Raccolta della saliva e misurazione del cortisolo salivare e dell'alfa-amilasi in comunità fragili di anziani residenti tramite caregiver familiari

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare la raccolta e l'analisi delle misure biologiche salivari in una popolazione residente in comunità e fragile dal punto di vista medico. Ciò si ottiene assemblando prima le forniture necessarie per la raccolta della saliva. Il secondo passo è organizzare la visita a domicilio, fornire le forniture e dimostrare le procedure di raccolta della saliva al caregiver.

Successivamente, fornisci istruzioni scritte e rispondi a qualsiasi domanda. Il passaggio finale consiste nel restituire i campioni di saliva al laboratorio e condurre le procedure di analisi. In definitiva, il protocollo è progettato per misurare il profilo diurno delle concentrazioni di alfa amilasi salivare e cortisolo salivare in pazienti fragili dal punto di vista medico residenti nella comunità.

Questo metodo risponderà a domande chiave nel campo della ricerca biocomportamentale per migliorare la nostra comprensione della sensibilità biologica e della suscettibilità ai processi correlati allo stress. Prima di programmare una visita a domicilio per acconsentire, i partecipanti raccolgono e assemblano le forniture necessarie, che includono quattro tamponi psicometrici per bambini, quattro provette per la conservazione dei tamponi, quattro tappi per provette con codice colore, cinque etichette bianche, un sacchetto di plastica Ziploc, un foglio di istruzioni per la raccolta della saliva, cinque guanti nitro e una scatola di conservazione. Usando una mano guantata nitro, posiziona quattro tamponi per bambini Salome nelle quattro provette per la conservazione dei tamponi e coprili rispettivamente con cappucci colorati gialli, arancioni, blu e viola.

Successivamente, posiziona un'etichetta su ogni tubo di stoccaggio per indicare l'ora del ritiro. Metti le quattro provette con tappo, il foglio di istruzioni per la raccolta della saliva e i quattro guanti nitro nella busta con chiusura lampo ed etichettala con l'ID del soggetto e la data di raccolta. Seguendo questo programma, una breve visita domiciliare ai soggetti precedentemente consenzienti e il giorno prima del campionamento della saliva.

Dopo essere arrivato a casa del soggetto, fornisci il sacchetto di plastica con le provviste e il foglio di istruzioni al raccoglitore di saliva. Rivedere il foglio di istruzioni e sottolineare la necessità di registrare gli orari di inizio e fine della raccolta della saliva evidenziando le istruzioni scritte. Registrare il nome, il dosaggio e il programma di tutte le prescrizioni e dei farmaci da banco assunti dal partecipante nelle ultime 48 ore.

Istruire il raccoglitore di saliva o SC ad applicare un guanto nitro sulla mano dominante. Chiedi al partecipante di inclinare la testa in avanti per permettere alla saliva di accumularsi sul pavimento della bocca. Successivamente, istruire il SC a stappare la provetta per la conservazione del tampone e recuperare il tampone orale.

Istruire il SC a posizionare il tampone orale sotto la parte anteriore della lingua dell'adulto più anziano per assorbire circa tre gocce della saliva accumulata e a tenere il tampone orale in posizione per due minuti per assicurarsi che sia saturo, fare in modo che il SC riporti il tampone orale saturo nel cestello della provetta per la conservazione del tampone, e riposizionare il tappo. Quindi, chiedi all'SC di posizionare immediatamente il tubo nella scatola di conservazione e di metterlo in un congelatore. Dopo aver gettato il guanto nel cestino, consigliare al SC di registrare gli orari di inizio e fine sul foglio di istruzioni della saliva.

Successivamente, informare il SC che raccoglierà campioni di saliva in quattro occasioni il giorno successivo, in particolare al risveglio 30 minuti dopo il risveglio a metà mattina e sera, chiedere al SC di dire al paziente di sciacquarsi la bocca con acqua 10 minuti prima della raccolta della saliva. Dopo la raccolta della saliva, scartare i campioni visibilmente contaminati dal sangue. Istruire il SC affinché i campioni di saliva rimangano nel congelatore fino a quando non vengono recuperati dal team di studio.

Chiama il team dello studio per confermare che programmeranno un orario e un giorno per recuperare i campioni congelati e portare nuove forniture per la raccolta della saliva per qualsiasi data di raccolta futura. Una volta che i campioni sono stati rimossi dal congelatore del soggetto, conservarli congelati durante il trasporto in laboratorio inserendoli in un sacchetto isolato per congelatore. All'arrivo in laboratorio, sostituire l'etichetta bianca su ogni provetta con un codice a barre sequenziale.

Verificare che il codice a barre sequenziale corrisponda all'ID soggetto, alla data di ritiro e all'ora di ritiro. Quindi rimetti i campioni di saliva in un congelatore a meno 20 gradi Celsius per far precipitare la mucina. Dopo aver scongelato i campioni di saliva, centrifugare i campioni a 1500 volte la gravità per 15 minuti.

Una volta che i reagenti del kit per il dosaggio salivare sono a temperatura ambiente per circa 90 minuti, preparare il tampone di lavaggio seguendo le istruzioni del kit, pipettare 25 microlitri dei controlli standard e i campioni nei pozzetti appropriati di una piastra a 96 pozzetti. Dopo questa pipetta, 200 microlitri di una soluzione di coniugato enzimatico precedentemente preparata nei pozzetti. Mescolare i campioni posizionando la piastra su un rotatore per cinque minuti a 500 giri/min.

Dopo aver incubato i campioni a temperatura ambiente per 55 minuti, lavare e tamponare la piastra con il tampone di lavaggio quattro volte. Quindi aggiungere 200 microlitri di tetraetilbenzina o soluzione di TMB. Una volta che i campioni sono stati mescolati per cinque minuti.

A 500 giri/min, coprire la piastra con un foglio di alluminio e incubarla al buio per altri 25 minuti. Al termine, aggiungere 50 microlitri di soluzione di arresto e mescolare i campioni per tre minuti a 500 giri/min. Entro 10 minuti dall'aggiunta della soluzione di arresto, rimuovere il fondo della piastra e leggere la piastra con un lettore di piastre a 450 nanometri.

Successivamente, calcola la concentrazione di cortisolo utilizzando la densità ottica media. Sottrarre la densità ottica media nei pozzetti di legame non specifici dalla densità ottica media nei pozzetti di controllo e di campionamento standard zero. Infine, stimare le concentrazioni dei controlli e le incognite utilizzando software in grado di effettuare la logistica.

Le procedure descritte sono progettate per misurare il profilo diurno delle concentrazioni di cortisolo salivare, alfa amilasi e salivare. Poiché è stato dimostrato che i risultati del cortisolo sono positivamente distorti, si suggerisce di utilizzare la trasformazione logaritmica dei dati per ottenere una distribuzione normale. Sono disponibili diverse strategie per modellare le differenze nei ritmi diurni del cortisolo e dell'alfa amilasi.

La prima strategia consiste nel tracciare il cambiamento diurno dell'alfa amilasi o del cortisolo tra il risveglio e i 30 minuti dopo il risveglio. La seconda strategia consiste nel tracciare la concentrazione totale di cortisolo o alfa amilasi nell'arco di un giorno. I parametri di sintesi risultanti possono essere raggruppati in due categorie generali, la misura dell'entità della risposta o le misure del modello di risposta nel tempo.

La modellazione della curva di crescita può essere utile per gli studi in cui vengono raccolti più campioni negli individui durante il giorno. Una curva di crescita può essere adattata per tenere conto delle differenze individuali nel ciclo diurno aggiungendo predittori a livello individuale o di misurazione. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come raccogliere la saliva e come insegnare agli operatori sanitari come raccogliere la saliva dal punto di vista medico per i nostri anziani in ambito domestico, e dovresti avere una buona comprensione di come condurre analisi di laboratorio di analiti salivari che sono fattibili, hanno un'elevata conformità e producono campioni di qualità.