Lesioni chirurgica al pancreas mouse attraverso la legatura del Dotto pancreatico come un modello per Endocrine e Esocrine riprogrammazione e la proliferazione

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di indurre gravi lesioni nel pancreas adulto dei roditori per stabilire un ambiente che consenta la neogenesi e la proliferazione delle cellule beta. Ciò si ottiene eseguendo prima una laparotomia sulla linea mediana per consentire l'esposizione del pancreas. Il dotto pancreatico principale nella regione del collo del pancreas viene quindi legato utilizzando due nodi chirurgici.

Nella fase finale, viene prelevata la legatura parziale del dotto o pancreas PDL. In definitiva, l'analisi immunoistochimica e la Q-R-T-P-C-R vengono utilizzate per studiare i fattori coinvolti nel rimodellamento tissutale, nella proliferazione endocrina e nella neogenesi indotta dalla legatura parziale del dotto. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ad altri modelli di lesioni pancreatiche, come la pancreatectomia e l'ablazione chimica delle cellule beta, è che la legatura parziale del dotto è una procedura semplice che non comporta la rimozione del tessuto pancreatico o la distruzione delle cellule beta.

La legatura parziale del dotto dovuta al pancreas dei ratti, è stata introdotta nel nostro istituto più di 20 anni fa. Abbiamo tradotto questa tecnica nei topi per facilitare il tracciamento del lignaggio cellulare genetico, nonché gli esperimenti di perdita e guadagno di funzione. Per valutare il meccanismo alla base della generazione di cellule beta in queste condizioni sperimentali, prima di iniziare la procedura, disinfettare il torace, un addome di un topo anestetizzato di otto settimane con una soluzione antisettica di clorexidina.

Successivamente, radere una sezione di 2,5 x 1,5 centimetri dell'addome e disinfettare il sito chirurgico con scrub alternati di antisettico ed etanolo. Dopo l'ultimo scrub, confermare la profondità appropriata dell'anestesia con le dita dei piedi. Pizzicare e poi drappeggiare l'animale.

Quindi utilizzare una lama sterile per praticare un'incisione della linea mediana superiore nella pelle, estendendosi dal processo xifoideo all'ombelico utilizzando forbici sterili. Separare il gomito lineare sottostante e il peritoneo per esporre il quadrante addominale superiore. Quindi ritrarre lo stomaco superiormente per esporre la milza.

Quindi esporre il lobo splenico o la regione della coda del pancreas. Successivamente, ritrarre delicatamente il duodeno e parte del digiuno superiore verso il quadrante addominale superiore destro per esporre la testa, il collo e il corpo del pancreas. Localizzare il dotto principale pancreatico nella regione del collo del pancreas.

La regione del corpo e della coda del pancreas è ora esposta per legare il dotto pancreatico. Posizionare con cautela un ago da sutura 6.0 sotto la regione del collo e legare sul lato sinistro della vena porta, separando i lobi gastroduodenale e splenico. Posizionare una seconda legatura in prossimità della prima per garantire che i lobi siano adeguatamente separati.

Quindi riportare gli organi nella cavità addominale e utilizzare quattro fili filamentosi di poliglicole zero per chiudere lo strato muscolare in uno schema di sutura continuo. Infine, chiudere la pelle con una sutura discontinua e monitorare l'animale fino a quando non si è completamente ripreso. Il pancreas PDL sarà di dimensioni ridotte e apparirà quasi traslucido.

Con gli occhielli che appaiono come piccoli punti bianchi, la testa del pancreas apparirà di colore rosa opaco, consentendo l'identificazione della distinta LOI esocrina utilizzando forbici sterili. Tagliare lungo la milza per separare la coda legata del pancreas dalla milza e dal tessuto connettivo che collega la coda del pancreas agli organi interni. Quindi tagliare la coda PD L immediatamente davanti all'azione.

Isolare il finto tessuto della coda allo stesso modo. Si noti, tuttavia, che sia la coda che la regione della testa del pancreas fittizio sono rosa opaco. Per isolare entrambe le parti separatamente, tagliare il pancreas finto legato nella regione del collo.

Quando la PDL viene eseguita correttamente, i topi appaiono sani e non mostrano una differenza significativa nel peso corporeo o nella glicemia. Rispetto agli animali operati in modo fittizio, il tessuto asar esocrino viene perso gradualmente dopo l'intervento chirurgico di PD L, con conseguente riduzione delle dimensioni e del peso della coda PD L legata tre giorni dopo la PDL. La morfologia del tessuto R della teina viene interrotta con apparente apoptosi delle cellule asar. Dopo una settimana, il tessuto pancreatico viene inghiottito dalle cellule immunitarie CD45 positive infiltranti.

Dopo due settimane, molti lobuli ASIN r vengono sostituiti da tessuto fibrotico e adiposo, causando l'aspetto traslucido del pancreas della coda PD L e consentendo agli occhielli di diventare visibili ad occhio nudo. In coincidenza con l'inizio dell'apoptosi dell'asar, si osserva anche un aumento dell'attività cellulare dell'epitelio duttile. Inoltre, due settimane dopo la PDL, il volume totale delle cellule beta nella coda PDL raddoppia rispetto a quello osservato nella coda sham non legata, che è accompagnato da un aumento della proliferazione delle cellule beta, un'attivazione del neurogeno marcatore progenitore endocrino embrionale in tre.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante utilizzare la tecnica asettica appropriata per ogni fase dell'intervento chirurgico ed eseguire la legatura del dotto pancreatico con il minor danno possibile alle arterie sottostanti e ai tessuti circostanti. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi, come il tracciamento del lignaggio in topi transgenici legati a dotti parziali, al fine di rispondere a ulteriori domande sul destino e l'origine delle cellule. Dopo PD L.