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DOI: 10.3791/53179-v
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Il protocollo immunofluorescenza indiretta descritto in questo articolo consente il rilevamento e la localizzazione delle proteine nella ghiandola mammaria del mouse. Un metodo completo è dato per la preparazione di campioni della ghiandola mammaria, per eseguire immunoistochimica, per l'immagine delle sezioni di tessuto al microscopio a fluorescenza, e di ricostruire le immagini.
L'obiettivo generale di questa procedura è localizzare le proteine di interesse nel tessuto mammario del topo durante l'allattamento. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia cellulare, come ad esempio dove le proteine snap coinvolte nella secrezione del prodotto intermedio, si sono localizzate nelle cellule epiteliali mammarie del topo durante l'allattamento. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è possibile osservare rapidamente e facilmente la posizione delle proteine in un determinato contesto tissutale.
Dopo l'eutanasia, posizionare il topo sul dorso, bagnare la zona ventrale con etanolo e poi asciugarlo con un tovagliolo di carta. Quindi, usa una pinza per sollevare la pelle addominale tra le due zampe posteriori e fai un'incisione lunga un centimetro attraverso la pelle con un paio di forbici affilate. Partendo da questa prima incisione, tagliare la pelle fino al collo e poi allontanare la pelle dal peritoneo.
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