乳腺脂肪パッドへの同所性注射:マウスにおける乳がんの確立

まず、目的の乳がん細胞株を培養します。手術の前日にマウスの腹部を剃り、脱毛クリームを使用して毛皮を取り除き、鼠径乳首を露出させます。手術当日は、細胞を採取し、マウスに麻酔をかけ、つま先のつま先つまみに対する反応がないことを確認します。ピンセットを使用して、乳首の周りの皮膚をつまんで、隆起したトンネルを作ります。

次に、収集した細胞の注射器で、皮膚を突き刺します。針は、先端が乳首に近づくまでトンネルをたどる必要があります。針先を乳首のすぐ下にある乳房脂肪パッドにゆっくりと動かします。ピンセットを取り外して針でスキンテントを形成し、ゆっくりと細胞を注入します。

最後に、乳首を囲む丸い隆起を邪魔しないように注意しながら、シリンジを引っ込めます。注入された細胞とその後の腫瘍はルシフェラーゼを発現し、生物発光イメージングを使用して追跡できます。プロトコルの例では、マウスの同所性乳がんの確立を示します。手術前日に、レシピエントマウスを手動で拘束し、動物の腹側を上にして、第4乳首の周りを剃る毛皮まで向けます。

脱毛クリームの薄層で毛皮を拭きます。蒸留水を使用して、30〜60秒後にクリームを取り除きました。そして、柔らかいペーパータオルでマウスを乾かします。手術当日は、氷上の滅菌マイクロ遠心チューブ内で、マウス乳がん細胞懸濁液をPBS濃度1ミリリットルあたり2×10〜5細胞に希釈します。

各注射の前に、マウスあたり50マイクロリットルの細胞を含む.45 x 16針を備えた1ミリリットルの注射器を1つロードします。そして、鎮静された各動物でつま先のつま先つまみに対する反応の欠如を確認します。動物の目に軟膏を塗り、ピンセットを使用して最初のマウスの4番目の乳首の周りの皮膚をテントで覆い、注射器が続くトンネルを作成します。

ベベルを上に向けてシリンジを持ち、乳首から5〜10ミリリットルのところで皮下に入り、針先が乳首にほぼ到達するまでトンネルをたどります。- ピンセットを使用して最初の乳首の周りの皮膚をテントで覆うと、注射器がたどるトンネルが作成されます。針はピンセットの先端の間に入り、組織に押し込むのではなく、乗り上げる必要があります。針の先端を慎重に乳房の脂肪パッドの中に移動し、斜角が乳首の下になるまで

- 挿入時には、針先を乳房脂肪パッドに慎重に動かし、斜角が乳首の下に来るまで、細胞を正しい場所に確実に送達するための抵抗を感じることを確認します。すべての細胞を注入したら、針を少し横に回し、シリンジをゆっくりと引っ込めます。綿棒を使用して、針の傷に10〜20秒間圧力をかけ、液体が浸透していないことを確認します。

注入された乳首は、乳首が中央にある透明な白い平らな球体として表示されるはずです