Establishing the 3D Stromal Monoculture

doi:10.3791/200256

ジャーナル

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生物工学

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3D間質モノカルチャーの確立

JoVE Journal
生物工学

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JoVE Journal 生物工学

Establishing the 3D Stromal Monoculture

3D間質モノカルチャーの確立

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01:46 min

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May 19, 2023

DOI:

10.3791/200256-v

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10.3791/200256-v

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01:46 min

May 19, 2023

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Lisa A. Krattiger¹, Maria Mitsi², Benjamin R. Simona², Martin Ehrbar¹

¹Department of Obstetrics,University Hospital Zurich, University of Zurich, ²Ectica Technologies AG

筆記録

まず、hBM-MSCのチューブを取り、遠心分離によってペレット化します。上清を捨て、ペレットを適量の基礎培地に再懸濁する。次に、それぞれの成長因子を添加した必要量の基礎培地を含む50ミリリットルの円錐形遠沈管を準備します。

最後に、ストック溶液からhBM-MSCを1〜66.67に希釈して、1ミリリットルあたり10〜5番目の細胞に1.5倍の濃度を達成します。96ウェルヒドロゲルプレートを覆っているポリプロピレン接着フィルムを剥がしてプレートを播種する。アスピレーターの先端をウェルの壁に向けて配置し、ウェルの内側の端に向かってゆっくりと移動することにより、ヒドロゲルを覆っている貯蔵バッファーを注意深く吸引します。

播種中、細胞懸濁液を定期的に混合して混合物を均一に保ち、プレートの各ウェルに200マイクロリットルの細胞懸濁液を加えます。次に、加湿雰囲気中で培養物を摂氏37度および二酸化炭素5%に維持する。あるいは、吸引ノズルをプレートキャリアからウェルの端に向かって少なくとも3.8ミリメートル設定した自動プレートウォッシャーを使用し、貯蔵バッファーを吸引します。

細胞を血清学的ピペットで混合し、等数の細胞をプレートのウェルに分注することにより、プレートを播種します。5倍の対物レンズを備えた明視野顕微鏡で培養物の発達を監視し、播種後約30分で参照画像を取得して、添加した細胞数を評価します。