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December 15, 2023
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Per iniziare, posizionare i topi sperimentali all’esterno della sala di test. Nella sala prove, assicurati che tutti i componenti del sistema ladder Erasmus, inclusi il router di rete, il computer con il software necessario, il compressore d’aria, le due scatole delle porte e la ladder con tutti i suoi pioli siano pronti per l’uso. Attiva il software Erasmus ladder.
Per creare un protocollo di esperimento, scegliere File, quindi Nuovo esperimento. Fare clic su File, quindi su Nuovo. Assegna un nome all’esperimento e fai clic su OK.
Successivamente, verificare che il protocollo EMC predefinito consista in quattro giorni di sessioni indisturbate con 42 prove indisturbate al giorno e quattro giorni di sessioni di sfida con 42 prove miste giornaliere, tra cui stimolo condizionato indisturbato o tono solo CS, stimolo incondizionato o ostacolo solo US, ostacolo accoppiato annunciato dal tono. Nel pannello laterale destro impostare il segnale luminoso, il segnale aereo e il vento in coda, che vengono utilizzati per incoraggiare il mouse ad attraversare la scala, e il tono. Per creare un protocollo diverso, scegliere Setup (Configurazione), quindi Experiment Protocol (Protocollo sperimenta) e selezionare New (Nuovo).
Ora da zero o copiate dal protocollo EMC, modificare le righe della tabella relative al numero di sessioni e al numero e al tipo di prove al giorno. Per aprire l’elenco delle sessioni e assegnare un nome agli argomenti, in Impostazione fare clic su Elenco sessioni. Quindi fare clic su Aggiungi soggetti e variabili.
Inserisci ogni specifico identificatore di topo, data di nascita, sesso, genotipo e categorie pertinenti, seguendo l’elenco ordinato dei topi. Prima di iniziare la sessione, accendere la scala. Assicurarsi che il compressore d’aria sia collegato e acceso.
Aprire il protocollo dell’esperimento creato in precedenza e, dalla finestra di acquisizione, scegliere Apri acquisizione. Posiziona il mouse con l’identificatore indicato dal software nella casella dell’obiettivo iniziale. Selezionare l’identificatore del mouse da acquisire nella prima sessione e fare clic su Avvia acquisizione.
Premere tre volte la manopola rossa del menu ladder per avviare la sessione. Monitora l’inizio della sessione e traccia i movimenti del mouse fino all’ultima prova della sessione. Dopo il completamento della 42a prova, assicurarsi che il display visualizzi i messaggi Invio dati e Acquisito.
Quindi riporta il mouse nella sua gabbia di casa e pulisci la scala e le scatole delle porte. Per visualizzare i dati registrati, dal menu Analisi, selezionare Statistiche di prova, Statistiche di sessione e Statistiche di gruppo nei grafici. Fare clic sul pulsante Esporta, quindi selezionare il formato del file come foglio di calcolo nella posizione della cartella.
Fare clic con il pulsante destro del mouse sui grafici generati automaticamente e selezionare Salva su file come star.png. Apri il foglio di calcolo salvato e scegli i parametri per valutare la motivazione basale, gli stati d’ansia, le risposte sensoriali, le prestazioni motorie e l’apprendimento della motricità fine durante i primi quattro giorni. Selezionare e tracciare i parametri di controllo, tra cui il tempo di riposo nella casella dell’obiettivo e il tempo di uscita dall’area dell’obiettivo dopo il periodo di riposo in risposta alla luce nei segnali.
Scegli e traccia il tempo sulla scala dopo i segnali, misurato come il tempo trascorso ad attraversare la scala una volta che il mouse lascia la casella dell’obiettivo. Selezionare e tracciare i parametri del modello di passo, inclusa la percentuale di prove con passi falsi come indicatore della sensibilità all’apprendimento. Successivamente, scegli i parametri per valutare l’apprendimento motorio sfidato negli studi solo negli Stati Uniti e l’apprendimento associativo negli studi appaiati negli ultimi quattro giorni.
Seleziona e traccia il tempo sulla scala dopo i segnali. Quindi traccia la percentuale di prove con passi falsi. Infine, tracciare i tempi dei passi pre e post perturbazione, definendo la differenza di precisione al millisecondo tra l’attivazione del piolo prima e dopo l’ostacolo sullo stesso lato della scala.
Nei topi wild-type, i tempi di riposo e le risposte al segnale luminoso sono rimasti coerenti dal primo al quarto giorno. Tuttavia, il tempo di risposta al segnale aereo ha mostrato una leggera diminuzione tra il primo e il secondo giorno. Il tempo impiegato per attraversare la scala ha mostrato una curva di apprendimento significativa.
I passi falsi durante l’attraversamento della scala sono diminuiti dal primo al quarto giorno in sessioni indisturbate. Le prestazioni del mouse sono migliorate dal quinto all’ottavo giorno, producendo una curva di apprendimento significativa nelle sessioni solo negli Stati Uniti. Nelle prove di apprendimento associativo con un ostacolo abbinato a un tono, i topi hanno completato le sessioni più velocemente rispetto alle prove solo negli Stati Uniti.
Negli studi di controllo con presentazioni di solo tono, è stata osservata una curva di apprendimento significativa simile a quella delle sessioni indisturbate. La percentuale di studi con passi falsi è rimasta costante negli studi solo statunitensi, mentre è diminuita significativamente negli studi appaiati. Una notevole differenza è stata osservata tra i tempi di passo pre e post-perturbazione negli studi solo ecografici, ma non negli studi appaiati, indicando un apprendimento più rapido per superare l’ostacolo negli studi appaiati.
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Staffa, A., Chatterjee, M., Diaz-Tahoces, A., Leroy, F., Perez-Otaño, I. Setting Up and Implementing Behavioral Testing in Mice Using the Erasmus Ladder System. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e201008, doi:10.3791/201008 (2023).
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