Name: Cultura primario di miociti adulti Cuore Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-16T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: Impara a isolare e coltivare miociti cardiaci adulti di ratto usando collagenasi e proteasi. Questo protocollo garantisce cellule vitali per studi di fisiologia cardiovascolare e biologia cellulare.

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Parte I. Preparazione per la chirurgia <ol><li> Il giorno prima della chirurgia ratto, accertarsi che tutte le soluzioni sono fatti, ma non aggiungere alcun enzimi ancora. Buffer A, B e il tampone di lavaggio dovrebbero essere filtrate per la sterilità prima di stoccaggio. I tamponi dovrebbero essere conservato a 4 ° C. </li><li> 6-pozzetti colture di tessuti deve essere placcato con 10-20 mg / mL laminina in 2 ml 1XSFM il giorno prima come bene, e deve essere conservato a 37 ° C in un incubatore CO 2. </li><li> Il giorno della chirurgia, preparare gli strumenti chirurgici mediante sterilizzazione la pinza, forbici, pinze e con il 70% di etanolo e lasciarle asciugare su carta assorbente. </li><li> Una siringa da 1 ml riempita con 0,5 ml di soluzione di eparina (90 U / ml) è pronto. </li><li> Ora è buona norma lavare l&#39;apparato perfusione eseguendo attraverso 70% di etanolo, utilizzando la pompa peristaltica in senso inverso. Una volta finito il risciacquo con etanolo, sciacquare l&#39;apparato con il doppio di acqua distillata, ed infine risciacquare con tampone A. Il flusso attraverso viene raccolta in un bicchiere posto in una vasca d&#39;acqua a 37 ° C. </li><li> Per preparare l&#39;apparato perfusione puliti, riempire il tubo diritto siringa con 40 ml di tampone A e il tubo di sinistra siringa con 40 ml di tampone B. </li><li> Primo il tubo perfusione alla punta del catetere, consentendo tampone A a fluire attraverso l&#39;apparecchio. Ricarica al buffer una siringa al livello 40 ml. Assicurarsi che non vi siano bolle d&#39;aria intrappolate nel tubo dopo questo passaggio. </li><li> Ora, chiudere il buffer di una valvola di rubinetto siringa e ripetere il processo con tampone B tale che il tubo di perfusione è ora vaccinati con tampone B. </li><li> Infine, l&#39;apparato di perfusione è lasciato con la B Buffer rubinetto valvola aperta, ma con il flusso smesso di utilizzare il regolatore sulla linea IV. </li><li> Scartare il tampone di flusso, anche se nel bicchiere di raccolta. </li><li> L&#39;ultima cosa da fare prima della chirurgia è quello di aggiungere gli enzimi necessari per la soluzione stock, e quindi filtrare la soluzione enzimatica così come le altre soluzioni sono state filtrate il giorno prima. Una volta filtrata, questa soluzione può essere lasciato a temperatura ambiente. </li></ol> Parte II. The Rat dissezione cuore <ol><li> A seguito di protocollo standard eutanasia il topo con isoflurano in una camera a gas. </li><li> Sterilizzare l&#39;area incisione sul torace con il 70% di etanolo. </li><li> Torace aperto con le forbici e esporre il cuore. </li><li> Iniettare ventricolo sinistro con 0,5 mL di soluzione di eparina (90 U / mL). </li><li> Rimuovere il cuore con grande porzione di aorta intatto, posto a freddo Buffer ghiaccio B. </li></ol> Parte III. Miociti isolamento <ol><li> Un cuore di ratto tipico dovrebbe produrre una frazione alta a forma di bastoncello miociti (al contrario di cellule morte arrotondate) se la seguente procedura è correttamente rispettato. </li><li> Per iniziare, morsetto aorta al catetere. La punta del catetere non deve essere spinta troppo in là nel cuore di assicurare una buona perfusione del cuore attraverso l&#39;arteria coronaria. </li><li> Una volta bloccato, legare l&#39;aorta al catetere con una sutura. </li><li> Quindi, aprire il regolatore linea IV per consentire un ritmo veloce a goccia (~ 60 gocce / min) e permettere B tampone per lavare il cuore. </li><li> Durante il lavaggio tampone B, utilizzare le forbici piccole e pinze per rimuovere gli atri e qualsiasi tessuto adiposo o del polmone aggrappati al cuore. </li><li> Dopo tampone B è finito, passare il flusso di tampone A. </li><li> Mentre tampone A è permesso flusso per 5 minuti, alcuni piccoli compiti dovrebbero essere rapidamente eseguita. </li><li> In primo luogo, scaldare la soluzione enzimatica in un bagno d&#39;acqua a 37 ° C. </li><li> Infine, quando tampone A è esaurita dalla siringa (ma ancora presente nel tubo), carico di 50 ml di soluzione enzimatica in siringa Un dell&#39;apparato perfusione </li><li> Ora è necessario eliminare tutti i flow-through dal bicchiere raccolta nel bagno d&#39;acqua (pipettando), fino a quando la soluzione enzimatica cuore perfusione. </li><li> Non appena la soluzione enzimatica perfusione del cuore, attivare la pompa peristaltica che è impostato per trasferire la soluzione enzimatica dal bicchiere di raccolta per reintegrare siringa A. </li><li> Lasciare che la soluzione enzimatica a fluire attraverso il cuore per 10 min. Come il cuore digerisce, comincia a guardare gonfio. </li><li> Aggiungere 37,5 ml di 0,1 M CaCl 2 alla soluzione enzimatica in una siringa per dare un&#39;efficace concentrazione di 0,1 mM Ca 2 +. </li><li> Dopo 10 minuti aumentare la concentrazione di calcio a 0,2 mm con l&#39;aggiunta di un ulteriore 50 ml di 0,1 M CaCl 2 a siringa A e lasciare che la perfusione proseguire per altri 10 minuti. </li><li> Tagliare i ventricoli e trasferimento in un piccolo becher sterile contenente 20 ml di soluzione enzimatica. </li><li> Nel becher aumentare la concentrazione di calcio a 0,4 mm con l&#39;aggiunta di 40 microlitri di più di 0,1 M CaCl 2. </li><li> Tritate dolcemente il cuore in 10 o più pezzi con un paio di piccole forbici sterili. </li><li> Incubare il bicchiere per 5 minuti a 37 ° C con dolce dondolio. </li><li> Aggiungere 40 ml di 0,1 M CaCl 2 adare effettiva concentrazione di 0,6 mM Ca 2 + e delicatamente triturare i pezzi del cuore con una pipetta di plastica trasferimento 3-5 volte. </li><li> Dopo l&#39;incubazione per altri 5 minuti a 37 ° C, aggiungere 40 ml di 0,1 M CaCl 2 e delicatamente triturare come prima. </li><li> Separare miociti digerito singolo non digerito tessuto connettivo con filtrazione attraverso una sterile 500 mesh micron. </li><li> Permettono alle cellule di stabilirsi in un tubo da 50 ml per 10 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Gettare il surnatante con una pipetta di trasferimento. </li><li> Risospendere delicatamente le cellule in soluzione di lavaggio # 1 e permettono alle cellule di accontentarsi di 10-20 minuti a temperatura ambiente. </li><li> Mentre le cellule si stanno stabilendo, prendere una piccola aliquota, e utilizzare questo tempo come occasione per valutare la qualità e la vitalità delle cellule in sospensione sotto un microscopio invertito. Una buona preparazione avrà una percentuale elevata (&gt; 80%) di asta come le cellule con striature croccante. </li><li> Una volta che le cellule si sono stabiliti, eliminare le cellule surnatante e risospendere delicatamente in soluzione di lavaggio # 2. Lasciate che le cellule stabilirsi a temperatura ambiente, che deve ancora prendere 10-20 minuti, e scartare il surnatante. </li><li> Ripetere il processo di lavaggio ancora una volta con tampone di lavaggio # 3, e le celle saranno pronti per la cultura. </li></ol> Parte IV. Coltura cellulare miociti <ol><li> Risospendere delicatamente le cellule in media il 5% del siero. Prima di trasferire le cellule a piastre di coltura di tessuto, lavare i piatti con 1x SFM. Trasferire le cellule ad una densità desiderata e incubare in un CO 2 di coltura tissutale incubatore per 3-5 ore. </li><li> Passa i media a 1x SFM. </li><li> Cellule possono essere coltivate per un massimo di quattro giorni e utilizzati come richiesto per gli esperimenti. </li></ol> Parte V. Rappresentante Risultati / Esito Ci dovrebbe essere oltre il 70% miociti cuore vivono sotto microscopio invertito quando il protocollo è fatto correttamente. <img src="/files/ftp_upload/1308/fig1.jpg" alt="figura 1" /> Tabella 1: Ricetta Soluzione per 1 L 10X Ca 2 + senza Buffer KH: <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td></td><td> massa </td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 68,96 g </td><td> 1180 mm </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 3,58 g </td><td> 48 mm </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 59,58 g </td><td> 250 mm </td></tr><tr><td> K 2 HPO 4 </td><td> 2,85 g </td><td> 12,5 mm </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> 3,08 g </td><td> 12,5 mm </td></tr></tbody></table> Tabella 2: Ricetta Soluzione tampone per 1 L A: Aggiungere 1,98 g di glucosio a 100 ml di buffer 10X KH e portare a volume finale di 1 L. Regolare osmolarità a condizione fisiologia vicino (~ 300) con glucosio. Portare a pH 7,4 con NaOH. <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> - </td><td> Massa </td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> KH Buffer 10X </td><td> 100 ml </td><td> 100 ml </td></tr><tr><td> Glucosio </td><td> 1,98 g </td><td> 11 mm </td></tr><tr><td> Portare a 1 L </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Portare a pH 7,4 con NaOH </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"> Regolare osmolarità quasi a condizione fisiologica (~ 300) con glucosio. </td></tr></tbody></table> Tabella 3: Ricetta Soluzione tampone enzimatico <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td></td><td> massa </td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> Collagenasi di tipo II </td><td> 25 mg </td><td> 0,05% (w / v) </td></tr><tr><td> Proteasi XIV </td><td> 10 mg </td><td> 0,02% (w / v) </td></tr><tr><td> BDM </td><td> 0,025 g </td><td> 5 mM </td></tr><tr><td> Carnitina </td><td> 0,020 g </td><td> 2 mM </td></tr><tr><td> La taurina </td><td> 0,031 g </td><td> 5 mM </td></tr><tr><td> Acido glutammico </td><td> 0,020 g </td><td> 2 mM </td></tr><tr><td> 0,1 M CaCl 2 </td><td> 12,5 uL </td><td> 25 uM </td></tr><tr><td> Tampone A </td><td></td><td> Riempire a 50 ml </td></tr></tbody></table> Tabella 4: Ricetta soluzione per 25X BDM / Taurina / BSA (B / T / B) <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td></td><td> massa </td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> BDM </td><td> 0,076 g </td><td> 125 mM </td></tr><tr><td> La taurina </td><td> 0,094 g </td><td> 125 mM </td></tr><tr><td> BSA </td><td></td><td> 0,1% (w / v) </td></tr><tr><td> Tampone A </td><td></td><td> Riempire a 6 ml </td></tr></tbody></table> Tabella 5: ricetta per la soluzione tampone B e tamponi di lavaggio <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> Buffer: </td><td> B </td><td> # 1 </td><td> # 2 </td><td> # 3 </td></tr><tr><td> Aggiungere: </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0,5 M CaCl 2 </td><td> 0,4 mL </td><td> 0,1 mL </td><td> 0,125 ml </td><td> 0,15 ml </td></tr><tr><td> Concentrazione finale di CaCl 2 </td><td> 1 mM </td><td> 1 mM </td><td> 1,25 mm </td><td> 1,5 mM </td></tr><tr><td> 25X B / T / B </td><td> --- </td><td> 2 ml </td><td> 2 ml </td><td> 2 ml </td></tr><tr><td> Buffer Un volume di finale </td><td> 200 mL </td><td> 50 mL </td><td> 50 mL </td><td> 50 mL </td></tr></tbody></table> Tabella 6: Ricetta soluzione per Media Culturing <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> 2X siero senza Media (SFM) </td><td></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"> </td><td rowspan="2"></td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> (Dopo diluizione) </td></tr><tr><td> Carnitina </td><td> 0,099 g </td><td> 10 mM (5 mm) </td></tr><tr><td> La taurina </td><td> 0,063 g </td><td> 10 mM (5 mm) </td></tr><tr><td> Creatina </td><td> 0,075 g </td><td> 10 mM (5 mm) </td></tr><tr><td> Antibiotica / antimicotica </td><td> 0,5 ml </td><td> 1% (0,5%) (v / v) </td></tr><tr><td> 199 mezzi di comunicazione </td><td> 45 ml </td><td> Riempire a 50 mL </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1X SFM </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> 2X SFM </td><td> 25 mL </td><td> 1X </td></tr><tr><td> 199 mezzi di comunicazione </td><td></td><td> Riempire a 50 mL </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1X media del 5% Siero </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> Concentrazione finale </td></tr><tr><td> 2X SFM </td><td> 25 mL </td><td> 1X </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 2,5 ml </td><td> 5% (v / v) </td></tr><tr><td> 199 mezzi di comunicazione </td><td></td><td> Riempire a 50 mL </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Miriyala, J., Nguyen, T., Yue, D. T., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+CaVbeta+subunits%2C+and+lack+of+functional+reserve%2C+in+protein+kinase+A+modulation+of+cardiac+CaV1.2+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Role of CaVbeta subunits, and lack of functional reserve, in protein kinase A modulation of cardiac CaV1.2 channels.</a> Circ Res. 102 (7), e54-e64 (2008).</li>
<li>SX, T. akahashi, Mittman, S., Colecraft, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinctive+modulatory+effects+of+five+human+auxiliary+beta2+subunit+splice+variants+on+L-type+calcium+channel+gating%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys%22%5BJournal%5D)">Distinctive modulatory effects of five human auxiliary beta2 subunit splice variants on L-type calcium channel gating.</a> Biophys. , 84-845 (2003).</li>
</ol>

Un passo fondamentale è la velocità con cui è appeso il cuore isolato sul sistema di perfusione. La durata del periodo di digestione enzimatica può essere un po &#39;diverso per ogni ratto. La regolazione dipende da come il cuore diventa morbida dopo il periodo normale di digestione. Il piano di recupero di Ca 2 + dopo la digestione enzima è essenziale per ottenere le cellule sane Ca 2 +-tollerante. Per la cavia, il protocollo è lo stesso, tranne ialuronidasi viene usat...

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6191</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9666</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fluka</td><td>63068</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>Sale sodico dell'eparina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi tipo II</td><td>Worthington Biochemical</td><td>LS004176</td><td></td></tr><tr><td>Proteasi XIV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5147</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Butandione monossima (BDM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>Carnitina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9500</td><td></td></tr><tr><td>Taurina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>Acido glutammico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3294</td><td></td></tr><tr><td>Creatina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3630</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotico</td><td>Cellgro</td><td>30-009-CI</td><td></td></tr><tr><td>Media 199</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11150</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Laminina</td><td>BD Biosciences</td><td>354232</td><td></td></tr><tr><td>Bagno termostatato</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-5</td><td></td></tr><tr><td>Pompa chimica a flusso variabile</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-077-67</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per colture a 6 pozzetti</td><td>Corning</td><td>3516</td><td></td></tr></tbody></table>

cultura primario di miociti adulti cuore rat

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Coltura primaria adulto cellule del cuore roditori sono un modello di sistema importante per la ricerca cardiovascolare. Tuttavia, la creazione di robusti, miociti vitali adulto colto può essere tecnicamente impegnativo, fattore limitante per molti ricercatori. Qui abbiamo descritto un protocollo per ottenere un elevato rendimento di miociti adulti cuore di ratto che rimangono vitali in coltura per diversi giorni. Il cuore è isolato e perfuso con collagenasi e proteasi in basso Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Condizioni di recuperare singoli miociti. Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;-Tolerant cellule sono ottenute da un aumento graduale in extracellulare Ca<sup&gt; 2 +</supConcentrazione&gt; in tre successive fasi di lavaggio. Le cellule sono filtrati, risospeso in terreno di coltura, e placcato sulla scivola laminina rivestito. Miociti in coltura ottenuti usando questo protocollo sono vitali per un massimo di quattro giorni e sono adatti per la maggior parte degli esperimenti tra cui elettrofisiologia, biochimica, biologia molecolare e di imaging.

In questo articolo, abbiamo descritto un modo tipico per isolare e cultura miociti adulti cuore di ratto. Collagenasi e proteasi sono utilizzati da digerire e isolare singoli miociti. Miociti colto seguire questo protocollo soddisfare le esigenze più sperimentare.

Cultura primario di miociti adulti Cuore Rat

Le cellule primarie coltivate da cuore di roditore adulto rappresentano un importante sistema modello per la ricerca cardiovascolare. Tuttavia, l'istituzione di colture robuste e vitali...

La procedura inizia con l'escissione del cuore di un ratto adulto e il suo posizionamento sul sistema di perfusione. Le soluzioni enzimatiche vengono perfuse per circa 30 minuti, dopodiché il cuore viene rimosso. Il tessuto viene quindi tritato e la digestione enzimatica prosegue in un piccolo becher.Al termine della digestione, le cellule vengono dissociate in una sospensione di singole cellule mediante agitazione meccanica e filtrate in un tubo sterile. Le cellule cardiache primarie vengono lavate tre volte in tamponi con concentrazione crescente di calcio, risospese nel mezzo di coltura e seminate in piastre per colture cellulari rivestite con laminina. Ciao, sono Shahi del laboratorio di Henry Cowa del Dipartimento di Fisiologia e Fisica Cellulare dell'Università di Columbia.Oggi vi mostreremo un procedimento per isolare e coltivare altre cellule cardiache di ratto. Utilizziamo questo procedimento nel nostro laboratorio per studiare i canali del calcio nel cuore. Cominciamo dunque.Il giorno prima dell'intervento chirurgico sul ratto, assicurarsi che tutte le soluzioni siano state preparate, ma non aggiungere ancora enzimi. I tamponi A e B e il tampone di lavaggio devono essere

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Biologia

Culture del mouse cardiomiociti primari sono uno degli strumenti cardine per l'indagine di organizzazione e la funzione miofibrillare. Il protocollo che segue descrive l'isolamento e la coltura di cardiomiociti primari di cuori neonatali mouse. Le risultanti colture di cardiomiociti possono successivamente essere utilizzati per una varietà di biomeccanici, saggi biochimici e cellule biologiche.

Isolamento e Cultura della neonatali mouse Cardiomyocytes

Qui si descrive l'isolamento di cardiomyoctyes adulte di topo mediante un sistema di perfusione Langendorff. Le cellule risultanti sono Ca2 +-tolerant, elettricamente quiescente e può essere colta e trasfettate con-adeno o lentivirus per manipolare l'espressione genica. La loro funzionalità può anche essere analizzato con il sistema MMSYS e tecniche di patch clamp.

Isolamento, Cultura e caratterizzazione funzionale di topo adulto Cardiomyoctyes

Descriviamo un metodo affidabile per l'isolamento di cardiomiociti di topo adulto. Questo protocollo produce un risultato coerente per la cultura di cardiomiociti adulti funzionali da una varietà di topi geneticamente modificati.

Isolamento e Cultura del topo adulto Cardiomyocytes per Cell Signaling e<em&gt; In vitro</em&gt; Cardiaca Ipertrofia

L'isolamento dei cardiomiociti neonatali di ratto è una procedura imprevedibile e dispendiosa in termini di tempo.  Questo studio descrive i metodi per la crioconservazione e lo scongelamento dei cardiomiociti neonatali di ratto che consentono un uso più efficiente delle cellule. Gli NRCM scongelati possono essere utilizzati per vari esperimenti senza la necessità di eseguire isolamenti ogni volta.

Isolamento e Crioconservazione di neonatali Rat Cardiomyocytes

Questo protocollo descrive un metodo passo-passo per l'isolamento riproducibile e la coltura a lungo termine di cardiomiociti di topo adulto con alta resa, purezza e vitalità.

Isolamento, cultura e trasduzione di topo adulto cardiomiociti

Sono stati sviluppati e descritti diversi protocolli per l'isolamento di diversi tipi di cellule cardiache da un cuore del topo. Qui viene descritto un protocollo ottimizzato che consente l'isolamento di tipi di cellule cardiache di elevata qualità (cardiomiociti, cellule endoteliali e fibroblasti) da una singola preparazione, riducendo i costi sperimentali.

Isolamento simultaneo di cardiomiociti di alta qualità, cellule endoteliali e fibroblasti da un cuore di ratto adulto

Qui, presentiamo un protocollo per l'isolamento e la coltura di ratto adulto ventricolare cardiomiociti (ARVC). ARVC isolata può essere utilizzato per la coltivazione di breve e lungo termine. L'isolamento e la coltura di ARVC possono giocare un ruolo chiave nello sviluppo di nuovi regimi di trattamento per malattie cardiache.

Isolamento e coltura dei cardiomiociti di ratto adulto.

Qui, descriviamo una procedura basata su Langendorff, ottimizzata per l'isolamento di singole cellule cardiomiociti atriali da un modello del ratto di metabolico sindrome-relativo infarto con la frazione conservata di espulsione. Una regolazione manuale della pressione intraluminale delle cavità cardiache è implementata per rendere funzionalmente intatto miociti adatto per studi di accoppiamento eccitazione-contrazione.

Isolamento dei cardiomiociti atriali da un modello del ratto di metabolico sindrome-relativo infarto con la frazione conservata di espulsione

Qui, presentiamo un protocollo per l'isolamento, la trasfezione e la cultura a lungo termine dei cardiomiociti adulti di topi e ratti.

Isolamento, trasfezione e cultura a lungo termine di cardiomiociti per topi e ratti adulti

Un metodo è descritto per l'isolamento simultaneo di miociti e non miociti sia dagli atri che dai ventricoli di un singolo cuore adulto di topo. Questo protocollo si traduce in rese costanti di miociti cardiaci altamente vitali e non miociti e descrive in dettaglio le condizioni ottimali di coltura specifica delle cellule per la fenotipizzazione e l'analisi in vitro.

Isolamento simultaneo e cultura di miociti atriali, miociti ventricolari e non miociti da un cuore di topo adulto

Impara a isolare e coltivare miociti cardiaci adulti di ratto usando collagenasi e proteasi. Questo protocollo garantisce cellule vitali per studi di fisiologia cardiovascolare e biologia cellulare.

Cultura primario di miociti adulti Cuore Rat

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