol. 433 (23), 167282(2021).</li>
<li>Xiong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+proteomic+mapping+through+gfp-directed+proximity-dependent+biotin+labelling+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">In vivo proteomic mapping through gfp-directed proximity-dependent biotin labelling in zebrafish.</a> Elife. 10, e64631(2021).</li>
<li>Holzer, E., Rumpf-Kienzl, C., Falk, S., Dammermann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+turboid+approach+identifies+tissue-specific+centriolar+components+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">A modified turboid approach identifies tissue-specific centriolar components in C. elegans.</a> PLoS Genet. 18 (4), e1010150(2022).</li>
<li>Artan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactome+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+synapses+by+turboid-based+proximity+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interactome analysis of Caenorhabditis elegans synapses by turboid-based proximity labeling.</a> J Biol Chem. 297 (3), 101094(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turboid-based+proximity+labeling+reveals+that+ubr7+is+a+regulator+of+n+nlr+immune+receptor-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Turboid-based proximity labeling reveals that ubr7 is a regulator of n nlr immune receptor-mediated immunity.</a> Nat Comm. 10 (1), 3252(2019).</li>
<li>Baumgartner, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+zad+zinc+finger+protein+kipferl+guides+rhino+to+pirna+clusters%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">The Drosophila zad zinc finger protein kipferl guides rhino to pirna clusters.</a> eLife. 11, e80067(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>נוגדן משני <חזק>נוגדנים</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>עז נגד עכברים IgG (H+L), HRP</td><td>Invitrogen</td><td>31430</td><td>בדרגה אנליטית,</td></tr><tr><td>נוגדן משני IgG (H+L) רגיש לאור נגד ארנב עזים (H+L) בעל ספיחה צולבת גבוהה, alexa fluor plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32731</td><td>כיתה אנליטית,</td></tr><tr><td>נוגדן משני IgG (H+L) רגיש לאור נגד ארנב עזיםHRP</td><td>Invitrogen</td><td>31460</td><td>דרגה אנליטית,</td></tr><tr><td>נוגדן HSP90 רגיש לאור (ארנב)</td><td>טכנולוגיית איתות תאים</td><td>4874</td><td>נוגדן פוליקלונלי</td></tr><tr><td>חלבון פירס סטרפטווידין, HRP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21126</td><td>סטרפטווידין בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td>, Alexa Fluor 594 מצומד</td><td>Invitrogen</td><td>S11227</td><td>רגיש לאור, דרגה</td></tr> <tr><td>אנליטיתנוגדן V5 תג (עכבר)</td><td>Invitrogen</td><td>R960-25</td><td>נוגדן חד-שבטי</td></tr><tr><td>V5-tag (ארנב) (D3H8Q)</td><td>טכנולוגיית איתות תאים</td><td>13202</td><td>נוגדן חד-שבטי</td></tr><tr><td><חזק>קווי זבוב</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td><חזק>מספר קטלוגי</חזק></td><td><חזק>הערות/תיאור</חזק></td></tr><tr><td>pUASp Tom20 V5-TurboID/ TM3</td><td>קוריאה מרכז מניות דרוזופילה</td><td>2373-2</td><td>סטוק זבוב</td></tr><tr><td>pUASp קישואים V5-TurboID/Cyo</td><td>קוריאה מרכז מניות דרוזופילה</td><td>2188</td><td>סטוק זבוב</td></tr><tr><td>pUASP_attB_V5-TurboID-NES/Cyo</td><td>קוריאה מרכז מניות דרוזופילה</td><td>2635-4</td><td>מלאי זבוב</td></tr><tr><td>עם [*]; P{w[+mC]=matalpha4-GAL-VP16}V2H</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center</td><td>7062</td><td>Fly stock</td></tr><tr><td>Equipments and Consummables</td><td>Company</td><td>Catalog Number</td><td>Comments/Description</td></tr><tr><td>Analytical Balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>ME204</td><td>0.1 מ"ג קריאות</td></tr><tr><td>אמרשם פרוטראן 0.45 NC ניטרוצלולוז ממברנות ספיגה מערביות (300 מ"מ ופעמים; 4 מ')</td> <td>Cytiva</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>10600002-Axygen 1.7 מ"ל MaxyClear Snaplock צינור מיקרוצנטריפוגה</td><td>קורנינג</td><td>MCT-175-C</td><td>קו-פולימר</td></tr><tr><td>מותג&nbsp; כיסוי זכוכית (22 מ"מ x 22 מ"מ)</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>BR470055</td><td>זכוכית בורוסיליקט</td></tr><tr><td>קצות פיפטה בתפזורת (10 ומיקרו; L)</td> <td>Vertex</td><td>4110N00</td><td>קצות</td></tr><tr><td>פיפטה בתפזורת פרופילן (1000 ומיקרו; L)</td> <td>Vertex</td><td>4330N00</td><td>קצות</td></tr><tr><td>פיפטה בתפזורת פרופילן (200 ומיקרו; L)</td> <td>Vertex</td><td>4230N00</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאי פרופילן (96 בארות)</td> <td>SPL</td><td>300096</td><td>פוליסטירן, צנטריפוגה מסוג תחתית שטוחה</td></tr><tr><td>(עם רוטור בגודל צינור של 1.5-2 מ"ל)</td> <td>Eppendorf</td><td>5424 R</td> צנטריפוגה <td>מקוררת בזווית קבועה</td></tr><tr><td>(עם רוטור בגודל צינור של 5 מ"ל)</td> <td>Eppendorf</td><td>5425 R</td><td>כף כימית בזווית קבועה, בקירור</td></tr> <tr><td></td><td>-</td><td>- </td><td></td></tr><tr><td>מערכת הדמיה ChemiDoc</td> מנירוסטה <td>מערכת הדמיה</td><td>Biorad</td><td>12003153</td> Western blot</tr><tr><td>< COsub>2 משטח זבוב</td> <td>-</td><td></td> <td>לוח הרדמה</td></tr><tr><td>CO2 מיכל ווסת</td> <td>-</td><td></td> <td>זהירות מפני גז בלחץ גבוה וסחרחורת</td></tr><tr><td>חממה קומפקטית</td><td>JSR</td><td>JSGI-10T</td><td>זהירות גבוהה טמפרטורה</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי</td><td>Zeiss</td><td>LSM 710</td><td>זהירות של קרן לייזר אינטנסיבית</td></tr><tr><td>צינור חרוטי (15 מ"ל)</td> <td>SPL</td><td>50015</td><td>פוליפרופילן / פוליאתילן בצפיפות גבוהה&nbsp;</td></tr><tr><td>צינור חרוטי (50 מ"ל)</td><td>SPL</td><td>50050</td><td>פוליפרופילן / פוליאתילן בצפיפות גבוהה&nbsp;</td></tr><tr><td>איזון דיגיטלי</td> <td>-</td><td>--</td><td></td></tr> <tr><td>טיימר דיגיטלי</td> <td>-</td><td></td><td>--</td></tr> <tr><td>צלחת דיסקציה</td> <td>-</td><td>-Silicon</td><td></td></tr> <tr><td>Dumont #5SF מלקחיים&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td>טיפים סופר עדינים, זהירות של חפץ חד</td></tr><tr><td>מגנט DynaMag-2</td><td>Invitrogen</td><td>12321D</td><td>עבור צינורות מיקרוצנטריפוגה בגודל 1.5-2 מ"ל</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; שקופיות מיקרוסקופ Superfrost Plus (25 מ"מ x 75 מ"מ)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td>זהירות מחפץ חד</td></tr><tr><td>בקבוקי מזון זבובים (עם תקע נייר)</td><td>Hansol Tech</td><td>FFB-21010-בקבוקוני</td><td></td></tr> <tr><td>מזון זבובים (עם כובע כותנה)</td><td>Hansol Tech</td><td>FFV-11010-ממוקד-אולטרה-סאונד</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Covaris</td><td>M220</td><td>זהירות של גל קולי</td></tr><tr><td>סכין ג'ל</td><td>Invitrogen</td><td>EI9010</td><td>נירוסטה עם ידית פלסטיק</td></tr><tr><td>כיתה 3 מ"מ נייר ספיגה Chr (46 ס"מ ופעמים; 57 ס"מ)</td> <td>Cytiva</td><td>3030-917</td><td>נייר Whatmann</td></tr><tr><td>הומוגנייזר כף יד ועלי פלסטיק</td><td>Kimble</td><td>749540-0000</td><td>מנוע אלחוטי</td></tr><tr><td>בלוק חום</td><td>עדין PCR</td><td>ALB6400</td><td>זהירות של</td></tr><tr><td>רקמות נטולות מוך</td> בטמפרטורה גבוהה <td>Yuhan-Kimberly</td><td>41112</td><td>- </td></tr><tr><td>חנקן נוזלי</td> <td>-</td><td></td> <td>זהירות מפני כוויות קור וכוויות</td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר מיקרופלייט</td><td>טכנולוגיות Agilent</td><td></td><td>אופטיקה מבוססת מונוכרומטור</td></tr><tr><td>מיקרוגל</td> <td>-</td><td></td> <td>זהירות של טמפרטורה גבוהה</td></tr><tr><td>milliTUBE 1 מ"ל סיב AFA</td><td>Covaris</td><td>PN 520135</td><td>זכוכית</td></tr><tr><td>מיני מיכל ג'ל</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>A25977</td><td>זהירות לגבי</td></tr><tr><td>ג'ל חלבון מיני NuPAGE Bis-tris בטמפרטורה גבוהה, 4&ndash; 12%, 1.0&ndash; 1.5 מ"מ, 10 בארות</td><td>Invitrogen</td><td>NP0323BOX</td><td>מכילים פוליאקרילאמיד, זהירות מפני רעילות</td></tr><tr><td>NuPAGE Bis-tris מיני ג'ל חלבון, 4&ndash; 12%, 1.0&ndash; 1.5 מ"מ, 15 בארות</td><td>Invitrogen</td><td>NP0321BOX</td><td>מכילים פוליאקרילאמיד, זהירות מרעילות</td></tr><tr><td>מברשת צבע (&Oslash; 1.8 מ"מ) מברשת צבע</td><td></td> <td>791240-Pipetman</td><td></td></tr> <tr><td>L (P1000L)</td><td>Gilson</td><td>FA10006M</td><td>מיקרופיפטה חד ערוצית עם מפלט מתכת</td></tr><tr><td>Pipetman L (P200L)</td><td>Gilson</td><td>FA10005M</td><td>מיקרופיפטה חד ערוצית עם מפלט מתכת</td></tr><tr><td>Pipetman L ( P20L)</td> <td>גילסון</td><td>FA10003M</td><td>מיקרופיפטה חד ערוצית עם מפלט מתכת</td></tr><tr><td>Pipetman L (P2L)</td> <td>גילסון</td><td>FA10001M</td><td>מיקרופיפטה חד ערוצית עם מפלט מתכת</td></tr><tr><td>ספק כוח</td><td>מדע עיקרי</td><td>MP-310</td><td>זהירות של חשמל במתח גבוה</td></tr><tr><td>מסובב לתכנות</td><td>Biosan</td><td>RS-24-Protein</td><td></td></tr> <tr><td>LoBind&nbsp; צינורות</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>30108302-סכין גילוח</td><td>Dorco</td><td>304020</td><td>נירוסטה, זהירות מחפץ חד</td></tr><tr><td>רולר</td> <td>-</td><td>--</td><td></td></tr> <tr><td>פיפטה סרולוגית (10 מ"ל)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td>פיפטה סרולוגית מפוליסטירן</td></tr><tr><td>(25 מ"ל)</td><td>SPL</td><td>91025</td><td>פיפטה סרולוגית מפוליסטירן</td></tr><tr><td>(5 מ"ל)</td><td>SPL</td><td>91005</td><td>פיפטה סרולוגית מפוליסטירן</td></tr><tr><td>(50 מ"ל)</td><td>SPL</td><td>91050</td><td>פוליסטירן</td></tr><tr><td>כובע הצמד צינורות מיקרוצנטריפוגה עם שמירה נמוכה (1.5 מ"ל)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451PK</td><td></td></tr><tr><td>כרית ספוג</td> פוליפרופילן <td>Invitrogen</td><td>EI9052-מיקרוסקופ</td><td></td></tr> <tr><td>סטריאו</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 508-מיקרוסקופ</td><td></td></tr> <tr><td>סטריאו&nbsp;</td><td>לייקה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תרמו-מיקסר &nbsp; C</td><td>Eppendorf</td><td>5382000015</td><td>עם בלוקים בגודל 1.5 ו-5 מ"ל</td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>Aven Tools</td><td>18526</td><td>פלסטיק, קצות שטוחים</td></tr><tr><td>מערבל מערבולת</td> Scientific <td>Industries</td><td>SI-0236-XCell</td><td></td></tr> <tr><td>II מודול כתם</td><td>Invitrogen</td><td>EI9051</td><td>זהירות בטמפרטורה גבוהה</td></tr><tr><td>XCell&nbsp; SureLock mini-cell</td><td>Invitrogen</td><td>EI0001</td><td>זהירות מפני טמפרטורה גבוהה</td></tr><tr><td><חזק>כימיקלים</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td><חזק>מספר קטלוגי</חזק></td><td><חזק>הערות/תיאור</חזק></td></tr><tr><td>אצטון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td></td><td>650501 בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td>אצטוניטריל</td><td>סופלקו</td><td>1.00029.1000</td><td>דרגת LC-MS, זהירות מפני רעילות אינהלציה</td></tr><tr><td>ואמפולות סטנדרטיות של אלבומין דליקות (המכילות אלבומין בסרום בקר (BSA) ב-2 מ"ג/מ"ל ב-0.9% מי מלח ו-0.05% נתרן אזיד)</td><td>Thermo Scientific</td><td>23209</td><td>חלק מערכות בדיקת חלבון BCA של פירס (Thermo Scientific, 23225)</td></tr><tr><td>אלבומין, סרום בקר</td><td>Bioshop</td><td>ALB001</td><td>דרגה אנליטית</td></tr><tr><td>אמוניום ביקרבונט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>09830</td><td>ביוטין בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4639</td><td>סידן כלורי בדרגת תרבית תאים ורקמות</td></tr><tr><td>(CaCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td>בדרגת תרבית תאים</td></tr><tr><td>בהירות מצע ECL מערבי</td><td>Biorad</td><td>1705060</td><td>דרגה אנליטית</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MBD0015</td><td>רגיש לאור, בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0861</td> סרום בקר עוברי <td>בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td></td><td>קורנינג</td><td>35-015-CV</td><td>דרגת תרבית תאים</td></tr><tr><td>חומצה פורמית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0507</td><td>דרגת ריאגנט, זהירות מפני רעילות שאיפה</td></tr><tr><td>מדיום החרקים של גרייס</td><td>Gibco</td><td>11595030</td><td>כיתה תרבית תאים שמרים</td></tr><tr><td>יבשים מיידיים</td><td>ללא מותג</td><td>N1019</td><td>-</td></tr><tr><td>יודואצטמיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>I1149</td><td>רגיש לאור,</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>קרלו ארבה</td><td>41484</td><td>לק בדרגה אנליטית</td></tr> <tr><td></td><td>-</td><td></td> <td>מאגר</td></tr><tr><td>דגימה מסוג נובקס טריס-גליצין SDS מסוג שקוף (2X)</td><td>Invitrogen</td><td>LC2676</td> מאגר ריצה NuPAGE MOPS SDS <td>בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td>(20X)</td><td>Invitrogen</td><td>NP0001</td><td>כיתה אנליטית</td></tr><tr><td>PageRuler סולם חלבון צבוע מראש</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26616</td><td>כיתה אנליטית</td></tr><tr><td>Phenylmethanesulfonyl fluoride&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36978</td><td>מאגר פוספט בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td>דרגה אנליטית</td></tr><tr><td>פירס 16% פורמלדהיד (w/v)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>כיתה אנליטית,</td></tr><tr><td>ערכות בדיקת חלבון Pierce BCA רגישות לאור</td><td>Thermo Scientific</td><td>23225</td><td>כיתה</td></tr> <tr><td>אנליטיתמגיב BCA פירס A (מכיל נתרן פחמתי, סודיום ביקרבונט, חומצה ביצינצ'ונינית ונתרן טרטרט ב-0.1 M נתרן הידרוקסיד)</td><td>Thermo Scientific</td><td>23228</td><td>חלק מערכות בדיקת חלבון BCA של פירס (Thermo Scientific, 23225)</td></tr><tr><td>מגיב BCA פירס B (מכיל 4% סולפט קופרי</td>)<td>Thermo Scientific</td><td>1859078</td><td>חלק מערכות בדיקת חלבון BCA של פירס (Thermo Scientific, 23225)</td></tr><tr><td>חומצה פרופיונית</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>סט</td> קוקטייל <td>מעכב פרוטאז בדרגת 402907 ACS</td></tr> III <tr><td></td><td>Calbiochem</td><td>539134</td><td>תרבית תאים ורקמות בדרגת</td></tr><tr><td>SlowFade Gold Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>S36936</td> נתרן <td>כלורי רגיש לאור</td></tr><tr><td>(NaCl)</td> <td>Bioneer</td><td>C-9025</td> נתרן דאוקסיכולט <td>בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td>כיתה אנליטית</td></tr><tr><td>נתרן דודציל סולפט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71736</td><td></td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד (NaOH)</td> בדרגה מולקולרית <td>Biosesang</td><td>SR2018-100-00</td> מים מזוקקים משולשים <td>בדרגה אנליטית</td></tr> <tr><td></td><td>-</td><td></td> <td>Ultrapure (סוג 1)</td></tr> <tr><td>Tris-buffered מלח</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>94158</td> מאגר העברת טריס-גליצין <td>בדרגה אנליטית</td></tr><tr><td></td><td>Koma Biotech</td><td>K0341001</td><td>ציון אנליטי</td></tr><tr><td>Tris-HCl, pH 8</td><td>Bioneer</td><td>C-9006</td><td>כיתה אנליטית</td></tr><tr><td>Triton x-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93443</td><td>כיתה מולקולרית</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>20233</td><td>כיתה תרבית תאים</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>דרגה מולקולרית</td></tr><tr><td>אוריאה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>U5378</td><td>מולקולרי & דרגת תרבית תאים</td></tr></tbody></table>

ב vivo יישום של תיוג קירבה מבוסס turboid ב-drosophila melanogaster

In Vivo Application of TurboID-based Proximity Labeling in Drosophila melanogaster

תפוקות לדוגמה מתוארות באיור 1, איור 2, איור 3, איור 4 פורסמו בעבר על ידי Nguyen et al.20. איור 1 ממחיש את ההליך הניסיוני של PL מבוסס TurboID בשחלות דרוזופילה . ראשית, נוצר מבנה המשלב Zuc ו-TurboID (Zuc-V5-TurboID). תושבים תת-אברונים ידועים ומובחנים, כלומר אות ייצוא גרעיני (NES) וממברנה מיטוכונדריאלית חיצונית ...

ב Vivo יישום של תיוג קירבה מבוסס TurboID ב-Drosophila melanogaster

Proximity labeling (PL) is a powerful method for mapping protein-protein interaction networks. Advances in labeling enzymes, especially TurboID, have ...

in-vivo-application-turboid-based-proximity-labeling-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מתאר את השימוש microinjection הדמיה ברזולוציה גבוהה...

Microinjection טכניקות לימוד מיטוזה ב תסיסנית melanogaster סינסיציאלי עובריים

Mesoscopic הקרינה טומוגרפיה פועלת מעבר לגבולות חדירה של מיקרוסקופיה רקמות חתך פלואורסצנטי. הטכניקה מבוססת על תאורה השלכה רב ותיאור תחבורה פוטון. אנו להדגים ב-vivo כל הגוף 3D להדמיה של המורפוגנזה ה-GFP-לבטא דיסקים דמותי האגף...

Mesoscopic Fluorescence טומוגרפיה עבור In-vivo הדמיה של פיתוח תסיסנית</em

Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.

הדמיה חיה של תסיסנית melanogaster Hemocyte נדידות עובריים

פרוטוקול זה מתאר שיטה אמינה הרדמה והדמיה של...

בתחום ההדמיה vivo של הזחלים תסיסנית אינטקט ברזולוציה משנה הסלולר

אנו מציגים טכניקה לסימון תאי עצב בודדים במערכת העצבים המרכזית (CNS)...

תיוג של תאים בודדים במערכת העצבים המרכזית של<em&gt; דרוזופילה melanogaster</em

מסמך זה מדגים את השימוש במיקרוסקופ confocal סריקה מהירה לתמונת התנהגות תא ישירות דרך הגולם. מאת עוזב את המקרה גלמי שלם, שיטה זו מאפשרת תצפית ומדידה של תהליכים בתא דינמיים בשלב של פיתוח דרוזופילה שקשה ללמוד באופן ישיר.

הדמיה באמצעות המקרה גלמי של<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מציג שיטה יעילה להדמיה של נוירואפיתל עין גולם חי של דרוזופילה. שיטה זו מפצה על תנועת רקמות וטופולוגיה לא אחידה, משפרת את ההדמיה של גבולות התא באמצעות שימוש בחלבוני צומת מרובים המתויגים ב-GFP, ומשתמשת במתקן הדמיה המורכב בקלות.

Live-הדמיה של דרוזופילה גלמי עין

המתואר RNA בחיי עיר הכלאה פרוטוקול מאפשרת הגילוי של RNA כל עוברי דרוזופילה או רקמות גזור. באמצעות לוחות 96-ובכן microtiter tyramide אות הגברה, תעתיקים שניתן לאתר ברזולוציה גבוהה, רגישות, ואת התפוקה, בעלות נמוכה יחסית.

ברזולוציה גבוהה פלורסנט בחיי עיר הכלאה של עוברי דרוזופילה ורקמות באמצעות הגברה Tyramide אות

כאן אנחנו מדגימים כיצד מולקולה בודדת לוקליזציה מופעל צילום מיקרוסקופ יכול להתבצע על הטרמינל עצבים מוטוריים של חיים דרוזופילה melanogaster השלישי instar זחל.

אין ויוו מעקב אחר בתחנת האוטובוסים Presynaptic עצבים מוטוריים דרוזופילה מולקולה בודדת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור ויזואליזציה, זיהוי, ניתוח ומעקב של סחר האנטי-מסוגגני mRNA בחיים Drosophila ילה מלאנוסטר תא ביצה באמצעות משואות מולקולריות, מיקרוסקופיה דיסק מסתובב, וניתוח קוד פתוח תוכנה.

חזותי ומעקב אחר mRNAs בשידור חי דרוזוסופילה מלאנוגסטר צ'יימברס

בעובר דרוזופילה המוקדם, אברונים רבים הם תנועתיים. באופן עקרוני, ניתן לדמות אותם בשידור חי באמצעות בדיקות פלואורסצנטיות ספציפיות, אך קליפת הביצית מונעת יישום ישיר על העובר. פרוטוקול זה מתאר כיצד להציג בדיקות כאלה באמצעות מיקרו-איניג'קציה, ולאחר מכן לנתח תנועת אברונים בתפזורת באמצעות ולוסימטריה של תמונת חלקיקים.

הדמיה של סחר תלוי-שלד ציטוסקלטון של אברונים המכילים שומנים בעוברי דרוזופילה

למדו שיטת תיוג קירבה מבוססת TurboID לחקירת אינטראקציות חלבונים בזרעי Drosophila melanogaster. השיטה מאפשרת זיהוי אינטראקטורים חדשים ומיפוי מנגנונים מולקולריים בביולוגיה התפתחותית.

ב Vivo יישום של תיוג קירבה מבוסס TurboID ב-Drosophila melanogaster

גלה סרטונים נוספים