Una tecnica per la raccolta e la dissociazione dei gangli della radice dorsale per le colture neuronali

Prendi una sezione della colonna vertebrale di un ratto e dividila per rimuovere il midollo spinale.

Staccare i gangli della radice dorsale, o DRG, un gruppo di neuroni circondati da cellule gliali satelliti, o SGC.

Posizionare i DRG in un terreno di coltura. Rimuovere le radici nervose per ridurre la contaminazione da SGC.

Trattare con collagenasi per degradare la matrice tissutale e lavare per rimuovere gli enzimi.

Introdurre la tripsina per interrompere le connessioni intercellulari. Aggiungere un siero contenente proteine che disattivano la tripsina.

Aggiungere il terreno di coltura e dissociare meccanicamente il tessuto. Filtrare la sospensione per isolare le singole cellule e centrifugare per rimuovere i detriti tissutali.

Risospendere le cellule per sovrapporle su un mezzo di gradiente di densità e centrifugare.

I neuroni con una densità più elevata si depositano sul fondo, facilitando la separazione degli SGC.

Risospendere i neuroni in un terreno di coltura. Trasferirli su un pozzetto rivestito di substrato di coltura, consentendo l'adesione delle cellule.

Integrare con fattori di crescita nervosi per la sopravvivenza neuronale.

Per ottenere i neuroni DRG dopo aver prelevat