Name: Valutazione della permeabilità della barriera emato - encefalica dallinfusione endovenosa di albumina FITC-labeled in un modello murino di malattia di Neurodegenerative (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Scopri come valutare la permeabilità della barriera emato-encefalica mediante iniezione endovenosa di albumina FITC in un modello murino di malattia neurodegenerativa. Questo metodo rapido consente di studiare l'omeostasi cerebrale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato supportato da "Fondazione Neuromed" e finanziato dal Ministero italiano della salute "Ricerca Corrente" di V.M.

tutte le procedure sugli animali sono state approvate da IRCCS Neuromed Animal Care Review Board e &#34; Istituto Superiore di Sanità &#34; (permettere numero: 1163/2015-PR) e sono stati in conformità degli orientamenti dell'UE direttiva 2010 / 63/EU per gli esperimenti sugli animali.
 1. preparazione della soluzione di FITC-albumina deve essere iniettato in vena giugulare Nota: tutti gli esperimenti sono stati controllo trasportato in manifesti topi HD R6/2 (11 - vecchio settimana) e in età e genere-abbinato wild-type (WT) littermates.
<ol><li>Sciogliere FITC-albumina polvere (Vedi Tabella materiali) in tampone fosfato salino (PBS) 10 mg/ml. 
	Nota: Per risultati ottimali, questo dovrebbe essere preparato fresco per ogni reazione etichettatura.</li>
</ol> 2. Preparazione delle attrezzature per essere utilizzato durante la chirurgia <ol><li>stendere gli strumenti chirurgici precedentemente sterilizzati nell'autoclave (Vedi Tabella materiali).</li>
	<li>Pulire la panchina chirurgica con alcool (soluzione di etanolo 70%). Preparare l'area chirurgica (45 x 45 cm) con un telo chirurgico sterile monouso asciugamano e impostare lo stereomicroscopio operativo.</li>
</ol> 3. Procedura chirurgica per FITC-albumina infusione nella vena giugulare <ol><li>registrare il peso del corpo del mouse per anestesia.</li>
	<li>Anesthetize mouse con un'iniezione intraperitoneale (i. p) di una dose adeguata di ketamina (100 mg/kg) - soluzione xilazina (10 mg/kg).</li>
	<li>Monitor sedazione animale di pizzico di delicata punta ritirare riflesso come dimostrato in Walantus et al. 11 , 12.</li> <li>posizionare il mouse anestetizzato in posizione supina di scoperte e fissare i quattro zampe e la coda sul banco di lavoro chirurgico con nastro adesivo.</li>
	<li>Dopo che il mouse è assicurato, attentamente radere il margine chirurgico appropriato sul collo con un rasoio elettrico (Vedi Tabella materiali) e disinfettarlo con povidone-iodio soluzione e 70% di etanolo.</li>
	<li>a secco la superficie esposta rasata con tamponi di cotone.</li>
	<li>Delicatamente tirare la pelle rasata e fare un'incisione longitudinale lungo 1,5 cm, di bisturi, nell'emiclaveare linea inizia a metà strada sul torace e si estende per appena sotto il collo.</li>
	<li>Con molta cautela tirare parte del tessuto connettivo con forcipe sotto osservazione al microscopio (ingrandimento 5x) per esporre la vena giugulare esterna.</li>
	<li>Garantire un sufficiente spazio sulla destra e sulla sinistra della vena giugulare per facilitare l'inserimento dell'ago per l'infusione della soluzione FITC-albumina 30½ G.</li>
	<li>Iniettare per via endovenosa l'animale (a destra della vena giugulare) lentamente (più di 3 minuti) con 100 µ l di 10 mL/kg FITC-albumina utilizzando l'ago 30½ G.</li>
	<li>Dopo 15 minuti, eutanasia il mouse per decapitazione, rapidamente rimuovere il cervello dal cranio come descritto in precedenza 13 e immergerlo per 15 min in almeno 10 volte il volume del cervello stesso di pre-refrigerato isopentano.</li>
	<li>Spostare l'isopentano congelato il cervello in una provetta pre-refrigerata e memorizzarlo in un congelatore a-80 ° C fino al sezionamento istologico.</li>
</ol> 4. Istologica di sezionamento del cervello infuso con FITC-albumina <ol><li>Embed congelato il cervello in temperatura di taglio ottimale (OCT) composto (vedere la Tabella materiali) prima criostato sezionamento.</li>
	<li>In Serie tagliato il cervello in 20 sezioni spesse µm, con un criostato (Vedi Tabella materiali) e montarli su vetrini microscopio.</li>
	<li>Eseguire la FITC-albumina/laminin co-colorazione utilizzando uno specifico anticorpo anti-laminina (Vedi tabella materiali) come precedentemente descritto 6.
	<ol><li>Brevemente, incubare sezioni con l'anticorpo primario anti-laminina (pAb 1: 1000) tutta la notte e procedere con appropriato anticorpo secondario coniugato di Cy3.</li>
		<li>Vetrino coprioggetto diapositive con mezzo di montaggio contenente 4 &#39;, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (picco di assorbimento = 360 nm; picco di emissione = 460 nm (Vedi Tabella materiali).</li>
		<li>Lasciare la diapositiva per asciugare durante la notte a 4 ° C al buio.</li>
		<li>Osservare la fluorescenza macchiatura sotto un microscopio a fluorescenza (Vedi Tabella materiali) a 20 ingrandimenti dotato di entrambi FITC (picco di assorbimento = 495 nm; picco di emissione = 525 nm) e filtri Cy3 (picco di assorbimento = 550 nm; emissione picco = 570 nm).
		<ol><li>Per visualizzare i campioni immediatamente dopo la colorazione, fissare il vetrino coprioggetto agli angoli utilizzando smalto ed esaminarli al microscopio come sopra (4.3.3).</li>
		</ol></li></ol></li></ol> 5. Impostazione del microscopio di fluorescenza e acquisizione di immagini a colori <ol><li>impostare il microscopio a fluorescenza come segue.
	<ol><li>Accendere la lampada fluorescenza circa 10 minuti prima dell'uso. Accendere il microscopio, il computer collegato e la fotocamera digitale. Eseguire il software di analisi di immagine (Vedi Tabella materiali).</li>
		<li>Utilizzare l'obiettivo appropriato per la raccolta ottimale del segnale e risoluzione spaziale e selezionare filtri appropriati.</li>
	</ol></li> <li>Acquisizione di immagini a colori <ol><li>selezionare il comando [live] sul software di analisi di immagine (Vedi Tabella materiali) e impostare i parametri di illuminazione ottimale per ogni filtro.</li>
		<li>Selezionare il comando [freeze] per prendere l'immagine di colore singolo canale e aggiungere la barra della scala (&#39; Edit &#62; masterizzare scala &#39;)</li>
		<li>Salvare ogni immagine nella &#39;. TIFF &#39; formato.</li>
		<li>Unire i canali in una singola immagine selezionando &#39; File &#62; Merge canale &#39; e salvarlo nella</li>
		<li>tiff &#39; formato.</li>
		<li>Acquisire un minimo di quattro venti-quattro bit colore immagini (2200 µm x 3400 µm) per fetta di cervello (6 sezioni per vetrino).</li>
	</ol></li></ol> 6. Valutazione di FITC-albumina stravaso <ol><li>analizzare l'intensità di fluorescenza per ogni singolo canale tramite le liberamente disponibile ImageJ 14 , 15.</li>
	<li>Normalizzare l'intensità del segnale fluorescente totale di FITC-albumina dall'intensità fluorescente CY3-laminina totale per ogni immagine e segnalare l'albumina travasato fuori i vasi come intensità di fluorescenza verde.</li>
</ol>

<ol><li>Obermeier, B., Verma, A., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier.</a> Handb Clin Neurol. 133, 39-59 (2016).</li>
<li>Serlin, Y., Shelef, I., Knyazer, B., Friedman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the blood-brain barrier.</a> Semin Cell Dev Biol. 38, 2-6 (2015).</li>
<li>Moretti, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+in+disorders+of+the+developing+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction in disorders of the developing brain.</a> Front Neurosci. 9, 40(2015).</li>
<li>Zhao, Z., Nelson, A. R., Betsholtz, C., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+Dysfunction+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Establishment and Dysfunction of the Blood-Brain Barrier.</a> Cell. 163 (5), 1064-1078 (2015).</li>
<li>Drouin-Ouellet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+and+blood-brain+barrier+impairments+in+Huntington%27s+disease%3A+Potential+implications+for+its+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular and blood-brain barrier impairments in Huntington's disease: Potential implications for its pathophysiology.</a> Ann Neurol. 78 (2), 160-177 (2015).</li>
<li>Di Pardo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+blood-brain+barrier+is+an+early+event+in+R6%2F2+mouse+model+of+Huntington+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Impairment of blood-brain barrier is an early event in R6/2 mouse model of Huntington Disease.</a> Sci Rep. 7, 41316(2017).</li>
<li>Lecler, A., Fournier, L., Diard-Detoeuf, C., Balvay, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier+Leakage+in+Early+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier Leakage in Early Alzheimer Disease.</a> Radiology. 282 (3), 923-925 (2017).</li>
<li>van de Haar, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-Brain+Barrier+Leakage+in+Patients+with+Early+Alzheimer+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Blood-Brain Barrier Leakage in Patients with Early Alzheimer Disease.</a> Radiology. 282 (2), 615(2017).</li>
<li>Fernandez-Lopez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+permeability+is+increased+after+acute+adult+stroke+but+not+neonatal+stroke+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier permeability is increased after acute adult stroke but not neonatal stroke in the rat.</a> J Neurosci. 32 (28), 9588-9600 (2012).</li>
<li>Yang, Y., Rosenberg, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+in+acute+and+chronic+cerebrovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown in acute and chronic cerebrovascular disease.</a> Stroke. 42 (11), 3323-3328 (2011).</li>
<li>Walantus, W., Castaneda, D., Elias, L., Kriegstein, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+utero+intraventricular+injection+and+electroporation+of+E15+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In utero intraventricular injection and electroporation of E15 mouse embryos.</a> J Vis Exp. (6), e239(2007).</li>
<li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+pancreatic+islets+into+the+kidney+capsule+of+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice.</a> J Vis Exp. (9), e404(2007).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>McCloy, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+inhibition+of+Cdk1+in+G+2+phase+overrides+the+SAC+and+decouples+mitotic+events%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Partial inhibition of Cdk1 in G 2 phase overrides the SAC and decouples mitotic events.</a> Cell Cycle. 13 (9), 1400-1412 (2014).</li>
<li>Burgess, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+human+Greatwall+results+in+G2+arrest+and+multiple+mitotic+defects+due+to+deregulation+of+the+cyclin+B-Cdc2%2FPP2A+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Loss of human Greatwall results in G2 arrest and multiple mitotic defects due to deregulation of the cyclin B-Cdc2/PP2A balance.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (28), 12564-12569 (2010).</li>
<li>Krueger, M., Hartig, W., Reichenbach, A., Bechmann, I., Michalski, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+after+embolic+stroke+in+rats+occurs+without+ultrastructural+evidence+for+disrupting+tight+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown after embolic stroke in rats occurs without ultrastructural evidence for disrupting tight junctions.</a> PLoS One. 8 (2), e56419(2013).</li>
<li>Hirano, A., Kawanami, T., Llena, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+of+the+blood-brain+barrier+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy of the blood-brain barrier in disease.</a> Microsc Res Tech. 27 (6), 543-556 (1994).</li>
</ol>

Gli autori non hanno conflitti di interesse di divulgare

La tecnica che descriviamo qui è utile principalmente per la rilevazione di perdite BBB in condizioni di malattia del cervello. Disfunzione BBB sta guadagnando l'attenzione come una caratteristica comune di diversi disordini neurologici4. In precedenza abbiamo utilizzato questo approccio per descrivere il derangement precoce dell'integrità BBB in un modello murino di una malattia neurodegenerativa rara come HD6.
Questo metodo si avvale della rela...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/56389/assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc">Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease</a>. One of the author&#39;s names was corrected from:
Maglione Vittorio
to:
Vittorio Maglione

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/56389/assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc">Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease</a>. One of the author's names was corrected.

Erratum: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Omeostasi all'interno del sistema nervoso centrale (SNC) è un prerequisito per la corretta comunicazione e la funzione delle cellule neuronali. Il parenchima CNS è ermeticamente sigillato dalla periferia con l'endoteliale emato - encefalica (BBB), che rappresenta l'interfaccia tra il cervello e il flusso sanguigno periferico e svolge un ruolo fondamentale nel cross-talk tra questi due distretti1 ,2. La BBB è un complesso e dinamico struttura tridimensionale composta principalmente di micro-nave endothelial cellule specializzate (ECs) collegate tra loro attraverso i complessi giunzionali intercellulari - giunzioni strette (TJs) - e circondati da periciti, neurone terminazioni e astrociti piede processi1,2.
In condizioni fisiologiche, la bassissima permeabilità della BBB intatta assicura la severa regolamentazione del trasporto di sostanze nutritive e di altre molecole dentro e fuori il cervello e fornisce il sistema nervoso centrale con un'unica protezione dai cambiamenti che si verificano nella composizione del sangue che potrebbe influenzare l'attività neurale e contro potenziale periferico insulti1,2,3.
Rottura della BBB l'integrità e la sua permeabilità migliorata lungamente è stata conosciuta per costituire una caratteristica fondamentale per molti neurologiche e neurodegenerative disturbi4 compreso la malattia di Huntington (HD)5,6, tuttavia , se una tale disfunzione è un fenomeno causativo o un evento propagativo nel corso della malattia è ancora poco chiaro. I tempi di crisi di BBB anche resta sfuggenti, tuttavia, dal nostro gruppo ed altri la prova emergente indica che perturbato BBB integrità non rappresenta un evento ritardato nella progressione di malattia, ma piuttosto un punto iniziale6,7 , 8, che può avere conseguenze a lungo termine.
Con questo in mente, è importante rivelare precocemente ripartizione BBB nella neurodegenerazione al fine di sviluppare strategie utili per predire la progressione della malattia e del danno cerebrale e sviluppare interventi alternativi e più mirati in grado di correttamente mitigare le conseguenze cliniche di tali una perturbazione. Formazione immagine affidabile di danno BBB è, pertanto, di grande importanza nella ricerca sperimentale e gestione clinica delle malattie del cervello.
In questo articolo, descriviamo una procedura semplice e di successo per la valutazione della permeabilità BBB in un modello di topo HD utilizzando l'alto peso molecolare della fluorescina isotiocianato etichettati-albumina (FITC-albumina). Stravaso di FITC-albumina, che normalmente non può attraversare la barriera, nel parenchima del cervello è stato misurato come indice di dispersione BBB. Questa tecnica è facilmente adattabile ai ratti e ad altre condizioni patologiche caratterizzate da cerebrovasculature danno9,10.

<table><tbody><tr><td>Albumina-fluorescina isotiocianato conjiugate</td><td>SIGMA</td><td>A9771-100MG</td><td></td></tr><tr><td>pAb anti-Laminin</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB300-144</td><td></td></tr><tr><td>CY3 anti-coniglio fatto in capra</td><td>MILLIPORE</td><td>AP132</td><td></td></tr><tr><td>SUPERFROST PLUS</td><td>Thermo Scientific</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini di copertura 24 X 50 mm</td><td>Thermo Scientific (DIAPATH)</td><td>61050</td><td></td></tr><tr><td>Kilik Optimal Cutting Temperature (OCT) composto</td><td>Bio Optica</td><td>05-9801</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD Supporti di montaggio</td><td>VECTOR</td><td>H-1500</td><td>Mezzi di montaggio con</td></tr><tr><td>DAPI iNSu/Light Siringa monouso per insulina</td><td>RAYS Salute e Sicurezza</td><td>INS1ML26G13</td><td></td></tr><tr><td>30G 1/2 "</td><td>BD Microlance</td><td>304000</td><td>Ago per insulina monouso Siringa</td></tr><tr><td>Manico bisturi</td><td>F.S.T.91003-12</td><td></td><td></td></tr><tr><td>#22 Monouso Bisturi</td><td>Bis F.S.T.</td><td>10022-00</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per iride fine 10,5 cm</td><td>F.S.T.</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Dumont #5745 45&deg; 0.10 x 0.06 mm</td><td>F.S.T.</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Pinze 10 cm</td><td>F.S.T.</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Dumont #5 0,1 X 0,06 mm</td><td>F.S.T.</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Cerotto medico</td><td>Medicalis</td><td>34788</td><td></td></tr><tr><td>Telo asciugamano monouso sterile</td><td>Dispotech</td><td>TVO50VE</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio stereoscopico</td><td>NIKON</td><td>SMZ 745 T</td><td></td></tr><tr><td>Illuminatore ottico Luce LED (C-FLED2)</td><td>Illuminatore ottico NIKON</td><td>1003167</td><td>per microscopio stereoscopico</td></tr><tr><td>Eclipse Ni-U</td><td>Microscopio Nikon</td><td>932162</td><td>Microscopio a epifluorescenza Microscopio</td></tr> fotocamera <tr><td>digitale</td><td>Nikon</td><td>DS-Ri2</td><td>Fotocamera per microscopio</td></tr><tr><td>Intenslight</td><td>Nikon</td><td>C-HGFI</td><td>Lampada per microscopio</td></tr><tr><td>NIS-Elements 64 bit</td><td>Nikon</td><td>AR 4.40.00</td><td>Software di analisi</td></tr><tr><td>Rasoio elettrico</td><td>Gemei</td><td>GM-3007</td><td></td></tr></tbody></table>

valutazione della permeabilità della barriera emato - encefalica dall'infusione endovenosa di albumina fitc-labeled in un modello murino di malattia di neurodegenerative

Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease

Rottura dell'integrità della barriera emato - encefalica (BBB) è una caratteristica comune per le diverse malattie neurologiche e neurodegenerative. Anche se l'interazione tra perturbato BBB omeostasi e la patogenesi dei disordini del cervello ha bisogno di ulteriori indagini, lo sviluppo e la convalida di una procedura affidabile per rilevare con precisione la barriera ematoencefalica può essere cruciale e rappresentano uno strumento utile per la predizione potenzialmente malattia progressione e lo sviluppo di mirate strategie terapeutiche.
Qui, presentiamo una procedura semplice ed efficace per valutare la perdita BBB in condizioni neurodegenerative come quello che accade in un modello murino preclinico di malattia di Huntington, in cui i difetti della permeabilità della BBB sono chiaramente rilevabili precocemente in la malattia. In particolare, l'alto peso molecolare isotiocianato di fluorescina etichettato (FITC)-albumina, che è in grado di attraversare la BBB solo quando quest'ultima è compromessa, viene acutamente infusa di una vena giugulare del mouse e la sua distribuzione nei distretti vascolari o parenchimatici è quindi determinata da microscopia di fluorescenza.
Accumulo di verde fluorescente-albumina nel parenchima del cervello funziona come un indice di permeabilità BBB aberrante e, quando quantificati utilizzando software di elaborazione immagine J, viene segnalato come l'intensità di fluorescenza verde.

Infusione corretta di FITC-albumina nel vena giugulare produce lo stravaso del tracciante fluorescenza verde dal flusso sanguigno nel cervello parenchymawhen che BBB è compromessa6. In condizioni fisiologiche, la distribuzione di albumina fluorescente infuso è consentita all'interno dei vasi sanguigni del cervello e non è rilevabile alcun segnale nel parenchima circostante di zona e/o cervello perivascolare (Figura 1A, micrografie sul ...

In questo studio, presentiamo una procedura semplice ed efficace per valutare la rottura della barriera sangue - cervello sotto circostanze neurodegenerative. Per raggiungere il nostro obiettivo, abbiamo infuso isotiocianato di fluorescina di alto peso molecolare etichettato (FITC)-albumina in giugulare del mouse della vena e valutate le perdite nel parenchima cerebrale mediante microscopia a fluorescenza.

Valutazione della permeabilità della barriera emato - encefalica dall'infusione endovenosa di albumina FITC-labeled in un modello murino di malattia di Neurodegenerative

Disruption of blood-brain barrier (BBB) integrity is a common feature for different neurological and neurodegenerative diseases. Although the interplay ...

L'obiettivo generale di questa procedura è valutare la permeabilità della barriera emato-encefalica in un modello murino di malattia degenerativa mediante iniezione intragiugulare di albumina marcata con FITC. Questo metodo può aiutare a rispondere alle domande chiave nello studio dell'omeostasi cerebrale. Può essere particolarmente utile indagare su qualsiasi possibile legame tra il danno alla barriera emato-encefalica e la neurodegenerazione.Il vantaggio principale di questa tecnica è che è veloce e facile da eseguire e può essere applicata, anche, a modelli animali più grandi e ad altri contesti neuro-patologici. A dimostrare la procedura chirurgica di iniezione intragiugulare di FITC-albume sarà Luca Capocci. Salvatore Castaldo dimostrerà il sezionamento istologico di un cervello.Ed Enrico Amico illustrerà la procedura per l'acquisizione di micrografi. Iniziare preparando la soluzione di FITC-albume sciogliendo la polvere di FITC-albume in soluzione salina tamponata con fosfato a 10 milligrammi per millilitro. Disporre gli strumenti chirurgici autoclavati.Pulire il banco operatorio con etanolo al 70% e posizionare un telo chirurgico sterile monouso. Quindi impostare lo stereomi

assessment-blood-brain-barrier-permeability-intravenous-infusion-fitc

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Questo video descrive un test di permeabilità per valutare la permeabilità della barriera emato-encefalica in vitro utilizzando molecole di fluoresceina di sodio.

Saggio di permeabilità mimica della barriera emato-encefalica: un test in vitro per valutare la permeabilità della BBB che imita le molecole traccianti

Questo video mostra una procedura per valutare l'interruzione della barriera emato-encefalica in un modello murino EAE. Coloranti fluorescenti di diverse dimensioni vengono iniettati per via retro-orbitale e circolano attraverso i vasi sanguigni del cervello. Il colorante più piccolo fuoriesce attraverso le fessure nel tessuto cerebrale, mentre il colorante più grande entra solo se l'interruzione è grave, correlata all'entità del danno alla barriera.

Determinazione dell'interruzione della barriera emato-encefalica utilizzando coloranti fluorescenti in un modello murino EAE

Questo video mostra un metodo per studiare la permeazione attraverso un modello di barriera emato-encefalica (BBB) in vitro utilizzando astrociti e cellule endoteliali su un inserto di membrana, con FITC libero e ferritina caricata con FITC. FITC-ferritina si è legata ai recettori sulle cellule endoteliali e ha attraversato la barriera di membrana fino alla camera inferiore, mentre la FITC libera ha mostrato una permeazione limitata ed è rimasta nella camera superiore.

Studio della permeazione di FITC e FITC-ferritina attraverso un modello di barriera emato-encefalica in vitro

Viene descritto e convalidato un metodo per stabilire un modello in vitro di barriera emato-encefalica basato su una co-coltura di cellule endoteliali microvascolari di ratto e astrociti. Questo sistema si è rivelato un valido strumento per studiare l'effetto della nanoformulazione sulla permeazione trans-barriera di molecole fluorescenti.

In Vitro permeazione di ferritine FITC-caricati attraverso un Rat barriera emato-encefalica: un modello per studiare la consegna di Nanoformulated Molecole

Qui presentiamo un'analisi di permeabilità vascolare del cervello del mouse usando iniezione intraperitoneale di traccianti fluorescenti seguita da aspersione che è applicabile ai modelli animali di disfunzione della barriera emato - encefalica. Un hemi-cervello è usato per valutare quantitativamente permeabilità e l'altro per la visualizzazione dell'elemento tracciante/immunostaining. La procedura richiede 5-6 h per 10 topi.

In Vivo barriera emato - encefalica permeabilità saggio nei topi utilizzando fluorescente etichettati traccianti

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di fornire una tecnica altamente riproducibile per la valutazione in vivo della perturbazione barriera emato - encefalica nei modelli del ratto del colpo ischemico.

Una valutazione In Vivo di rottura della barriera emato - encefalica in un modello del ratto del colpo ischemico

Qui, presentiamo protocolli per studiare danno dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale in vivo. Ci rivolgiamo in particolare come determinare la permeabilità della barriera emato - encefalica e attività della gelatinasi coinvolti nella migrazione dei leucociti attraverso la limitans glia.

Visualizzazione di danno delle barriere endoteliali e gliali dell'unità neurovascolare durante l'encefalomielite Autoimmune Sperimentale In Vivo

Drug targeting per tumori del sistema nervoso centrale è una sfida importante. Qui descriviamo un protocollo per produrre un mimo in vitro del tumore-barriera emato-encefalica utilizzando cellule murine e/o umane e discutere la loro rilevanza per la prevedibilità del sistema nervoso centrale targeting tumorale in vivo.

Fornitura di payload predicting In Vivo utilizzando una tumore-barriera emato-encefalica in un piatto

Questo protocollo descrive una nuova tecnica di misurazione dei tre parametri più importanti della lesione cerebrale ischemica sullo stesso set di campioni cerebrali di roditori. L'uso di un solo campione cerebrale è altamente vantaggioso in termini di costi etici ed economici.

Misurazione dell'edema cerebrale post-ictus, della zona infarct e della rottura della barriera ematica-encefalica in un singolo set di campioni cerebrali dei roditori

È stato sviluppato un metodo per visualizzare lo stravaso di colorante dovuto alla rottura della barriera emato-encefalica (BEE) somministrando due coloranti fluorescenti ai topi in momenti diversi. L'uso del glicerolo come crioprotettore ha facilitato l'immunoistochimica sullo stesso campione.

Valutazione della rottura della barriera emato-encefalica in un modello murino di lesione cerebrale traumatica lieve

Questo protocollo presenta un metodo affidabile per valutare l'integrità della barriera emato-encefalica (BBB) nel modello adulto di pesce zebra (Danio rerio) utilizzando la valutazione basata sul colorante blu di Evan, consentendo un'analisi sia qualitativa che quantitativa dell'interruzione neurovascolare.

Visualizzare il guardiano: la valutazione di Evan basata sul colorante blu della permeabilità della barriera emato-encefalica nel pesce zebra adulto

Scopri come valutare la permeabilità della barriera emato-encefalica mediante iniezione endovenosa di albumina FITC in un modello murino di malattia neurodegenerativa. Questo metodo rapido consente di studiare l'omeostasi cerebrale.

Valutazione della permeabilità della barriera emato - encefalica dallinfusione endovenosa di albumina FITC-labeled in un modello murino di malattia di Neurodegenerative (Video) | JoVE Journal

Valutazione della permeabilità della barriera emato - encefalica dall'infusione endovenosa di albumina FITC-labeled in un modello murino di malattia di Neurodegenerative

Esplora altri video