(紫外-可視) 紫外可視分光法

1. 分光計をキャリブレーションします。

1. 紫外可視分光光度計をオンにし、適切な期間 (約 20 分) それらを安定させるためのウォーム アップするランプを許可します。
2. サンプルの溶剤とキュベットを埋める、外側がきれいかどうかを確認します。これは空白として使用し、溶媒による吸収や散乱による光損失を考慮を助けます。
3. 分光計のキュヴェットを配置します。正しくキュヴェットを合わせて確認してください、頻繁にキュヴェットが (溝があります) 処理のためのもので光を当てる必要はありません 2 つの側面を持っています。
4. ダミーのための読書を取る。吸光度は、最小限にする必要がありますが、任意の吸光度を将来のサンプルから減算する必要があります。いくつかの楽器は、空白データを格納し、自動的に減算を実行可能性があります。

2. 吸光度スペクトルを実行します。

1. サンプルでキュヴェットを埋めます。転送が定量的であることを確認、サンプルで二回キュベットをリンスし、完全な 3/4 の塗りつぶします。外に指紋等のきれいなことを確認します。
2. 正しい方向に分析計のキュヴェットを配置します。
3. 周囲の任意の光を防ぐためにキュベットをカバーします。
4. 異なる波長をスキャンし、吸光度を収集器により吸光度スペクトルを収集します。波長範囲は、特定のサンプルについての情報を設定できますが、200-800 nm の範囲が標準。フォト ダイオード アレイ計測器は 1 つ実行中全体の吸光度スペクトルを収集することができます。
5. 収集された吸光度スペクトルから吸光度の最大値 (λ_max) を決定します。Λ_maxで誤差の見積もりを取得するスペクトルのコレクションを繰り返します。
6. 較正曲線をするためには、さまざまな濃度の異なるサンプルの紫外-可視スペクトルを収集します。分光線形の範囲に限られているし、1.5 より大きい吸光値を測定することはできません。サンプルの吸光度値が測定器の線形範囲外なら、線形の範囲内の値を取得するサンプルを希釈します。

3 紫外可視分光法を用いた速度実験

1. 紫外-可視は、時間をかけて吸光度の変化を調べることによって反応速度論の実験に使用できます。反応速度論の実験では、サンプルの最初の読み取りを取る。
2. すぐに化学反応を始める試薬を追加します。
3. それをかき混ぜるもサンプルと混合します。少量を追加すると、これはキュベットで行うことができます。または、サンプルと試薬を混合し、迅速測定キュベットにいくつかを注ぐ。
4. 時間をかけて、λ_maxのための興味の analyte の吸光度を測定します。測定されている試薬を使用している場合 (すなわち吸光度が上がって吸収する以下の試薬があるので)、腐食は反作用の順序を指定します。
5. 検量線を使用すると、吸光度値濃度に変換、検体濃度対時間のプロットを作る。そこから、反応速度定数を決定する、適切な式でこのグラフを合うことができます。