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DOI: 10.3791/50244-v
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CD4+ Le cellule T regolatorie sono potenti immunomodulatori e svolgono importanti funzioni nell'omeostasi immunitaria. La scarsità di queste cellule nel sangue periferico rende difficili gli studi funzionali, in particolare nel contesto dell'infezione da HIV-1. Qui descriviamo un metodo per isolare ed espandere le Treg CD4+ funzionali dal sangue periferico di individui con infezione da HIV-1.
L'obiettivo generale di questa procedura è valutare il fenotipo e la funzione soppressiva delle cellule T regolatorie positive CD 4 naturali espanse dal sangue periferico di individui H, HIV V, 1 positivi. Ciò si ottiene isolando prima le cellule T regolatorie mediante la selezione cellulare basata sulla densità, sul gradiente e sul flusso. Nella seconda fase, le cellule T regolatorie vengono espanse in coltura.
Successivamente, il fenotipo delle cellule espanse è caratterizzato dalla citometria a flusso nella fase finale, la funzione della popolazione TRE espansa è valutata mediante un saggio di soppressione delle cellule T. Lo studio della TRE positiva alla CD 4 naturale negli individui con infezione da HIV è stato tradizionalmente impegnativo e in gran parte a causa della scarsità della popolazione. Il vantaggio della nostra tecnica è che consente la generazione in exvivo di un gran numero di queste cellule molto rare.
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