アダルトゼブラフィッシュの全腎骨髄の移植

私の名前はジョスリン・ブランクです。私はローレン・Zの研究室の技術者で、造血とゼブラフィッシュの研究をしています。ですから、特に造血についてもっと学ぼうとしています。

これが一般的な造血の一種の概略図です。ですから、自己再生可能な長期のメタ幹細胞から始め、短期の幹細胞を作ることもでき、それによって前駆細胞をリンパ系前駆細胞と骨髄系前駆細胞にすることができます。そして、これらはそれぞれリンパ球または骨髄細胞を作ります。

ですから、私たちは、HSCが性別のためにどのように作ることができるか、そしてそれが分化した細胞を作るという、この最初の部分に非常に興味を持っています。移植の2日前に25グレイで野生型の魚を放射します。そして、クリーンなシステムがあり、蛍光トランスジェニックドナーからドナー骨髄に移植することができ、このようにして、移植する細胞を観察し、移植日に血液を再増殖させることができるかどうかを確認することができます。

まで待ってください、鰓が動くのが見えなくなります。だから、これをこんな風に皿に乗せて、プラットフォームにして、その腹のすぐ下に小さな切り込みを入れて、ハサミを挿入して腹を切り落とすんだ。これ。はい、それで今はここまでずっと切られていて、魚を開いたままにしているようなものです。

そして、もう片方のオルガンで、もう片方のオルガンを引き出します。つまり、腎臓は魚の背中に沿っているのです。私の良い鉗子を取って、上部をつかむと、剥がれ落ちて、そこにあるストリップのようなものを入れることができるので、今度はそれを円錐形のチューブに移して、それを上下に動かすだけです。

腎臓片を砕くには、10ミルの注射器と18.5ゲージの針をチューブに移し、PBS溶液で満たします。5, 000 RRP Mでスピンダウンし、p bsmの中断またはミクロンの細胞ストレーナーのためにこれについて。私はストレーナーに負担をかけたいのですが、あなたが持っている大きなピースをキャッチすることはできません。

Resus懸濁液を1ミルPBSプラスカウントセルに注ぎます。移植する細胞の数を計算し、ヘパリンで魚とトライコート、パイプチップを犠牲にします。ピペットチップでギルを刺し、PBS溶液に血液を加えます。

スピンダウン resus 中断 スピンダウン 再び。腎臓全体の骨髄と同様に、40ミクロンのフィルターカウントの細胞をろ過します。そこで、シリンジに細胞を5マイクロリットルまで充填し、シリンジに気泡がないことを確認します。

魚は注射前にトリカで麻酔されます。注射には、ハミルトン注射器を使用して、5マイクロリットルの全腎臓骨髄と末梢血溶液を各レシピエントの心臓に注入します。.そして、シリンジを少し後ろに挿入します。

心はここにあるので、そこに行きたいです。私はそれを突っ込むつもりです、非常に浅いままで。そして、心がどこにあるのか、ここをつつくつもりです。

また、時には血が噴き出すこともありますが、それは心臓に当たったことを意味します。そうでない場合もあります。血が見当たらないので、とりあえず注射をします。

それです。感染を避けるために、魚を1週間流れから遠ざけてください。ケージごとに約5〜10匹の魚を飼い、毎日死者を取り除き、毎日手動で水を交換します。

つまり、腎臓の骨髄は、幹細胞が存在し、そこで子孫を作る場所だと考えています。つまり、人間の骨髄のようなものです。ですから、人間に骨髄インプラントをするとき、動物の心臓に骨髄を移植するときも全く同じ考え方です。

これは、さまざまな方法を試しただけです。これは、細胞を循環させる最も効果的な方法です。つまり、腎臓骨髄は、HSPがそのタンパク質性をすべて形成できる場所です。

そのため、HSEは腎臓の骨髄への道を見つけなければならず、そのためには循環を通じてこれを行うことができます。骨髄の再増殖が得られた場合、それを長期的な血液幹細胞に移植することは、それがこれらの細胞をすべて再増殖して作ることができる唯一の細胞であるため、それを移植することがわかります。それが私たちが最も関心を持っていることです。

ですから、実際の注射は間違いなく、多くの練習が必要で、多くの魚が死んでしまうと思います。そして、基本的にそれをハートに取り込もうとしているのですが、それがハートに取り込まれているかどうかは必ずしもわからないので、見るのが非常に難しいです。また、注射で魚を殺さないようにしています。

そのため、注射をしていると、他の内臓に当たって死に至ったり、注射後に感染症にかかったりする可能性があります。そこで、私たちが試みていることの一つは、通常、注射の翌日に多くの魚が死んでしまうということです。ですから、私たちが今試みているのは、魚を流れに戻さないように、できるだけ無菌状態に保つことです。なぜなら、魚が水中で感染する可能性があるからです。

ですから、私たちは彼らを別々に保ち、毎日水を交換し、移植直後の重要な時期に彼らをより健康に保つために、水に抗生物質を追加することを考えています。だから、突然変異体を研究するために使うことができるのです。突然変異体が幹細胞に欠陥があると考える場合、それらから野生型の魚に骨髄を移植することができます。

あるいは、野生型の骨髄をそれらの魚に移植し、幹細胞自体や幹細胞のニッチに何らかの問題があるかどうかを確認することもできます。そのため、何らかの理由で幹細胞が腎臓の骨髄にたどり着くことができず、それが問題になります。ですから、魚が接ぎ木できるかどうかに基づいてそれを測定することができました。