Preparazione di rAAV9 per iperespressione o Knockdown geni in Cuori mouse

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di preparare il virus adeno-associato ricombinante nove, o rAAV9, per manipolare l'espressione genica nei cuori di topo. Il metodo può rispondere a domande chiave nel campo della cardiologia e della genetica molecolare, come ad esempio come studiare la funzione genica nel cuore del topo in vivo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che ci permetterà di manipolare facilmente l'espressione genica e la funzione in vivo nel cuore del topo, consentendo l'accesso funzionale alla funzione genica senza dover fare affidamento sui modelli animali geneticamente modificati.

Dopo aver generato i costrutti rAAV9 e aver coltivato le cellule HEK293 secondo il protocollo di testo, per trasfettare le cellule il primo giorno, combinare 70 microgrammi di plasmide AAV Rep-Cap, 70 microgrammi di plasmide rAAV9 e 200 microgrammi di plasmide Ad helper in una provetta da centrifuga da 50 millilitri. Aggiungere 49 millilitri di DMEM a temperatura ambiente senza FBS al tubo e mescolare bene. Quindi, per ottenere una soluzione PEI in DNA quattro a uno, aggiungere 1.360 microlitri di PEI alla provetta e mescolare bene.