JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:45 min. • July 8th, 2025
Le microglia – i macrofagi residenti nel cervello – esprimono CD11b, un'integrina della superficie cellulare.
Per isolare la microglia dal cervello di un cucciolo di topo, prelevare frammenti di cervello in provette di dissociazione contenenti tampone con papaina, un enzima proteolitico, e desossiribonucleasi.
Posizionare i tubi su un dissociatore meccanico. Durante la corsa, il dissociatore rompe meccanicamente il tessuto.
La papaina digerisce la matrice extracellulare del tessuto, rilasciando le cellule, compresa la microglia, in sospensione. La desossiribonucleasi degrada il DNA libero in sospensione, impedendo un isolamento cellulare inefficiente.
centrifuga. Completare la dissociazione meccanica mediante pipettaggio. Trasferire la sospensione attraverso un filtro cellulare per rimuovere detriti e grumi cellulari e ottenere una popolazione omogenea di singole cellule.
Incubare con microsfere superparamagnetiche funzionalizzate con anticorpi anti-CD11b. Le microsfere si legano specificamente a CD11b sulle cellule, comprese le microglia.
Post-incubazione, centrifugazione. Rimuovere il surnatante contenente le perle non legate. Risospendere le celle nel buffer. Caricare su una col
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