Co-coltura di un espiante di ganglio della radice dorsale con cellule di Schwann per la mielinizzazione dei neuroni

Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente un vetrino coprioggetti rivestito con poli-D-lisina e un mezzo di crescita neuronale.

Posizionare il ganglio della radice dorsale embrionale di topo, o DRG, ricco di neuroni sensoriali, in questo pozzetto e incubare.

I neuroni DRG utilizzano i nutrienti e i fattori di crescita che facilitano la loro crescita, seguiti dall'estensione delle proiezioni neuronali, formando gli assoni.

Questi assoni crescono dal tessuto DRG, stabilendo la coltura di espianti DRG.

Sostituire il terreno con un terreno di co-coltura integrato con acido ascorbico con cellule di Schwann, una cellula gliale specializzata.

Nel corso del tempo, gli assoni secernono molecole di segnalazione che innescano la migrazione delle cellule di Schwann verso gli assoni.

Nel frattempo, l'acido ascorbico stimola varie vie di segnalazione nelle cellule di Schwann.

Queste cellule attivate iniziano ad estendere le loro membrane plasmatiche ricche di lipidi attorno agli assoni, avvolgendole in più strati per formare la guaina mielinica.

Questa mielinizzazione si traduce in un rivestimento isolante attorno agli assoni, essenziale per un'efficiente comunicazione neuronale.

Prendi una piastra a quattro pozzetti contenente 190 microlitri di terreno di crescita DRG in ciascun pozzetto e trasferisci con cura un singolo DRG al centro di ciascun pozzetto usando una pinza fine e una spatola. Quindi, posizionare le colture di espianti DRG nell'incubatore a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica. Il giorno successivo, aggiungere con cura 50 microlitri del terreno di coltura DRG a ciascun pozzetto e osservare quotidianamente l'aderenza all'espianto di DRG e la crescita degli assoni utilizzando un microscopio. Per la co-coltura il terzo giorno della coltura di espianti DRG, sostituire accuratamente il terreno di crescita DRG con 250 microlitri del terreno di co-coltura contenente 30.000 cellule di Schwann per pozzetto.