/
/
Genknackning av CRISPR/Cas9 och cellsortering i makrofag och T-cellinjer
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
Detta protokoll använder fluorescerande reportrar och cellsortering för att förenkla inknöjande experiment i makrofag och T-cellinjer. Två plasmider används för dessa förenklade knock-in experiment, nämligen en CRISPR/Cas9- och DsRed2-uttrycker plasmid och en homolog rekombination donatorplasmid uttrycker EBFP2, som är permanent integrerad vid Rosa26 locus i immunceller.
