チック EX卵文化と EX卵 CAMアッセイ：それが実際にどのように動く

ニワトリ漿尿膜（CAM）は、血管新生と腫瘍形成を研究するユニークな、自然に免疫不全支える文化環境です。このビデオの記事では、ニワトリの異なるステップを示しています EX卵文化、潜在的に血管新生物質の応用とCAMの表面上の腫瘍細胞や組織の成功を接種。

こんにちは、スーザン・パーです。私はドイツのブルク・エゼン大学の生理化学研究所、生化学内分泌学の学科から来ました。こんにちは、ダニエル・ゼ・バシアン・ドールです。

私はスーザンと同じ機関から来ました。こんにちは、バーグ大学解剖学研究所神経学科のマンです。CH X文化と共同膜エッセイが実際にどのように機能するかをお見せします。

それでは、研究室に行ってみましょう。最近の実験的研究のほとんどでは、チコ膜であるカムは、卵殻を通して窓を切ることによって露出し、実験は卵で行われたため、CAMのアクセシビリティと、効果の観察と写真記録の可能性に大きな制限が生じました。ニワトリ胚のX ovo培養は、カムとニワトリ胚のアクセシビリティを大幅に促進します。

胚の影響と実験的操作のin vivoでの文書化を容易にする心臓の鼓動をご覧ください。私たちのビデオ記事では、多数の科学的問題に対するX ovo培養の成功した適用のステップバイステップのデモンストレーションを提供します。卵は、移動トレイ付きのインキュベーターで孵化されます。

ここでは、発熱体とトレイムーバーが卵を1日12回連続回転させているのを見ることができます。インキュベーターの底にあるプラスチック容器に水を入れることで湿度を60%に保ち、インキュベーション温度を37.5°Cに設定してからインキュベーションを開始します。卵殻から汚れ、羽毛、排泄物を慎重に取り除き、エタノールや消毒剤で卵子を機械的に拭きますが、胚の生存率を大幅に低下させます。

卵はインキュベーターの移動トレイ上に水平に配置されます。自由な回転を可能にするために、個々の卵の間に十分な距離を保つようにしてください。孵卵後 72時間、卵子をインキュベーターから取り出し、胚が存在する卵の上面に鉛筆で印を付けます。

胚はある程度回転に抵抗し、ここに留まるので より良い感触のために、卵を割るために手袋を使用しないでください、しかし手は70%エタノールで消毒されるべきです。卵は、上部に鉛筆のマークを付けて水平に保持され、三角形の磁気攪拌バーの端にひび割れます 割れ手順中の力を最大限に制御するために、肘をベンチトップに載せないでください。卵白の漏れがひび割れているときに卵殻と卵膜が開いていることは、卵膜に穴が開いているという安全な兆候であることが重要です。

卵は愛国者の皿の底の近くに保たれています。この最初の開封手順中に卵白がさらに漏れるのを防ぐために、パトリオットディッシュの底にある卵白がまだ卵の内側の残りの部分に接続されていることが重要です。これにより、親指と中指で卵の割れ目や赤道を通る経絡に優しく圧力をかけることで、卵黄を固定する卵の内部に真空が生じるため、卵内容物の真空化と押し出しを調整することができます。

その後、卵の内容物は、卵黄が損傷を受けずにペトリ皿に移すことができます。卵をそっと持ち上げ、殻の両半分を慎重に分離すると、 ex ovo培養物 次にトレイに置き、インキュベーターに戻して、摂氏37.5〜38.2度、湿度70%に保ちます。二酸化炭素や酸素の供給は必要ありません。

蓋と皿の間にスペーサーがある特別な愛国者の皿と換気グリッド付きのインキュベーターを使用する場合は、換気グリッドを半分開いたままにしておく必要があります。オートクレーブフィルターペーパーは、カムに塗布される液体物質の支持材料として使用されます。これは、カムの刺激が最も少ないようです。適用部位は、胚とカムの境界との間の中間にあるべきであり、そうでなければ胚は透過光の影響の顕微鏡観察を妨げる。

ここでの液体アトロピンは、乾燥を避けるためにフィルターをカムに置いた直後に塗布する必要があります。追加の用量または緩衝液を毎日再適用する必要があります。.カムが完全に開発されると、最大6つの異なるサンプルを適用することができ、その効果を比較できます 1ミリリットルからカットされた単一のカムリング ピペットチップは、重量を最小限に抑え、カムのくぼみを避けるために、できるだけ薄くカットする必要があります。

次に、リングをカムに適用し、セルをピペットでリングに送り込みます。ハミルトンマイクロリットルシリンジは、70%エタノールで数回すすぎ、最後に滅菌リン酸緩衝生理食塩水またはPBSで、マイクロシリンジは、準備された細胞懸濁液で慎重に充填されますが、すぐにシリンジ針でカムと眼層を貫通し、細胞懸濁液を連続的に注入します。針は、注入された細胞懸濁液の損失を避けるために、目に数秒間留まる必要があります 漏れチェックX Ovoによって。

3日間インキュベートした卵の培養物は、四肢芽のドナーとして使用されます。胚は、接続された卵黄血管から解剖されます。円を切ることにより、胚は小さなドレンスプーンを使用して冷たく滅菌されたPBSで満たされたペトリ皿に移され、攪拌によって洗浄されます。

次に、胚を滅菌PBSで満たされた新鮮なペトリ皿に移し、周囲の膜から解放し、細い鉗子で慎重に引き裂きます。四肢の芽は、できるだけ体に近い鉗子で切り離され、つかまれて、生後8〜10日の宿主鶏のカムに移されます。所望の塗布部位で、カムは鉗子の1つの塊で穏やかにこすり落とすことによって選択的に外傷を負う。

次に、グラフトをつかみ、鉗子の他のチャンクと一緒にカムに重ねます。生け贄の雌マウスはボードに固定されています。腹壁は正中線に沿ってカットされた70%エタノールで湿らせ、皮膚フラップはピンで横に固定されています。

子宮は腹部から取り出され、分離され、ビーカーに移されます。冷たいPBS付き。胚膜は、デモンストレーション目的で鉗子を使用して慎重に除去されます。

ここでは、四肢のつぼみの視認性を高めるために、16日齢のマウス胚を示しています。最適なグラフト結果が得られるだけです。ただし、生後10日から13日の胚の四肢芽を用いる場合は、四肢の芽を切り落とすか、できるだけ体に近いところに細い鉗子を使用します。

所望の塗布部位では、CAMは鉗子で穏やかに掻き取ることによって選択的に外傷を負います。次に、手足の芽をつかみ、生後8〜10日の宿主ニワトリのCAMに移します。グラフトは、余分なPBSを除去するための最終的なグラフトが意図されていないカムの側面に1回または2回配置されます。

移植片は、血管腫瘍のY字分岐部の近くのカムに理想的に配置されます。生検は、滅菌メスによって1〜2立方ミリメートルの小片に切断されます。生検の表面から材料を採取すると、筋肉や結合組織による汚染のリスクが高まります。

所望の塗布部位で、CAMは穏やかな掻き取りによって選択的に外傷を負います。生検サンプルのコアからの一部を、生後8〜10日の宿主ニワトリのCAMに移植します。移植片は、血管のY字分岐部の近くのカムに理想的に配置されます。

その後、グラフトは最小限のPBSを取り付けた状態でCAMに移されます。軽い圧力が加えられて、グラフトがカムのくぼみに操作される場合があります。宿主のヒヨコの胚は斬首によって殺されます。

グラフトが取り付けられたCAMは、円形のカットによって除去され、PBSで満たされたペトリ皿に移されます。過剰なCAMは、以前の付着部位を除いてグラフトから切り取られます。再度、目的のアプリケーションサイトで。

新しい宿主ニワトリ胚のカムは、穏やかな掻き取りによって選択的に外傷を負い、移植片は最小限のPBSが付着した状態で第2の宿主のカムに移されます。CH Xまたは文化が実際にどのように機能するかを示しました。Orvalの実験と比較した場合の利点を示し、その応用例をいくつか紹介しました。

というわけで、これだけです。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。