Name: Preparazione e analisi di vetrini istologici di bulbi oculari di ratto e topo per la valutazione della retina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Impara la preparazione di vetrini istologici di bulbi oculari di roditori per valutare la retina. Questo metodo permette una chiara visualizzazione cellulare con pochi artefatti, utile per studiare malattie oftalmiche.

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<meta charset="utf8"></head><body>Valutazione dello spessore della retina e della conta degli strati di cellule gangliari nei bulbi oculari dei roditori

<ol><li>Kels, B. D., Grzybowski, A., Grant-Kels, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ocular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human ocular anatomy.</a> Clin Dermatol. 33 (2), 140-146 (2015).</li>
<li>Gupta, M. P., Herzlich, A. A., Sauer, T., Chan, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+anatomy+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal anatomy and pathology.</a> Dev Ophthalmol. 55, 7-17 (2016).</li>
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<li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
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<li>Salman, A., Mcclements, M. E., Maclaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+on+the+regeneration+potential+of+m%C3%BCller+glia+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Insights on the regeneration potential of müller glia in the mammalian retina.</a> Cells. 10 (8), 1957(2021).</li>
<li>Marchesi, N., Fahmideh, F., Boschi, F., Pascale, A., Barbieri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+neurodegenerative+diseases%3A+Interconnection+between+retina+and+cortical+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Ocular neurodegenerative diseases: Interconnection between retina and cortical areas.</a> Cells. 10 (9), 2394(2021).</li>
<li>Enoch, J., Mcdonald, L., Jones, L., Jones, P. R., Crabb, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+whether+sight+is+the+most+valued+sense%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Evaluating whether sight is the most valued sense.</a> JAMA Ophthalmol. 137 (11), 1317-1320 (2019).</li>
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<li>Lin, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+inject+ocular+drug+implants+into+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to inject ocular drug implants into mouse eyes.</a> STAR Protoc. 3 (1), 101143(2022).</li>
<li>Lozano, D. C., Twa, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+rat+schematic+eye+from+in+vivo+biometry+and+the+correction+of+lateral+magnification+in+sd-oct+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of a rat schematic eye from in vivo biometry and the correction of lateral magnification in sd-oct imaging.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6446-6455 (2013).</li>
<li>Castro, G., Navajas, E., Farah, M. E., Maia, M., Rodrigues, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration%2C+integration%2C+survival%2C+and+differentiation+of+stem+cell-derived+neural+progenitors+in+the+retina+in+a+pharmacological+model+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Migration, integration, survival, and differentiation of stem cell-derived neural progenitors in the retina in a pharmacological model of retinal degeneration.</a> ISRN Ophthalmol. 2013, 752161(2013).</li>
<li>Chai, G. R., Liu, S., Yang, H. W., Chen, X. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quercetin+protects+against+diabetic+retinopathy+in+rats+by+inducing+heme+oxygenase-1+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Quercetin protects against diabetic retinopathy in rats by inducing heme oxygenase-1 expression.</a> Neural Regen Res. 16 (7), 1344-1350 (2021).</li>
<li>Igarashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+triple+mutated+aav2-bdnf+gene+therapy+in+a+rat+model+of+transient+iop+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Tyrosine triple mutated aav2-bdnf gene therapy in a rat model of transient iop elevation.</a> Mol Vis. 22, 816-826 (2016).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+efficacy+of+neural+stem+cells+originating+from+umbilical+cord-derived+mesenchymal+stem+cells+in+diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Therapeutic efficacy of neural stem cells originating from umbilical cord-derived mesenchymal stem cells in diabetic retinopathy.</a> Sci Rep. 7 (1), 408(2017).</li>
<li>Dorfman, D., Aranda, M. L., Rosenstein, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environment+protects+the+optic+nerve+from+early+diabetes-induced+damage+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Enriched environment protects the optic nerve from early diabetes-induced damage in adult rats.</a> PLoS One. 10 (8), e0136637(2015).</li>
<li>Barber, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+apoptosis+in+the+retina+during+experimental+and+human+diabetes.+Early+onset+and+effect+of+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Neural apoptosis in the retina during experimental and human diabetes. Early onset and effect of insulin.</a> J Clin Invest. 102 (4), 783-791 (1998).</li>
<li>Steinle, J. J., Kern, T. S., Thomas, S. A., Mcfadyen-Ketchum, L. S., Smith, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+basement+membrane+thickness%2C+pericyte+ghosts%2C+and+loss+of+retinal+thickness+and+cells+in+dopamine+beta+hydroxylase+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Increased basement membrane thickness, pericyte ghosts, and loss of retinal thickness and cells in dopamine beta hydroxylase knockout mice.</a> Exp Eye Res. 88 (6), 1014-1019 (2009).</li>
<li>Polley, E. H., Walsh, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+flat+embedding+and+en+face+sectioning+of+the+mammalian+retina+for+autoradiography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Method%22%5BJournal%5D)">A technique for flat embedding and en face sectioning of the mammalian retina for autoradiography.</a> J Neurosci Method. 12 (1), 57-64 (1984).</li>
<li>Turner, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+toluidine+blue-phloxinate+staining+of+glycol+methacrylate+sections+of+retina+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Stain+Technol%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin toluidine blue-phloxinate staining of glycol methacrylate sections of retina and other tissues.</a> Stain Technol. 55 (4), 229-233 (1980).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+optical+coherence+tomography+and+retinal+histology+in+normal+and+pro23his+retinal+degeneration+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Correlation of optical coherence tomography and retinal histology in normal and pro23his retinal degeneration pig.</a> Transl Vis Sci Technol. 7 (6), 18(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Acetone&nbsp;</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>111024800</tr><tr><td>Dumont Pinzette #5, 11cm, 0,05 x 0,01 mm Punte</td><td>World Precision Instruments</td><td>14095</td><td>pinze microchirurgiche piccole</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Mar-Four</td><td>4P.05.2001/L</td><td>Soluzione acquosa</td></tr><tr><td>Alcool etilico 96 %</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>CH.ET. AL.96%CZDA. </td><td></td>CH</tr><tr><td>Alcool etilico 99,9 %</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>Ch. ETYL. ALK.99,9%BW</td><td>Utilizzare per preparare soluzioni al 70% e all'80% di EtOH</td></tr><tr><td>Glacier - 86 gradi C Congelatore a bassissima temperatura NU-9483E</td><td>NuAire</td><td>13027D0034</td><td>Temperatura di congelamento - 80 gradi C</td></tr><tr><td>Vetrini</td><td>Mar-Four</td><td>MI.15.01673</td><td>Vetrini in vetro smerigliato con campo opaco su entrambi i lati per la descrizione</td></tr><tr><td>Leica CV5030 Vetrino coprioggetti completamente automatizzato</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td>14,04,78,80,101</td><td>Sigillatrice automatica per vetrini&nbsp;</td></tr><tr><td>Ematossilina di Mayer</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>124687402</tr><tr><td>Stampi con base in metallo 15 mm x 15 mm</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td></td>3803081</tr><tr><td>Microme HM 340 E</td><td>Thermo Scientific</td><td>90-519-0</td><td>Microtomo</td></tr><tr><td>Lame da barba Microtome</td><td>Mar-Four</td><td>HI. N.35</td><td>Angolo di taglio 35&deg;</td></tr><tr><td>Cassetta per biopsia Micro-Twin</td><td>Mar-Four</td><td>LN.13874550</td><td></td></tr><tr><td>Processore di tessuti ibrido a microonde</td><td>Milestone</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multistainer Leica ST5020</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td></td><td>Coloratore automatico per vetrini&nbsp;</td></tr><tr><td>Scanner per vetrini NanoZoomer 2.0-HT</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td>Scanner per vetrini istopatologici</td></tr><tr><td>NDP.view2 Software di visualizzazione</td><td>delle immagini Hamamatsu</td><td>U12388-01</td><td>Software di visualizzazione delle immagini</td></tr><tr><td>Paraffin Pathowax Plus</td><td>Mar-Four</td><td>4P. PWP.010</td><td>Temperatura di fusione 56 &deg; C - 58 gradi C</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>441244-1KG</td><td>Preparare una soluzione al 4% in PBS</td></tr><tr><td>PBS Compresse</td><td>Merck Millipore</td><td>524650-1EA</td><td>Utilizzare per preparare una soluzione di soluzione salina tampone fosfato, secondo le istruzioni del produttore</td></tr><tr><td>Provette per microcentrifuga Pierce, 1,5 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>69715</td><td></td></tr><tr><td>Frigorifero-congelatore EN14000AW</td><td>Electrolux</td><td>925032562-00</td><td>refrigerazione 4 gradi C</td></tr><tr><td>Lama per bisturi</td><td>Swann-Morton</td><td>T.OST. SKAL00.024</td><td></td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Chempur&nbsp;</td><td></td><td></td>427720906</tr><tr><td>Forbici a molla SuperCut, 12,5 cm, Curved</td><td>World Precision Instruments</td><td>501925</td><td>Nastro per forbici microchirurgiche curve e piccole</td></tr><tr><td>Mar-Four</td><td>KP-3020/SMRH001</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Chempur&nbsp;</td><td>Ch. KSYL.5l.METAL.OP&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

preparazione e analisi di vetrini istologici di bulbi oculari di ratto e topo per la valutazione della retina

Preparation and Analysis of Histological Slides of Rat and Mouse Eyeballs to Evaluate the Retina

Con l'uso del protocollo presentato, l'anatomia e la morfologia di strutture specifiche del bulbo oculare possono essere valutate in dettaglio. Il nostro team si concentra sulla ricerca dei meccanismi patologici della neurodegenerazione nei disturbi della retina, come il glaucoma, la retinopatia diabetica e la retinopatia ipertensiva. Per valutare le caratteristiche della neurodegenerazione nella retina, abbiamo valutato l'RT (bulbo oculare del topo -Figura 2, bulbo oculare del ratto -Figura 3), ONL, OPL, INL e IPL (bulbo oculare del topo -Figura 4, bulbo oculare del ratto -Figura 5) e il numero di cellule del GCL (bulbo oculare del topo -Figura 6, bulbo oculare del ratto -Figura 7). Ci si aspetta che la RT e le cellule del GCL siano più alte nella retina centrale e più basse nella periferia. Tagliando il bulbo oculare a livello della pupilla, si ottengono sezioni trasversali attraverso la retina centrale (al polo posteriore del bulbo oculare) e periferica (vicino al corpo ciliare) su un vetrino.
Mentre il conteggio delle cellule GCL può essere considerato abbastanza oggettivo, la distorsione causata dal sezionamento asimmetrico può influenzare i risultati della misurazione degli strati retinici specifici. Per evitare distorsioni, le misurazioni possono essere presentate come il rapporto tra lo spessore di un dato strato e il valore RT: ONL/RT, OPL/RT, INL/RT e IPL/RT.
<img alt="Diagramma anatomico dell'occhio che mostra le parti etichettate: retina, sclera, cristallino, cornea, nervo ottico, macula." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
Figura 1: Anatomia del bulbo oculare. Sezione trasversale sagittale di un bulbo oculare con l'etichettatura delle sue strutture più grandi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig01large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Immagine al microscopio della sezione trasversale della retina, che mostra gli strati di tessuto, misurazione dello spessore 125 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 
Figura 2: Spessore della retina in un topo. Misurazione dello spessore retinico (RT) dalla membrana limitante esterna alla membrana limitante interna nel punto più largo, contrassegnato dalla barra verde. Bulbo oculare del topo (ceppo: C57Bl/6, età: 44 settimane). La barra della scala nell'angolo sinistro mostra la lunghezza di 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Sezione istologica che mostra strati retinici, spessore 53,4 μm; Immagine al microscopio, studio dei tessuti." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 
Figura 3: Spessore retinico in un ratto. Misurazione dello spessore retinico (RT) dalla membrana limitante esterna alla membrana limitante interna nel punto più largo, contrassegnato dalla barra verde. Bulbo oculare del ratto (ceppo: Lewis, età: 16 settimane). La barra della scala nell'angolo sinistro mostra la lunghezza di 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Diagramma della sezione trasversale del tessuto retinico; strati misurati: IPL, INL, OPL, ONL; analisi al microscopio." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 
Figura 4: Strati retinici in un topo. Misurazione dello spessore dei singoli strati retinici: strato nucleare esterno (ONL), strato plessiforme esterno (OPL), strato nucleare interno (INL) e strato plessiforme interno (IPL), contrassegnati da barre verdi. Bulbo oculare del topo (ceppo: C57Bl/6, età: 44 settimane). La barra della scala nell'angolo sinistro mostra la lunghezza di 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig04large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Immagine al microscopio della sezione trasversale retinica con strati marcati: OPL, ONL, IPL, INL; Barra di scala 100 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 
Figura 5: Strati retinici in un ratto. Misurazione dello spessore dei singoli strati retinici: strato nucleare esterno (ONL), strato plessiforme esterno (OPL), strato nucleare interno (INL) e strato plessiforme interno (IPL), contrassegnati da barre verdi. Bulbo oculare del ratto (ceppo: Lewis, età: 16 settimane). La barra della scala nell'angolo sinistro mostra la lunghezza di 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig05large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Sezione istologica che mostra la struttura cellulare stratificata, immagine al microscopio, analisi dei tessuti, scala 500 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> 
Figura 6: Conteggio delle cellule dello strato di cellule gangliari in un topo. Il metodo di conteggio delle cellule dello strato di cellule gangliari (GCL) lungo la retina sulla lunghezza di 500 μm. I corpi unicellulari sono stati identificati come corpi rotondi colorati con ematossilina situati all'interno dello strato di cellule ganglionari. Le celle sono contrassegnate da cerchi neri. Bulbo oculare del topo (ceppo: DBA/2, età: 44 settimane). La barra della scala nell'angolo sinistro mostra la lunghezza di 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig06large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Vetrino istologico, sezione trasversale della retina; strati di tessuto visibili; Esame microscopico, scala 100 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66663/66663fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> 
Figura 7: Conteggio delle cellule dello strato di cellule gangliari in un ratto. Il metodo di conteggio delle cellule dello strato di cellule gangliari (GCL) lungo la retina sulla lunghezza di 100 μm. I corpi unicellulari sono stati identificati come corpi rotondi, colorati con ematossilina, situati all'interno dello strato di cellule ganglionari. Le celle sono contrassegnate da cerchi neri. Bulbo oculare del ratto (ceppo: Lewis, età: 16 settimane). La barra della scala nell'angolo sinistro mostra la lunghezza di 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66663/66663fig07large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Preparazione e analisi di vetrini istologici di bulbi oculari di ratto e topo per la valutazione della retina

A rodent eyeball is a powerful tool for researching the pathomechanisms of many ophthalmic diseases, such as glaucoma, hypertensive retinopathy, and many ...

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Il protocollo qui descritto è per la valutazione strutturale di una preparazione retinica a montaggio intero. Ciò include le descrizioni della dissezione tissutale, il montaggio su un inserto di membrana in politetrafluoroetilene idrofilizzato (PTFE), il caricamento del bolo con marcatori fluorescenti e un confronto della fissazione con carbodiimmide e paraformaldeide per l'analisi immunoistochimica dei componenti cellulari e sinaptici.

Protocollo ottimizzato per la preparazione dell'intero montaggio retinico per l'imaging e l'immunoistochimica

La retina roditore è da tempo riconosciuta come finestra accessibile al cervello. In questa nota tecnica fornendo un protocollo che utilizza il modello murino di retinopatia indotta da ossigeno per studiare i meccanismi che portano al fallimento di rigenerazione vascolare nel sistema nervoso centrale dopo lesione ischemica. Il sistema descritto può anche essere sfruttata per esplorare le strategie per promuovere la ricrescita dei vasi sanguigni funzionali all'interno della retina e del SNC.

Assessment of Vascular rigenerazione nel SNC Utilizzo del Retina mouse

Dimostriamo di tre tecniche di preparazione dei tessuti differenti per la visualizzazione di immunohistochemical di periciti microvascolare del ratto, vale a dire, cryo-sezioni, intero-monta e ipotonico isolamento della rete vascolare.

Cryo-sezioni della retina, intero-monta e ipotonico Vasculature isolato preparazioni per la visualizzazione di Immunohistochemical dei Pericytes microvascolare

Questo rapporto descrive metodi completi per la preparazione di sezioni della retina del topo congelato per l'immunohistochimica (IHC).  I metodi descritti includono la dissezione della coppa posteriore oculare, la fissazione della paraformaldeide, l'incorporamento nei supporti e nell'orientamento dei tessuti della temperatura di taglio ottimale (OCT), il sezionamento e l'immunostaining.

Preparazione delle sezioni ricrello della retina

La retinopatia diabetica è una delle principali cause di cecità. L'istologia, il test di rottura della barriera emato-retinica e l'angiografia a fluorescenza sono tecniche preziose per comprendere la fisiopatologia della retina, che potrebbe migliorare ulteriormente l'efficiente screening farmacologico contro la retinopatia diabetica.

Valutazione fisiopatologica retinica in un modello di ratto

L'obiettivo di questo protocollo è quello di caratterizzare un nuovo modello di neurodegenerazione glaucomatosa basato sulla cauterizzazione termica a 360° del plesso vascolare limbare, inducendo ipertensione oculare subacuta.

Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per il glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori

Questo articolo presenta un protocollo per la micro-dissezione oculare nei roditori. Il processo comporta l'enucleazione del bulbo oculare insieme alla membrana nittitante (cioè la terza palpebra). Questo è poi seguito dalla separazione delle conchiglie oculari posteriori e anteriori.

Microdissezione dell'occhio del roditore

I modelli murini possono essere strumenti utili per studiare la biologia dell'epitelio pigmentato retinico (RPE). È stato stabilito che i topi possono sviluppare una serie di patologie RPE. Qui, descriviamo un protocollo di fenotipizzazione per chiarire e quantificare le patologie RPE nei topi utilizzando luce, elettrone di trasmissione e microscopia confocale.

Un protocollo per valutare e quantificare le patologie dell'epitelio pigmentato retinico in modelli murini di degenerazione maculare legata all'età

Viene descritto un protocollo per la preparazione di criosezioni retiniche di topo e l'esecuzione dell'immunocolorazione sui fotorecettori. Questo articolo consente ai ricercatori di produrre in modo coerente sezioni congelate della retina di topo con morfologia ben conservata e risultati di immunocolorazione di alta qualità.

Criosezione e immunocolorazione della retina del topo

B7-H1 (PD-L1) e il suo legame al PD-1 forniscono una maggiore tumore segnale indotto immunosoppressiva nel microambiente del tumore. Una tecnica di colorazione immunoistochimica per caratterizzare l'espressione e la localizzazione di B7-H1 in adenocarcinoma pancreatico è descritto qui.

Colorazione immunoistochimica di B7-H1 (PD-L1) in paraffina incorporate diapositive di tessuto pancreatico Adenocarcinoma

Impara la preparazione di vetrini istologici di bulbi oculari di roditori per valutare la retina. Questo metodo permette una chiara visualizzazione cellulare con pochi artefatti, utile per studiare malattie oftalmiche.

Preparazione e analisi di vetrini istologici di bulbi oculari di ratto e topo per la valutazione della retina

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