Establishing the 3D Stromal-Endothelial Cell Co-Culture

doi:10.3791/200257

ジャーナル

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生物工学

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3D間質-内皮細胞共培養の確立

JoVE Journal
生物工学

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JoVE Journal 生物工学

Establishing the 3D Stromal-Endothelial Cell Co-Culture

3D間質-内皮細胞共培養の確立

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01:48 min

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May 19, 2023

DOI:

10.3791/200257-v

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10.3791/200257-v

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May 19, 2023

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Lisa A. Krattiger¹, Maria Mitsi², Benjamin R. Simona², Martin Ehrbar¹

¹Department of Obstetrics,University Hospital Zurich, University of Zurich, ²Ectica Technologies AG

筆記録

まず、80〜100%のコンフルエンスレベルに成長させたGFP-HUVECのペレットを取り、細胞を適切な量の基礎培地に再懸濁して、ストック溶液1ミリリットルあたり10〜7細胞の1倍の濃度にします。それぞれの成長因子を添加した必要量の基礎培地を含む50ミリリットルの円錐形遠心管を準備します。ストック溶液からGFP-HUVECを1〜66.67に希釈して添加し、マイクロリットルあたり10〜5番目のセルの1.5倍の濃度を達成します。

次に、間質単培養を含むプレートから培地を吸引し、調製したGFP-HUVECs懸濁液のウェルあたり200マイクロリットルを追加します。加湿雰囲気中で5%二酸化炭素中で摂氏37度でインキュベートし、3〜4日ごとに培地を交換します。5倍の対物レンズを使用した明視野顕微鏡および蛍光顕微鏡による培養の進展をモニターします。

GFP-HUVECのみを示す明視野画像と蛍光画像から培養の違いを観察することができました。培養物は成長因子なしではあまり発達していないように見えたが、FGF-2の存在下ではより速い発達が観察された。対照的に、明視野画像は、BMP-2の存在下で最も密度の高い培養を示した。

しかし、成長因子含有条件と最も広範で相互接続されたネットワークの両方で形成された血管様ネットワークがFGF-2で形成された。